RECHERCHE DE LA CHOLESTÉRINE

Si cette substance existe chez le Sclerostomum eguinum, nous devons la décéler dans l'extrait éthéré de ce parasite (1а cholestérine, insoluble dans l'eau, est soluble dans l'éther).

L'extrait éthéré, desséché, composé de graisses, de savons et d'acides gras libres, est mis à bouillir au réfrigérant ascendant avec 125 cc d'alcool absolu et 3 pastilles de potasse caustique, pendant 3 heures. Puis, on sature complètement par So* Н? dilué et on ajoute un léger exces de cet acide; la liqueur se trouble (acides gras). On reprend par une solution aqueuse étendue de carbonate sodique pour dissoudre les acides gras à l'état de savons de soude. ;

La liqueur aqueuse, savonneuse, est épuisée à froid un grand nombre de fois par le chloroforme (la cholestérine est trés soluble dans le chloroforme).

Pour rechercher la cholestérine dans la solution chloroformique, on a pratiqué les essais suivants :

1° Une partie de la solution a été doucement évaporée au bainmarie; puis, les dernieres portions ont été évaporées à l'air libre. A l'examen microscopique du résidu, pas de cristaux (les lamelles rhomboidales de la cholestérine sont caractéristiques) ;

2° Réaction de Schiff. — Le résidu d'évaporation est chauffé, au bain-marie, au contact d'un peu d'acide azotique (dans ces conditions, la cholestérine donne une coloration jaune que l'ammoniaque fait virer au rouge-vif). Négative ;

eg —

3° Réaction de Liebermann-Burchard. — Le résidu d'évaporation est dissous dans un peu de chloroforme. A cette solution placée dans un tube à essai, on ajoute 2 à 3 gouttes d'anhydride acétique et goutte à goutte SO^ H? concentré (il se fait une coloration rose, puis bleue, qui passe ensuite au vert-pré en présence de cholestérine. La couleur verte apparait de suite s'il y a trés peu de cholestérine). Négative;

4° A la solution chloroformique, on ajoute un peu de 50* Н? pur. A la surface de séparation des deux liquides, il ne se développe pas la coloration rouge caractéristique. Donc, pas de cholestérine. Cette constatation est fortintéressante, car l'absencedecholestérine dans l'extrait éthéré explique l'activité hémolytique de cet extrait. En effet, Н. Iscovesco et J. Foucaup ont montré que la cholestérine aun pouvoir antihémolytique considérable à l'égard des savons (4).

(1) Н. Iscovesco et Foucaup, Le rôle antihémolytique de la cholestérine à l'égard des savons. C. B. Soc. Biol., 11 avril 1908.

Action du Suc de < Selerostomum equinum > sur les graisses du serum de Cheval

1o Préparation des graisses. — Un litre de sérum recueilli aux Abattoirs de Vaugirard est concentré dans le vide, à une température de 30? c, jusqu'en consistance päteuse. L'extrait mou ainsi obtenu est évaporé à siccité dans le vide sulfurique. Le résidu est détaché sous forme d'écailles brunes, qu'on réduit en poudre fine. Cette poudre est épuisée successivement dans une ampoule à décantation par l'éther rectifié (macération de 40 heures); par le sulfure de carbone (macération de 12 heures) et par l'éther de pétrole. Le mélange des dissolvants a été évaporé à l'air libre et le résidu blanc-jaunátre, d'odeur de graisse, a été desséché dans le vide sulfurique ;

20 Préparation de l'extrait de Sclérostomes. — Cet extrait aqueux a été préparé aux Abattoirs de Vaugirardavec 50 grammes de parasites vivants. Les Sclérostomes, aussitôt détachés de la muqueuse intestinale sont lavés plusieurs fois à l'eau physiologique tiéde, puis triturés au mortier avec du sable purifié. La pulpe épaisse est traitée par une petite quantité d'eau distillée et quelques gouttes de toluene.

Aprés une macération de 3 heures, la masse épaisse est exprimée à travers un linge fin. Les enveloppes des Vers sont totalement privées de leur contenu. C'est cet extrait aqueux, rendu aseptique par l'addition de toluéne, qui va nous servir dans nos expériences.

Les graisses que l'on vient d'obtenir sont triturées au mortier et dissoutes dans la plus petite quantité d'éther possible ; la solution éthérée est incorporée dans un certain volume d'eau distillée. Par agitations répétées, on obtient une émulsion de graisses homogene qui nous permettra de répartir uniformément les corps gras dans les flacons en expérience.

Expériences :

Flacon A | 30 сс d'extrait aqueux + 30 cc d'eau distillée renferme - 15 ec d'émulsion de graisses.

Flacon В ( 30 cc d'extrait aqueux bouilli + 30 cc d'eau renferme | distillée + 15 сс d'émulsion de graisses.

Flacon C | 60 cc d'eau distillée + 15 ce d'émulsion de renferme | graisses.

Le liquide du flacon C est légèrement acide; il faut un 1/2 ce de ко tor »

solution de soude pour saturer cette acidité (la phtaléine du

phénol nous a servi de réactif indicateur).

Les 3 flacons sont portés à l'étuve, à 37° C, fréquemment agités et examinés au bout de 18 heures :

La coloration rose du liquide C n'a pas disparu ; les graisses ne se sont donc pas acidifiées pendant l'expérience, sous l'influence simultanée du temps et de la chaleur de l'étuve.

Aprés avoir ajouté deux gouttes de phtaléine du phénol dans les flacons A et B, on procede au dosage delacidité du milieu à

: А ar iN .

l'aide d'une solution 10 desoude. Pour amener le virage au rose

persistant, il faut verser 5 cc 1 desolution alcaline dans le flacon B et 8 cc 7 dans le flacon A. L'acidité du liquide, dans le flacon A, s'est done sensiblement acerue.

Dans deux autres expériences, nous avons également constaté une notable augmentation de l'acidité dans le flacon A.

П faut donc admettre l'intervention, dans le flacon A, d'une lipase, détruite par l'ébullition dans le flacon B.

Le Sclerostomum equimum sécréte donc un ferment lipasique qui saponifie les graisses du sérum de Cheval.

Or, il est trés intéressant de rapporter ici certains faits observés par Nocucni (1). Ce savant a remarqué que ni la lipase seule ni un corps gras (trioléine) ne peuvent hémolyser les globules rouges ; mais, si on ajoute à un mélange de globules et de lipase, soit de la irioléine, soit du beurre, on observe aussitót une hémolyse. Le mélange, neutre au début, devient acide à mesure que l'action se prolonge.

(1) Н. Мовосні, Uber eine lipolytische Form der Hàmolyse, Biochem. Zeitschrift, VI, 185-191, 1907.

Devant ces observations, nous admettons que la lipase sécrétée par le Sclérostome est intimement liée à l'action hémolytique de ce Ver.