TA

libérer le ferment endocellulaire. A cet effet, nous avons congelé le mycélium et nous l'avons broyé avec du sable dans un mortier pour obtenir une masse fine et homogène. Nous avons ajouté 5 cc. de Soluté physiologique stérile, puis extrait la Tannase soluble dans l’eau et on a centrifugé pour éliminer le sable.

Nous avons examiné l’action du liquide de décantation qui devait contenir la Tannase en le mettant en présence de l’Arbutine.

On a préparé à l’aide de ce liquide enzymatique une solution-étalon d’Arbutine, et partant de cette solution, on a effectué la préparation d’une gamme de dilutions à des taux d’Arbutine et de Tannase décroissants. Nous avons introduit 0,5 cc. de chacune de ces dilutions dans du bouillon peptoné à 20% et glycosé à 2%, enfin nous les avons ensemencé avec 0,2 cc. d’une suspension de Staphylocoques. En même temps, on a emplové un tube témoin de bouillon ensemencé seulement avec les Staphylocoques et un autre tube témoin contenant de l’Arbutine et des Staphylocoques, mais dépourvu de Tannase. Après 24 heures à l’étuve, la différence de l’opacité des tubes nous a permis de constater la différence de la croissance des Coques. Le témoin qui ne contenait que du bouillon ensemencé et celui qui renfermait du bouillon ensemencé et de l’Arbutine, présentaient à ce stade une forte opacité. Les autres tubes préparés avec le liquide contenant de la Tannase et les dilutions d’Arbutine étaient également troubles. L’intensité de l’opacité était inversement proportionnelle à la teneur en Arbutine et en ferment. Nous rapportons dans le tableau ci-dessous les résultats de cette expérience.

Série d’essais au moyen de l’Arbutine synthétique et de la Tannase.

Culture repiquée après 24 heures

Culture

Dilutions après 24 heures

Témoin 1 (pas d’Arbutine

pas de Tannase) très fort trouble croissance Témoin 2 (0,005 gr. d’Arbu-

tine, pas de Tannase) très fort trouble | croissance Solution étalon d’Arbutine

et de Tannase 0,5 cc. léger trouble | croissance Solution étalon d’Arbutine

et de Tannase 0,3 cc.) léger trouble croissance Solution étalon d’Arbutine

et de Tannase 0,1 ec. | fort trouble croissance

Solution étalon d’Arbutine et de Tannase 0,05 cc. | très fort trouble | croissance

RTE

C’est intentionnellement que nous n’avons pas réalisé ces expériences parallèlement avec des dilutions de jus dont nous ne connaissons pas la valeur enzymatique quantitative d’Arbutine.

Nous n'avons non plus tenu compte du rapport arithmétique du taux d’Arbutine synthétique par rapport à celui du jus de Bergenia. Nous ne pouvons attribuer à cet essai aucune valeur de comparaison quantitative, parce que d’une part nous ne pouvons pas comparer le coefficient de décomposition de notre Tannase vis-à-vis de l’Arbutine avec celui du ferment actif dans le jus; d'autre part, il ne nous était pas possible de connaître la valeur spécifique de notre Tannase du Sterigmatocystis par rapport au ferment spécifique du jus de Bergenia.

Cependant, ces expériences démontrent que l’Arbutïne initialement inactive contre le Staphylocoque doré a une action inhibitrice sur les microorganismes grâce à l’Hydroquinone naissant à la suite de la décomposition enzymatique.

Etant donné que l’action de l’Arbutine dédoublée par la Tannase n’a qu’un caractère inhibiteur, nous pouvons peutêtre pousser notre raisonnement plus avant et déduire de cette expérience que l'effet antibiotique du jus des feuilles de Bergenia cordifolia ne peut pas être imputée à la seule action de lArbutine décomposée enzymatiquement. Cette hypothèse est renforcée en comparant la quantité d’Hydroquinone résultant de l’action diastasique dans une dilution de 1:1600 et exerçant encore un effet bactéricide avec la plus petite quantité d’Hydroquinone synthétique. (0,00005 gr. / 5 cc. de bouillon), qui déclenche le même effet. En même temps, il faudrait attirer l’attention sur la disproportion entre l’action des ferments, le taux de dilution très forte du jus et la vitesse de décomposition supposée de l’Arbutine. Ces faits ne cadrent nullement avec les lois de l’action des Hydrolases.

L'effet antibiotique de l’Arbutine et de l’'Hydroquinone sur les microorganismes ne peut pas être niée et pourrait Jouer un rôle supplémentaire dans les phénomènes inhibiteurs du jus de Bergenia. Ces phénomènes secondaires seraient alors en relation directe avec une dose relativement forte d’Arbutine.

