STABILISATION DU JUS DE BERGENIA

Au cours de nos essais, nous avons pu constater que le jus obtenu en exprimant les feuilles, même placé à la glacière, ne conservait que pendant un temps relativement court son action antibiotique. Le degré d’efficacité diminuaïit déjà après quelques jours et disparaissait ensuite complètement.

La raison de cette diminution de l'efficacité peut avoir son origine dans différents facteurs:

1° L’élément antibiotique peut être épuisé lentement par des microorganismes qui infectent le jus au cours de sa préparation.

2° La substance antibiotique est susceptible d’être inactivée par la présence des ferments préexistants. Soit qu'elle subisse l’action de ferments d’oxydo-réduction, soit qu’elle soit décomposée ou transformée définitivement par une autre fermentation en produits inactifs.

3° L'élément antibiotique peut enfin avoir subi une modification purement chimique, soit par suite de la présence d’une substance chimiquement instable qui se décompose lorsqu’on la conserve longtemps en solution aqueuse, soit par interaction de réactions de double décomposition, la formation des produits d’addition avec d’autres substances existant dans le jus des feuilles.

Pour éliminer ces facteurs d’inactivation supposés, il nous a fallu recourir à des techniques de recherches variées,

que nous exposons ci-dessous pour les trois hypothèses envisagées.

1° Techniques d'élimination des microorganismes.

Divers procédés peuvent être employés pour atteindre ce but:

a) Action de la vapeur d’eau sous pression à l’autoclave à une température de 110°-120° pendant 20 minutes.

b) Action d’un courant de vapeur d’eau à 100° pendant 30 minutes.

c) Tyndallisation, c’est-à-dire action de la chaleur (60°) pendant une heure, trois jours consécutifs.

d) Ultrafiltration stérile sur filtre SErrz ou sur bougie CHAM- BERLAND. Les procédés a), b) et c) tuent les microorganismes par l’action de la chaleur. Comme nous l’avons démontré dans nos essais ultérieurs, l’élément antibiotique n’est pas complètement stable à la chaleur. Nous avons donc choisi pour cette raison le procédé par ultrafiltration.

On a filtré le jus frais d’abord sur un «filtre SEITZ grossiter» (pores n° 3) et ensuite sur <filtre SEITz stériles dans un ERLENMEYER à vide au moyen d’une pompe à vide. Tout l’appareil ainsi que le filtre Seitz a été stérilisé à l’étuve à 180" avant l’usage.

2° Techniques utilisées pour éliminer l’action des enzymes.

Pour obtenir un jus de feuilles exempt d’enzymes, il convient de stabiliser les feuilles de Bergenia de suite après les avoir cueillies.

Toute une série de procédés ont été élaborés pour tuer les enzymes ou pour stabiliser les plantes.

Le mécanisme de l’action des ferments est une fonction du métabolisme hydrique de la plante. La présence d’eau est une condition nécessaire pour toute activité de ferments. Par conséquent, le moyen le plus simple d’éliminer cette activité est de retirer l’eau. C’est ainsi que dans les publications nous avons trouvé de nombreuses indications sur la dessiccation des feuilles et sur la suppression simultanée de l’action des ferments.

a) Dessiccation à l’étuve à 55°.

WEISFLOG et BuEcHi (17) ont démontré par des expériences faites avec des feuilles de Bergenia crassifolia, que pour cette méthode de stabilisation la teneur en Arbutine tombe de plus de 10%. La température de 55° semble rendre les ferments plus actifs au lieu de les inactiver. En d’autres termes, la cellule vivante est tuée par la plasmolyse, suite de l’évaporation de l’eau; cette plasmolyse se produit à une température plus basse que l’inactivation de ferments. Entre la période pendant laquelle la cellule est détruite et celle de l’inactivation il y a un laps de temps, pendant lequel les ferments sont actifs au maximum.

b) Dessiccation à l'ombre à 18°-25°.

Cette méthode de stabilisation ne donne pas non plus de bons résultats. A cette température relativement basse, les

SENADE

ferments ne semblent pas inhibés au cours de la dessiccation. Les auteurs cités plus haut ont constaté que pour les feuilles de Bergenia crassifolia les ferments décomposent 50% de l'Arbutine au cours de ce procédé de stabilisation.

c) Dessiccation par le Sulfate de soude.

Cette proposition a pour point de départ le raisonnement suivant:

Si, au moment de la destruction des parois cellulaires l’eau est absorbée par un accepteur, comme le Sulfate de soude déshydraté, on réalise une diminution considérable de l’activité des ferments.

Ces trois méthodes ont le grand désavantage que l’action des ferments est seulement arrêtée — de sorte que nous avons affaire à des drogues fixées. Les ferments reprennent leur activité au moment où la plante entre en contact avec de l’eau. Etant donné l’extraction aqueuse nécessaire de nos feuilles pour effectuer nos expériences, ces méthodes d’inactivation temporaire des ferments ne sont pas utilisable pour nos essais.

On peut obtenir une stabilisation permanente de la substance végétale par l’effet du froid. Selon G-: KLEIN (18), il est possible de tuer momentanément les ferments en exposant la substance fraiche à l’action de l’air liquide ou de lAzote liquide. Selon MosER (19), il s’agit, ici aussi, simplement d’une inhibition momentanée des ferments.

D’autres méthodes de stabilisation permanente ont été proposées par R. BRIEGER (20). Cet auteur dispose la plante fraiche dans du chloroforme (60°). D’après E. BoURQUELOT (21), la plante fraîchement cueillie est hachée et placée dans de l’alcool bouillant. Par ces procédés, une partie des éléments actifs est extraite, de sorte que, finalement, on obtient une préparation stabilisée et non pas une drogue stabilisée.

ARNOULD et GORiS (22) proposent même de traiter la drogue avec de la vapeur d’eau sous pression. Ainsi la substance est effectivement cuite et les éléments thermolabiles

sont détruits d’une facon plus efficacement encore que par les ferments.

Le traitement à la vapeur d’alcool dans l’autoclave, comme il a été proposé par E. PERROT et A. Goris (23), est connu comme une des méthodes les plus employées. Il faut que les vapeurs surchauffées agissent subitement sur la substance végétale. C’est pour cette raison que l’autoclave vide est chauffé d’abord avec de l’eau. Ensuite celle-ci est évacuée et remplacée rapidement par de l’alcool. En même temps la substance végétale y est introduite. Pendant cette

manipulation la température ne doit pas baisser en dessous de 75°. On ferme la soupape et en 5 minutes on atteint la pression de 11/2 atmosphères à une température de 90°. Celleci tue en 5 minutes tous les ferments.

Toutes ces méthodes de stabilisation permanente emploient des températures relativement hautes. Etant donné que notre substance antibiotique, comme nous allons le démontrer dans les expériences suivantes, n’est pas très thermostable, nous avons été contraint par la suite de renoncer à la stabilisation de la substance végétale. On a alors essayé d'éliminer les ferments en isolant l’élément actif proprement dit.

3° Techniques propres d'empêcher la décomposition chimique.

Pour éviter que l’Antibiotique se modifie par formation de composés nouveaux avec d’autres substances chimiques contenues dans le jus, ou qu’il se décompose sous d’autres influences, il ne nous restait qu’une seule possibilité: isoler l'élément actif et essayer de le préparer chimiquement pur.

Au cours du chapitre suivant, nous donnerons une description de nos essais tentés pour isoler l’élément actif.