ROUE

substance étrangère pouvant contenir Pion P. Or la seule garantie repose sur la solubilité des lipides dans certains solvants, en l’espèce l'alcool. L’extrait doit être purifié à l’aide de l’éther anhydre puis minéralisé par le mélange nitro-sulfurique. À partir de ce stade la technique est la même que celle suivie pour doser le phosphore minéral. Il faut donc en résumé se livrer aux opérations suivantes :

{ 1°) extraction et purification P LIPIDIQUE, 2°) minéralisation } P: TOTAL 3°) dosage proprement dit \

Pour dla commodité de l'exposition nous décrirons l'opération qui intéresse le phosphore lipidique et qui implique dans ses deux derniers temps le dosage du phosphore total.

1°) Extraction et purification.

L’extraction est souvent destinée en même temps au dosage du cholestérol par la méthode de WiNpaAUs, ainsi que nous l’avons dit précédemment. Lorsqu'elle n’a en vue que la détermination du P lipidique, la prise d'essai est de un à deux grammes de tissu frais; la rapide mise en train, et le montage de l’appareil se font comme il est indiqué à propos du WiINDAUS. Le temps d'extraction peut être un peu réduit, puisqu'il y a une quantité moindre de substance. LEME- LAND [223] indique 6 à 8 heures, JAVILLIER [204] préconise 8 heures.

I faut suivre la technique de LEMELAND [222] qui donne d'excellents résultats et qui est aujourd’hui

généralement adoptée. Elle part de ce fait que l’ex-

ie de

trait alcoolique contient tous les lipides phosphorés, mais peut contenir d’autres substances phosphorées, non lipidiques et dont il faut se débarrasser. La simple reprise par léther et le benzène (1) du résidu d'évaporation de la solution alcoolique (évaporation qui doit avoir lieu dans des conditions bien déterminces) donne d’après LEMELAND le phosphore lipidique total, « les résultats obtenus avec un même solvant sont toujours très concordants ».

Le produit de l'extraction alcoolique est transvasé

dans un ballon en pyrex de grande capacité, puis

; évaporé dans un vide de 20 mm. au moins, sur un bain-marie chauffé vers 70°. Au moment où il ne reste plus dans le ballon qu’un alcool très étendu, et que des mousses se produisent on interrompt lévaporation, et l’on met dans le ballon un peu d’alcool (2) à 95°. On refait le vide et concentre à un volume de 4 ou 5 cc. On introduit alors 10 ce. d’alcool absolu avec une pipette, en rinçant le col et les parois du ballon. On refait le vide à 15 ou 20 mm. et seulement alors on plonge le ballon dans l’eau bouillante en agitant constamment. En deux ou trois minutes on obtient un résidu très sec et réparti en

couche mince sur les parois du ballon.

Ce dernier temps du séchage est d’une importance

(1) La reprise par le benzène est inutile pour la surrénale qui ne paraît pas contenir de sphyngomyéline, lipide phosphoré insoluble dans l’éther (LEMELAND [223 |).

(2) Pour éviter toute rentrée d’air, le ballon est fermé par un bouchon traversé par un tube à robinet. Pour faire pénétrer l’alcool, on adapte au tube à robinet un entonnoir muni d'un petit tube de caoutchouc : l’alcool entre seul, tout danger d’oxydation est écarté.

capitale. L’exactitude de la méthode en dépend absolument, « Un chauffage à 100° des phosphatides du sérum en présence d’air les rend insolubles dans leurs solvants ordinaires et le résultat obtenu perd toute signification ».

On introduit alors 30 à 40 cc. d’éther anhydre (conservé sur sodium) et chauffe 5 minutes à reflux, laisse déposer et décante. On pratique trois extractions semblables. LEMELAND indique de réunir ces liqueurs, de les évaporer des 2/3 environ. Le 1/3 restant est centrifugé, et le liquide décanté et évaporé : c’est le résidu de cette dernière évaporation, constitué par les lipides phosphorés qu’on minéralise ensuite.

Au lieu de centrifuger, nous avons préféré filtrer sur coton dégraissé, quelque peu tassé. Le filtrat limpide recueilli dans un petit ballon de Kjeldahl en

pyrex est évaporé, et le résidu minéralisé.

2°) Minéralisation.

Ici commencent les opérations applicables également au dosage du phosphore total; (dans ce cas la prise d'essai a été de 0,50 à 1 gr. de tissu frais).

