DOSAGE DE L’ACIDE FOLIQUE DANS LE PROTEOLYSAT A

Pour titrer l’Acide folique, nous aurions pu adopter la technique de LaxDpy et Dicken avec Lactobacillus casei comme bactérie-test. Nous avons préféré la méthode préconisée par MITCHELL et SNELL (18), dont le principe, tel que l’indique M. WELscu, est le suivant:

«Le développement de Streptococcus lactis R, dans des conditions rigoureusement définies, est proportionnel à la concentration du milieu en Acide folique».

MrrcHELL et SNELL préconisent le milieu suivant:

Hydrolysat de caséine ........ 10 gr.

(exempt de vitamines)

Acétate de Sodium .::.7::..:. 12 gr.

CULOS EPP RCE AE NE ee 20 gr.

HÉVDIODhANE M ETNE EMERX LATE 100 mmg.

Sulfate d’'Adénine .......:...... 20 mmg.

Chlorhydrate de Cystine ...... 200 mmg.

Chlorhydrate de Guanine ...... 20 mmg.

PT EEE ne PR A dicue » arr 20 mmg.

DER AI SREe ERrSRERREs 20 mmg.

Chlorure de Thiamine ........ 200 u g.

Chlorhydrate de Pyridoxine ... 200 n g.

Pantothénate calcique ........ 200 u g.

PaDIOLNANO ME RC MAITRE 400 u g.

Acide-nicotinique :..:2::2.57; 200 u g.

PICTURES E Essia 0,4 u g. Solution salle As. 0 5 cc:

Solbtonsaline D rec DICC.

Fadidistilée dispo: 1.000 ce.

(pH ajusté à 6,6 — 6,8)

LR eee

Solution saline À:

Phosphate monopotassique (KH2 PO4) — 25 g.,Phosphate bipotassique (K2HPO4) — 25 g., Eau distillée — 250 cc.).

Solution saline B:

Sulfate de Manganèse (Mn SO“, 4 H0) — 0,5 g., Sulfate de Magnésium (Mg SO“, 7 H20) — 10 g., Chloruré de Sodium (Nas CD 006: :

Sulfate:de Fer (FeSOS AP 0) 05/2 #Handistliée== 250 cc.).

Le milieu Difco, que nous avons utilisé, est préparé, selon ces indications, d’après la formule décrite par CapPes, HoBBs et Fox, et modifié par l'emploi de Citrate de Soude au lieu d'Acétate de soude.

Sa réhydratation s’opère à raison de 75 g. pour 1.000 ec. d’eau distillée; le tout est porté à l’ébullition quelques minutes.

Solution étalon d’Acide folique.

L'expérience ayant montré qu’en employant ce milieu, les concentrations les plus favorables étaient comprises entre 0,001 y et 0,01 y d’Acide folique par tube de culture à 10 cc. nous avons fait une solution étalon telle que:

5 cc. renferment 0,01 , et 0,5 cc. renferment 0,001 y d’Acide folique.

Etablissement des gammes.

On procède comme pour le Pantothénate de Calcium:

Gamme étalon.

Tubes N° LP AR SE SAARRE, 6. ç'e

Milieubde base "0, D 5 (PACE TOR | ets 5 5 Solution étalon ....... 0 OST D 3 4 5 Found HS tite UNS EAP 5 4,5 4 3 2 1 0

Le premier tube est le témoin: la mesure de son trouble, après l’incubation, dû à une légère croissance de la souche, sera déduite finalement de la valeur du trouble des autres tubes: on aura ainsi la mesure de la croissance répondant spécifiquement à la quantité d’'Acide folique :

Les tubes de 2 à 8 représentent des doses d’Acide folique de 0,001 — 0,002 — 0,004 —— 0,006 —- 0,008 — 0,01 y.

ENT 90e

Gainme des échantillons de Protéolysat.

Tubes N° | se Ga) | 3. 4.

On bouche soigneusement les tubes au coton cardé et.on stérilise à l’autoclave pendant 15 minutes à 120”.

Préparation de l’inoculat.

On prépare l’émulsion d’ensemencement à partir d’une culture de 24 h. à 37°, incubation faite après repiquage de la souche de Streptococcus lactis R dans un tube contenant 10 cc. de bouillon «Bacto-Micro-Inoculum».

Les tubes étant refroidis, on les ensemence alors avec une goutte de la suspension microbienne, légèrement trouble, que l’on prélève stérilement à l’aide d’une pipette de Pasteur.

Cette suspension est obtenue après avoir centrifugé la culture sur Bouillon et remis le culot de centrifugation en suspension dans 10 cc. de soluté physiologique, isotonique stérile.

Puis, les tubes sont placés à l’étuve à 37° pendant 18 à 24 h. maximum. Au bout de ce temps d’incubation: on Îles dispose une demi-heure environ à la glacière dans le but d'arrêter la croissance.

On peut alors procéder aux mesures:

Nous employons pour cette Vitamine: le filtre bleu 420 M et les écrans 4 ou 5, selon l'intensité du trouble.

Nous exprimons dans le tableau suivant les résultats ainsi enregistrés.

Ce tableau montrera que les valeurs obtenues au Lumétron varient parallèlement aux concentrations d’Acide olique de la gamme étalon, et, vont bien en décroissant avec des dilutions de plus en plus grandes de Protéolysat.

Nous avons jugé inutile d'indiquer les valeurs données par le tube renfermant 1 cc. de Protélysat pur à 2%, car la croissance était très forte et nettement hors des limites de turbidité de la gamme-étalon.

Valeurs numériques données par le lumétron

Acide folique

00027 00047! ‘00057 F0008y ‘0017 s : *. Concentrations eny 720 V0 Vs de riboflavine ARE OT ER TE — mesures de la courbe étalon

., — protéolysat