CS

Donc, après culture de la souche, 24 h. à 37°, dans IU'Ce: de ce bouillon, les cultures sont centrifugées aseptiquement. On décante le liquide surnageant et on remet les bactéries, qui forment un culot, en suspension dans 10 cc. de soluté physiologique, isotonique stérile. Il faut encore diluer cette suspension à 1% dans le soluté isotonique. Centrifugation et dilutions successives ont pour but d’éliminer les facteurs nutritifs subsistant dans l’émulsion.

Ensemencement.

Les tubes étant refroidis, on les ensemence au moyen d’une goutte de la suspension bactérienne obtenue, qui doit être alors légèrement trouble, en opérant près de la flamme d’un bec Bunsen, pour éviter de souiller la culture avec les germes ambiants.

On place les tubes à l’étuve et, après 18 à 24 h. d’incubation à 37°, on peut alors procéder à la lecture.

Toutes nos mesures ont été faites à l’aide du Lumétron Colorimètre 402E, de marque américaine, qui, Sommairement, est une cellule photo-électrique, capable d'apprécier des troubles très légers.

L'appareil, très complexe, est muni entre autres accessoires: 1° de filtres, que l’on emplôie selon la couleur du milieu étudié, chargés de supprimer les erreurs possibles introduites par la couleur dans l'appréciation du trouble; 2° d'écrans ou de diaphragmes de diamètre variable, que l'opérateur utilise pour régler l'intensité du faisceau lumineux, les écrans employés devenant de diamètre de plus en plus petit à mesure que croit la turbidité du milieu.

Nous avons employé, pour la majorité de nos dosages: le filtre bleu 402 M, sauf dans le cas de la Thiamine où les filtres utilisés étaient: «Primary et Secondary B;», et dans celui de la Vitamine PP, où nous nous sonimes servis d’un

filtre de 470 mu.

Les écrans employés étaient voisins du n° 4.

Les chiffres traduisant nos mesures, représentent les degrés de la graduation d’un tambour semi-circulaire divisé en 100 parties égales, le zéro correspondant à des troubles

nuls.

DRE 9 A Er

Lectures turbidimétriques.

Il est indispensable de déduire la mesure du trouble du tube-témoin de celle des autres tubes de culture, pour avoir des résultats exacts.

1'e série de résultats: 2e série:

Témom 152 Témoin — 7

Solution vitaminique test:

DO HAS LES JS 6 OR 27 ES D PSN DOTE AIS CO YEN SA Se 29-1010 0,08, V2 2 7 AVES Let 929 DANS STD ET SU HUE T7 98 DL 8156592268 Protéolysat à doser:

IKec Prot pur:

OSSI DENT Ne O0 ere T 1 cc. Prot. dilué au 1/2:

AR NO DD NT A0 CENTRES 1,cc Prot. dilué au 1/5:

A TER PAT RS EE à RENE 7 :

1 cc. Prot. dilué au 1/10:

AO UD 2 SN 937 — 23 1 cc. Prot. dilué au 1/100:

RP CL 0 TES Fi=10

Discussion des résultats, — Conclusion.

D’après ces résultats, et, dans les deux séries d'essais, nous remarquons que:

1 ce. de Protéolysat (2%) renferme approximativement 0,085 y de Pantothénate, proportion confirmée par la mesure

du trouble du tube contenant 1 ce. de Protéolysat dilué au 1/2, dont la valeur correspond à 0,042 y.

Pour 0,08 y (moyenne des valeurs obtenues pour 0,06 Y et 0,1 y), nous obtenons la valeur:

Valeurs numériques obtenues au lumétron.

Pantothénate de calcium

etatses ie ere er el ete

Dre ot orties eee 1070 07e .e oo dee".e "0er toire

010% - j1 Fantothénate, con- 1 | ‘! centrationseny 1/2 pur

mesures de la courbe étalon n° 1

mesures de la courbe étalon n° 2

protéolysat d'après mesures courbe n° 1

protéolysat selon courbe n° 2

Pour 0,09 y, le calcul donne:

JAN EDS

et pour 0,085 y:

Or, pour 1 cc. de Protéolysat à 2%, nous avons obtenu 25,1. Ces résultats sont sensiblement les mêmes que ceux que nous avons réalisés en construisant la courbe.

D'où nous pouvons conclure:

1 cc. de milieu Protéolysat à 2% renferme 0,085 y de Pantothénate de Calcium.