ISOLEMENT DE L’ELEMENT ACTIF PAR EXTRACTION EFFECTUEE AU MOYEN DE SOLVANTS ORGANIQUES.

Indépendamment de nos essais au moyen de l’Arbutine et d’Hydroquinone, nous avons cherché à extraire la substance antibiotique en utilisant des solvants organiques divers et essayé de la séparer des autres substances du jus de la plante.

Éd

Nous avons examiné les solvants suivants:

1° Chloroforme.

Dans une ampoule à décantation, nous avons épuisé 20 ec. de jus au pH normal 4,9 à trois reprises successives au moyen de 15 cc. de Chloroforme. Nous avons séché chaque fraction séparément au moyen de sulfate de soude anhydre, puis nous avons évaporé le solvant dans le vide et séché le résidu jusqu’à poids constant. Nous avons repris le résidu, qui était hydrosoluble dans 10 ec. de Soluté physiologique. Partant de cette solution-étalon, nous avons réalisé une série d'essais à diverses concentrations avec du bouillon peptoné à 20%, glycosé à 2%, et nous avons ensemencé ces tubes avec du Staphylocoque doré. En même temps, en employant des concentrations usuelles, on a réalisé une gamme de dilutions de jus ayant été préalablement épuisé au Chloroforme.

Après 24 heures de séjour à l’étuve, on constate en se basant tout d’abord sur le phénomène d’opacité et ensuite sur l’épreuve positive du réensemencement, que la fraction extraite par le Chloroforme au pH — 4,9 ne contenait pas de substances antibiotiques. Par contre, le jus, après épuisement, était toujours aussi actif que le jus frais ordinaire.

Nous avons ensuite répété la même expérience, mais en travaillant en milieu acide à pH =: 3,0 par addition d’Acide chlorhydrique normal. Les résultats étaient analogues à ceux de la première expérience.

Nous avons encore repris ces essais d'extraction avec de Chloroforme, mais cette fois, nous avons diminué la concentration en tons Hydrogène jusqu’à pH — 7,1 en ajoutant de la Lessive de soude. Dans ces conditions, ni le résidu de l’extrait chloroformique, ni le jus après épuisement ne montraient l’action antibiotique. Il semble que la substance antibiotique se décompose dans le milieu alcalin et devient inefficace.

2° Ether de pétrole. .

Nous avons utilisé ici l’'Ether de pétrole comme solvant et nous avons procédé d’une façon analogue à celle des expériences précédentes. En éliminant le solvant, nous n’avons pu obtenir aucun résidu. Notre jus de feuilles de Bergenia cordifolia ne contient donc pas d’éléments solubles dans l'Ether de pétrole.

3° Ether éthylique.

Finalement, on a eu recours à l’éther éthylique.

En procédant toujours d’une façon analogue à celle décrite antérieurement, nous avons obtenu un résidu abondant par extraction au pH normal. En augmentant la concentration en tons Hydrogène du jus par addition d’Acide

chlorhydrique normal jusqu’à pH — 3,0, le résidu de l'extrait augmente encore. Nous avons repris cette matière verte, légèrement collante, soluble dans l’eau, par 10 cc. de Soluté physiologique et préparé une gamme de dilutions. De facon analogue, nous avons réalisé une gamme avec le jus épuisé préalablement à l’Ether. ;

Nous pouvons déduire de ces séries d'expériences que d’une part l'extrait éthéré possède une certaine action antibiotique. Une partie de la substance bactéricide passe donc dans l’éther. D’autre part, le jus qui a été épuisé à plusieurs reprises par l’éther ne perd que très peu de son action antibiotique. Nous croyons donc pouvoir interpréter ce phénomène de la façon suivante:

Notre élément antibiotique est une substance qui semble partiellement soluble dans l’éther, mais qui est beaucoup plus soluble dans l’eau. Il se pourrait aussi que deux ou plusieurs substances antibiotiques soient contenues dans le jus des feuilles de Bergenia cordifolia. Ces substances se compléteraient et participeraient ensemble à l'effet antibiotique. Un de ces corps pourrait être extrait par l’éther, tandis que l’autre étant hydrosoluble resterait dans le jus. Mais étant donné la grande solubilité du résidu éthéré dans l’eau, et son pouvoir antibictique toujours identique, nous supposons plutôt que l’action antimicrobienne du résidu éthéré et du jus épuisé à l’éther est provoqué par la même substance.