METHODES DE DOSAGE DE L'ACTIVITE ANTIBIOTIQUE

Après avoir constaté, lors de nos essais préliminaires, la présence de facteurs antimicrobiens, il nous a semblé nécessaire d'étudier les qualités de cet Antibiotique éventuel et d’essaver de déterminer quelle était sa concentration dans le jus des feuilles de Bergenia cordifolia.

Au cours des essais suivants, nous avons donc essavé de déterminer:

1° le taux de la dilution la plus forte de jus de feuilles encore actif;

2° les bactéries sur lesquelles le jus des feuilles exerçait une action inhibitrice.

Le dosage des Antibiotiques n’est effectué jusqu’à maintenant qu’au moyen de méthodes biologiques. Ces méthodes furent élaborées avant tout pour la détermination de la valeur de la Pénicilline et on les employa également pour le titrage d’autres éléments antibiotiques.

On peut distinguer deux grands groupes de méthodes pour le contrôle de l’action des Antibiotiques:

1° Méthode de titration par des dilutions progressives:

Cette méthode de titrage est basée sur la vieille technique bactériologique des dilutions. Elle repose sur la lecture directe du seuil d’inhibition du développement d’un germe dans un bouillon nutritif additionné de dilutions décroissantes de l’échantillon à titrer. Cette méthode fut employée la première fois par FLEMING Ces dernières années, certains bactériologistes ont essayé de modifier la méthode en remplaçant la lecture directe du seuil d'inhibition par un examen indirect à l’aide de manifestations physiologiques contrôlant Ia vie microbienne (hémolyse, respiration, luminescence, production d’acide,

OR

phénomène d’oxydo-réduction, etc.). L’addition d’un indicateur de pH, la phénolsulfonephtaléine, par exemple, traduit ainsi la production d’acide et facilite la lecture.

2° Méthodes de titration par diffusion:

a) Méthode de HEATLEY:

Cette méthode, dont les détails ont été élaborés par HEATLEY, utilise de petits anneaux de verre (7,5 mm. x 10 mm.), dont une des extrémités est rodée et que lon implante à la surface d’une couche de gélose solidifiée, coulée dans une boîte de Pérri. La gélose est ensemencée en surface. On verse des solutions de lAntibiotique à différentes concentrations dans les anneaux de verre, et la boîte de PÉTRI est placée à 37°. L’Antibiotique diffuse progressivement, le degré de la diffusion étant en rapport avec la concentration de la solution en principe actif. Dans ces conditions, il se forme des zones claires, transparentes, lysées tout autour de l’anneau de verre, dont on mesure le diamètre.

b) Méthode dite d'Oxford Cup, élaboré par J.-G. VINGENT et H.-W. VINCENT (29) :

Les tubes de verre sont remplacés par des disques de papier-filtre de même diamètre environ que les tubes. En imprégnant ces rondelles de papier au moyen des solutions d’Antibiotiques et en les appliquant à la surface des milieux gélosés, on obtient également, par diffusion des zones annulaires d’inhibition.

c) Méthode d'Oxford Cup, modifiée par FLEMING: Par cette méthode, on perce au moyen d’une baguette stérile de verre des trous dans la gélose solidifiée coulée en boîte de PÉTRI au lieu d'utiliser des anneaux de verre.

Pour la recherche de l’activité de notre jus, nous avons employé presque exclusivement la méthode des dilutions. Cette méthode nous a semblé la plus pratique pour nos expériences. Elle n’exige aucun appareil spécial, la technique est extrêmement simple tout en étant très précise et donne des valeurs toujours sensiblement comparables. Cependant, il faut travailler avec deux séries de cultures soumises aux mêmes conditions expérimentales et ne considérer comme expériences rigoureuses que celles donnant des résul-

tats concordants pour les deux séries de cultures.

La limite de sensibilité de cette méthode peut être augmentée en cas de besoin, en employant des concentrations en Andlibiotique à étudier aussi petites que possible d'un tube à l’autre pour une série d’essais.

RE xr URe =

Au cours de nos travaux sur l’activité antibiotique des feuilles de Bergenia cordifolia, nous avons employé cinq microbes différents:

1° Staphylococcus aureus,

2° Streptococcus haemolyticus,

3° Escherichia coli,

4° Pseudomonas aeruginosa (Bacillus pyocyaneus),

5° Trichophyton mentagrophytes (Trichophyton gypseum).