CHAPITRE VI

Les procédés de coloration

Ils sont extrêmement nombreux et varient suivant que l’on se propose de colorer une squame ou une biopsie. La méthode de coloration par la solution de potasse à 20 ou 40 %, préconisée par les classiques, et qui donne des résultats si remarquables dans l’examen des cheveux, est un procédé bien défectueux quand on l'utilise dans la coloration des squames. Cette technique éclaircit le parasite autant que les tissus et il est toujours préférable d’avoir dans les squames des filaments mycéliens colorés.

Ces procédés de coloration ne diffèrent pas de ceux utilisés dans les examens histologiques. On utilise comme liquides fixateurs l’alcool absolu, le formol, le sublimé acétique ; Eliascheff conseille le mélange d’alcool, d’éther sulfurique et d'acide acétique, excellent pour la rapidité de la fixation et la conservation parfaite des éléments cellulaires.

Pour les colorations des coupes, on peut employer

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l'hématéine-éosine, le bleu de méthylène, l’hématoxyline-éosine-orange, la méthode de Gram, de Van Gieson. La méthode de Pappenheim, souvent utilisée, a l'avantage de mettre en évidence la structure interne du Champignon qu'elle colore en rouge intense.

On a utilisé aussi la méthode d'imprégnation par le nitrate d'argent, qui peut rendre des services dans l'étude du Malassezia furfur, mais qui est cependant imparfaite par son différent degré d'imprégnation des éléments du Champignon.

La méthode suivante, utilisée au Laboratoire de Parasitologie de la Faculté, a toujours donné d'excellents résultats.

Sur une lame très propre, on place une goutte d'acide acétique cristallisable et on fait tomber les squames à examiner dans cette goutte. On porte ensuite la lame au-dessus de la veilleuse d’un bec Bunsen et on chauffe doucement la goutte d'acide jusqu'à dessication complète. On colore ensuite la squame ainsi éclaircie avec une solution diluée de bleu de méthylène (à un centième, par exemple) ou de bleu de Sahli de préférence. Le seul temps délicat de la méthode est le lavage, car il faut égoutter la lame, puis la laver avec de grandes précautions, étant donné : le peu d’adhérence des squames à la lame. Pour opérer correctement ce lavage, le mieux est de se servir d’un cristallisoir rempli d’eau, dans lequel la lame plongée obliquement est agitée doucement. On essuie avec un linge fin la lame tout autour de la préparation colorée, on laisse sécher, puis on monte dans l'huile de cèdre. Les préparations ainsi obtenues ayant l’incon-

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vénient de se décolorer assez facilement, on colore à l’'hémalun pour avoir des préparations stables. On procède exactement de la même façon, mais on remplace les bleus par la solution d’hémalun utilisée en technique histologique courante. La seule différence réside dans la durée de la coloration et du lavage, ces deux temps étant plus longs et par conséquent plus délicats. Les préparations colorées à l’hémalun ne se décolorent jamais et peuvent être montées dans le baume de Canada.

L'examen des préparations obtenues par cette méthode montre, sur un fond à peine teinté, les éléments mycosiques, qui se détachent nettement colorés en bleu ou en violet.

Les biopsies, grâce auxquelles on peut étudier les lésions causées par le Champignon, demandent une coloration soignée et un peu plus compliquée ; elles peuvent être fixées aux liquides de Bouin ou de Zencker, plus rarement au formol-salé ou au liquide de Regaud, peuvent être colorées par les méthodes histologiques courantes : hématéine-éosine, hématéine ou hémalun-safran-érythrosine ou bien aux méthodes de Mann ou de Masson (trichrome).

Les squasmes, qu'il est toujours très facile de se procurer, permettent l'identification et l'étude du Champignon ; c’est à cet examen qu'on se livre toutes les fois que la recherche microscopique est nécessaire pour affirmer le diagnostic de pityriasis versicolor.

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