EXPERIENCES AU MOYEN DU STAPHYLOCOQUE DORE

Milieu :

Pour tous nos essais effectués avec cette bactérie, nous avons utilisé un bouillon dont la composition correspond à la formule suivante:

PéptOhes Rae Ste die trut 20,0 gr.

Chlorure de Soda 5,0 gr.

GIUCOSES ER Et FR 2,0 gr.

SENTIR RON ANNE EE JO 1000,0 gr.

Préparation de la suspension de staphylocoques:

Pour effectuer nos expériences, nous avons emplové une culture de Stfaphylocoques dorés ensemencée dans notre bouillon peptoné, placé à 37° pendant 24 heures. Pour réaliser cette culture, nous sommes parti d’une souche pure de Staphylococcus aureus sur gélose, conservée à la glacière. Cette culture fut d’abord repiquée sur un milieu de gélose, et après 24 heures à l’étuve (37°), on ensemençait enfin dans le bouillon décrit plus haut. Celui-ci fut également laissé pendant 24 heures à l’étuve et employé seulement ensuite pour ensemencer la série expérimentale. Ces repiquages successifs nous ont permis ainsi de travailler toujours avec la même souche bactérienne et au moyen de générations jeunes et de vitalité identique.

Préparation de la dilution du jus:

En mélangeant le jus des feuilles avec le bouillon, il se forme un précipité. À la suite de ce phénomène, nous n’avons pas pu préparer la série expérimentale en mélangeant directement le ius avec le bouillon. Etant donné que ce premier mélange devait nous servir à la préparation de dilutions successives par distribution à la pipette, le précipité de la

os

combinaison tannin-protéine nous aurait empêché d’obtenir une suspension homogène et par conséquent les dilutions successives de lAntibiotique n’auraient pas été conformes à nos exigences.

Pour obtenir des concentrations parfaitement définies, nous avons préparé avant tout une série de dilutions du jus au moyen de Soluté physiologique stérile. Dans ces conditions, on obtient une solution limpide et dépourvue de précipité.

La série des tubes a été ensuite préparée de la façon suivante: |

À 4,5 cc. de Soluté physiologique stérile, nous ajoutons 0,5 cc. du jus de feuilles pour obtenir une dilution au 1/10 par rapport au jus initial.

À 2,0 cc. de cette dilution prélevée au moyen d’une pipette stérile, nous ajoutons 2,0 cc. de Soluté physiologique stérile. La nouvelle dilution a ainsi une concentration de 1/20° par rapport au jus initial.

2,0 cc. de cette dernière dilution sont de nouveau dilués au moyen de 2,0 cc. de Soluté physiologique pour obtenir une concentration au 1/40%.

En continuant ces manipulations, nous avons préparé la gamme complète des dilutions.

Dosages définitifs:

En prélevant 0,5 cc. de chaque dilution de jus des feuilles ainsi préparée et en les introduisant dans des tubes contenant 4,5 cc. de bouillon, nous obtenons les dilutions suivantes:

0,5 cc. d’une dilut. du jus à 1:10 +4,5 cc. de bouillon — 1 :100 0,5 cc. d’une dilut. du jus à 1:20 +-4,5 cc. de bouillon — 1 :200 0,5 cc. d’une dilut. du jus à 1:40 +4,5 cc. de bouillon — 1 :400 0,5 cc. d’une dilut. du jus à 1:80 +4,5 cc. de bouillon — 1 :800 0,5 cc. d’une dilut. du jus à 1:160+4,5 cc. de bouillon — 1 :1600 0,5 cc. d’une dilut. du jus à 1:320+4,5 cc. de bouillon — 1 :3200

Nous avons préparé en même temps un tube témoin dans lequel nous remplaçons les 0,5 cc. de la dilution du jus par la même quantité de Soluté physiologique stérile. Tous les tubes sont ensuite ensemencés avec 0,2 cc. de la suspension staphylococcique préalablement préparée. On mélange soigneusement, puis on place la gamme de tubes ensemencées pendant 24 heures à l’étuve à une température de 37°.

EDG

Résultats :

Observations macroscopiques:

Après un séjour de 24 heures à l’étuve, nous avons constaté à l’examen macroscopique du tube témoin un trouble plus ou moins prononcé suivant le développement des Staphylocoques. Tous les tubes préparés à l’aide des dilutions de jus présentaient un dépôt dû à l’action des tannins du jus sur les albumines du bouillon. La quantité de sédiment diminuait proportionnellement à la concentration du taux du jus ajouté. Le liquide surnageant était légèrement opalescent dans tous les tubes. Nous avons remarqué que le trouble était sensiblement moins fort dans les trois premiers tubes contenant les plus fortes doses de jus. Par contre, ceux qui renfermaient des dilutions plus grandes montraient presque la même opalescence que le témoin.

Observations microscopiques:

Nous avons préparé des frottis à partir des tubes de culture ayant été disposé pendant 24 heures à 37°. Puis nous avons pratiqué des colorations à la fuchsine diluée. A l’examen microscopique, on constate qu’un très petit nombre de Coques existe encore dans les tubes à faibles dilutions, mais que ces derniers présentent des caractères morphologiques atypiques. Ils sont fortement hypertrophiés, leur diamètre a presque doublé, comme on peut s’en rendre compte par comparaison avec les frottis préparés à partir du témoin. Nous y trouvons également des cadavres microbiens vides de leur contenu protoplasmique ainsi que des vestiges de membranes cellulaires provenant de Coques lysés.

La limite de la bactériolyse se situe entre les dilutions

de 1:1600 à 1:3200.

Dans les tubes à dilutions plus poussées, nous ne trouvons plus de Bactéries lyvsées, mais l’aspect morphologique de ces dernières n’est cependant nullement normal. Elles sont fortement gonflées de telle sorte qu’elles se colorent irrégulièérement et présentent souvent des espaces vacuolaires non colorées.

Pour étudier d’une manière plus précise l’action du jus de Bergenia sur les Staphylocoques, les tubes en expérience avant été placés pendant 24 heures à l’étuve, ont été repiqués sur des nouveaux milieux. Cet ensemencement s’effectue au moyen d’une ôse prélevée dans le bouillon cultivé et transporté dans 5 ce. de nouveau milieu. Cette gamme a été ensuite placée 24 heures à l’étuve. Ce temps écoulé, nous avons pu constater que les dilutions jusqu’à 1:1600 (celle-ci incluse) ne contenaient plus de Coques viables, car les tubes de repiquage sont restés tout à fait stériles. Les tubes con-