Nous avons minéralisé par la méthode nitro-sulfurique dite (1) de NEUMANX. Dans le matras de Kjeldahl de 100 cc., qui contient déjà le résidu phosphoré ou le tissu, on introduit 2 cc. d'acide sulfurique concentré et pur, et 5 ec. d'acide nitrique (ces réactifs exempts de phosphore) et une bille de verre. On

chauffe doucement (BauMaxN !151]) et lorsque le

(1) En réalité cette méthode a été d’abord préconisée et précisée par MizLon [242] et ensuite et indépendamment par L. La- PICQUE [217].

ballon ‘est rempli de vapeurs nitreuses on dispose dans le col un petit entonnoir. Peu à peu la substance se dissout, mais lopéralion n’est achevée qu'après une phase colorée à laquelle succède une phase à peine teintée de jaune. Parfois, on doit ajouter au ballon refroidi et qui contient un liquide brun, quelques gouttes d'acide nitrique. En chauffant doucement quelques minutes le liquide se décolore. L’opé- ‘ation demande environ deux heures. On laisse alors refroidir, ajoute 50 cc. d’eau distillée et fait bouillir quelques minutes pour transformer les acides pvro et méta-phosphorique qui ont pu se former en acide ortho-phosphorique seul justiciable de la méthode au

molybdate.

93°) Dosage proprement dit.

L’acide phosphorique est précipité sous forme de phospho-molvbdate d’ammonium. Le précipité lavé, débarrassé de toute trace d’acidité, est dissous dans de la soude titrée et en excès. Après avoir chassé l’'ammoniaque et laissé refroidir, on titre avec l'acide sulfurique en présence de phtaléine.

Le produit de la minéralisation et les eaux de la- .vage du ballon sont transvasés quantitativement dans un bécher en pyrex de 100 cc., de façon à avoir un volume de 40 à 50 cc. de liquide. Additionner de 20 cc. d’une solution de nitrate d’ammonium à 50 %, et introduire dans le bécher; chauffer à 70-80° et, à ce moment, ajouter 10 cc. d’une solution de molybdate d’ammonium à 10 % préparée à froid

æt filtrée. À l’aide d’un agitateur, qui restera dans le

bécher jusqu’à la fin de lopération, agiter le liquide, sans toucher aux bords du bécher. Un trouble, suivi d’un précipité jaune, se forme et se dépose bientôt, granuleux. Laisser le bécher au repos 20 minutes dans de feau glacée.

Il faut ensuite laver le précipité. Pour cela on décante le liquide sur un filtre mince, genre filtre sans cendres, non plissé, et placé dans un entonnoir à douille longue, et dans lequel on a fait passer de l’eau glacée pour resserrer les pores. Décanter tout le liquide en entrainant le moins possible de précipité sur le filtre. Le précipité resté dans le bécher est lavé à leau glacée par décantation à plusieurs reprises,

à ce qu'une goutte du filirat ne rosisse plus le

jusqu papier de tournesol bleu sensible.

À ce moment, on dépose le filtre et son contenu dans le bécher où l’on introduit 20 ce. d’eau distillée pour mettre par agitation Île précipité en suspension. On dissout le précipité dans la soude N/10 en quantité connue et en excès (excès de 5 cc. au moins). On note le nombre exact de ce. de soude N/10 employés. -

On porte à lébullition pendant 15 à 20 minutes jusqu'à ce que le liquide ne dégage plus d’ammoniaque (contrôle au papier de tournesol sensible, ou au Nessler à l'extrémité d’un agitateur, ce qui est beaucoup plus sensible).

Après refroidissement sous un courant d’eau, on ajoute quelques gouttes de solution alcoolique de phtaléine du phénol, qui doit rougir fortement le

liquide. À laide d’un jet de pissette, on lave les pa-

rois du bécher dans lequel on fait tomber ensuite goutte à goutte et en agitant, une solution d’acide sulfurique N/10, placée dans une burétte graduée au 1/20 de cc, jusqu'à complète disparition de toute coloration rose (1).

Nos résultats sont évalués en P°0° pour 1000 de tissu frais. Si p est la prise d’essai, n le nombre de ce. de soude N/10 utilisés, n°’ le nombre de ce. d’acide sulfurique N/10, le phosphore évalué en P*0° pour 1900 de tissu frais nous est donné par la formule :

(n — n°) X 0,000253 X 1000 P?20° pour 1000 — -——— -

(1) La méthode de NEUMANN-GREGERSEN fait ajouter à ce moment un volume de SO4H2 N/10 égal à celui de la soude N/10û employée. Après une courte ébullition pour chasser CO?, on titre en retour avec la soude N/10.

Répartition du phosphore

dans les Capsules surrénales de Mammiferes.

Résultats exprimés en P205 pour 1000 de tissu frais.

SURRÉNALES DE MOUTON,

SURRÉNALES DE CHÈVRE.

SURRÉNALES DE CHEVAL.

corti- médul- corti- méduli- corti- médulcale laire cale laire cale laire LOTO 0 ESS la 90211120 I 9.80 10.54 10.01 10.87 IT 11.23 14.40 a 10.40 13.40 9.93 10.56 10.01 16.02 Ila 9.61 11.30 II 10.80 11.80 III 9,35 13.30 9.53 11.20 10.10 11.40 9.78 12.57 9.66 10.45 sd 10.06 12.40 9.59 12.28 9.59 10 13220) 9.12 joke!

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Répartition du phosphore lipidique

dans les Capsules surrénales de Mammifères.

Résultats exprimés en P205 pour 1000 de tissu frais.

SURRÉNALES DE MOUTON.

SURRÉNALES