EXPERIENCES AU MOYEN DU COLIBACIELE

Milieu :

Nous avons employé pour nos essais un bouillon au Bleu

de Bromothymol additionné de sucre répondant à la formule suivante:

PÉDIONRE APE RS EE PARENT ERA ULB, Chlérure deSodum eee OSeer.

AU PE TE D cl Ur 100,0 gr.

La peptone et le Chlorure de Sodium sont dissous dans (ré

l'eau à l’autoclave à 110° pendant 5 minutes. Le pH est ensuite ajusté à 7,2. :

On ajoute ensuite:

Glucose ss rene elite 0,5:gr

La solution d’indicateur est préparée de la manière suivante:

BleusdeBromoOt Emo 7e 0,4 gr.

Aleo0l 2 asset SRE ET 300,0 cc.

Eau ere meer er 200,0 gr.

Notre milieu contient donc 0,0064 gr. de Bleu de Bromothymol par 100 cc. et doit présenter une teinte vert d’herbe. Le Bleu de Bromothymol vire du pH 6,0 au pH 7,6 pour présenter 4 teintes bien distinctes: jaune — vert olive — vert herbe — bleu.

Le bouillon est, après filtration et répartition dans des tubes à fermentation à raison de 9 cc, stérilisé une demiheure à 100" pendant deux jours consécutifs.

Ce milieu constitue un substrat d’expérimentation idéal pour la culture de lEscherichia Coli. Cette bactérie dégrade tous les sucres surtout le glucose avec acidification. Elle fait donc virer le milieu au jaune et produit des gaz qui sont recueillis dans le tube de fermentation.

EN l —

Préparation de la suspension de Colibacille:

Comme point de départ, nous avons employé une culture de Colibacille sur gélose provenant de la bactériothèque de notre laboratoire. Avant de l’employer pour l’ensemencement des tubes destinés à l’expérience proprement dite, nous l'avons repiquée deux fois sur le bouillon liquide en la disposant chaque fois pendant 24 heures à l’étuve.

Ces bacilles ont une forme allongée à bouts arrondis et possèdent en movenne six cils. Ïls se montrent souvent un peu incurvés, GRAM négatifs. Sur gélose ordinaire, ils donnent une culture blanchâtre et crémeuse. Sur bouillil ordinaire se forme un voile grisâtre, le milieu se trouble avec ondes moirées.

Les caractères culturaux ont été vérifiés et correspondaient à ceux du Colibacille type, c’est-à-dire:

Production d'indol positive; Production d'acéthyl-méthyl-carbinol négative;

Production d'H?S négative sur milieu à l'hyposulfite de soude ;

Production d'H°S positive sur milieu à la cystine.

Préparation des dilutions du jus:

Dans le but de travailler avec les mêmes concentrations que lors des essais déjà effectués antérieurement et afin de pouvoir comparer les résultats les uns avec les autres, nous ajoutons à chacun des tubes contenant 9,0 cc. de bouillon au Bleu de Bromothymol un centimètre-cube des diverses dilutions du jus.

Grâce à cette opération, nous avons obtenu les dilutions suivantes:

Nous avons ensemencé chaque tube au moyen d’une culture fraîche de Colibacille, ainsi qu’un tube témoin et nous avons ensuite contrôlé le développement microbien après 24 heures de séjour à l’étuve.

Résultats:

Observations microscopiques:

Tous les tubes de cette série ont viré du vert foncé au jaune. L’intensité de cette réaction a été la même dans les tubes contenant les dilutions du jus que dans le tube témoin. Ce changement de teinte nous révèle que le Colibacille s’est développé normalement et qu’il a attaqué le glucose. Les

SN one

petits tubes de fermentation sont remplis de gaz; mais le volume de gaz n’est pas constant.

La quantité de gaz produite augmente proportionnellement à la dilution du jus; elle est inversement proportionnelle à la quantité de jus même introduit dans le milieu. Nous avons jugé nécessaire de reproduire ici l'aspect de cette réaction par la figure ci-jointe.

Observations microscopiques:

La forme du Colibacille cultivée dans le bouillon au Rleu de Bromothymol ne se prêtant pas à l’étude microscopique, nous avons repiqué ces souches sur des bouillons ordinaires. Ces cultures repiquées ont présenté un développement très net malgré le traitement effectué préalablement à l’aide du jus des feuilles de Bergenia cordifolia. Nous avons préparé des frottis à partir de ces cultures que nous avons colorés par la méthode de GRAM. Le tube témoin et les cultures aux dilutions fortes ont montré au microscope des Colibacilies morphologiquement normaux (négatifs à la réaction de GraAM). Les dilutions au centième et au deux-centième contiennent à côté des bâtonnets normaux des formes involuées d’une façon particulière: éléments longs, granuleux, filamenteux à extrémités effilées.

Interprétation :

D’après ces essais, l'efficacité du jus de Bergenia sur le Colibacille ne semble être que limitée et incapable de tuer ces bactéries, même emplové à forte concentration. Il exerce seulement une action frénatrice dont nous avons pu clairement mesurer l'effet au moven de la quantité de gaz formé. Pour les concentrations supérieures à 1:200 le jus provoque l’apparition de formes involuées qui rappellent sensiblement les modifications structurales de ce bacille à la suite d’un traitement à la Pénicilline.