DOSAGE DE LA BIOTINE DANS LE PROTEOLYSAT A

Pour le titrage de cette Vitamine, plusieurs méthodes nous étaient proposées. De toutes, celle de LAMPEN, KLINE et PETERSON (19) nous a semblé la plus favorable: elle utilise, en effet, la croissance, en anaérobiose, de Clostridium butylicum et nécessite un milieu presque exclusivement minéral et particulièrement simple à préparer, car Clostridium butylicum n'exige que la Biotine comme facteur de croissance. Malheureusement, nous n’avons pu nous procurer la souche nécessaire.

À noter la méthode de SHuLz, HUTcHINGS et PETER- SON (20), basée sur la production d’acide par Lactobacillus

caset, dans des conditions bien précisées.

Citons également la méthode de SNELL, EakiN et Wir- LIAMS (21), utilisant une souche de levure: Saccharomyces cerevisiae.

Les milieux de base de ces deux dernières méthodes sont assez complexes et les mesures plus compliquées.

Il nous restait la Méthode de LANDY et DICKEN (22) que nous avons déjà mentionnée à propos des précédentes Vitamines: elle repose sur le principe suivant:

«Le développement du Lactobacillus casei, cultivé dans un milieu de culture de composition rigoureusement définie, qui permet sa croissance optimum, est fonction, dans certaines limites, de la concentration en l’un des six facteurs de croissance énumérés ci-après, celle des cinq autres demeurant fixe: Acide nicotinique, Riboflavine, Biotine, Acide pantothénique, Acide folique et Pyridoxines.

Milieu de base nécessaire.

C’est le milieu le plus complexe que nous avons eur préparer. En voici la formule, telle que lindiquent Lanpy et DickEN; pour le titrage de l’une des six Vitamines précitées,

Re

on omet d’ajouter la Vitamine en question: (Dans notre cas: la Biotine.)

Hydrolysat de caséine (poids sec) 10,0

ArétalentdesSodIune Ann. 1,2 g.

CACO SERRE RS ES AL nu 2,0 g.

AS DA DA A Eee ee le Tu Ne bars 50,0 mmg.

BV PNODMAET EN es ee rt 20,0 mimg.

CN SIDE MER SRE EE PEAR Te PAL ET 20,0 mmg.

Chlorydrate dé‘ Guanine -. .-.... 1,0 mmg.

Miiiate/didénime Teen 1,0 mme.

RU DE NRA en eee 1,0 mme.

DE ter NOT RUE ra Re PT ete rer 1,0 mmg.

Chlorure, de Thiamine =... 20,0 u g.

TO Le EN dE Me Te nr. 1,0 u g.

Concentrat d’Acide folique .... 2,0 ug.

PADOLANTEE UNS ee PRIE 40,0 u g.

Pantothénate Calciques.7,. "17 40,0 u g.

ACIDE RICO HUE EME Ton 40,0 u g. TO RTE Lee SEPT ONE AS. 80,0 u g.

Solutionssaliner Ari FAIRE HOCC:

DOUHONES ALTER US eee

pH ajusté à 6,8 OYCC:

Solution À:

Phosphate bipotassique (K; HPO,) — 5 g.

Phosphate monopotassique (KH; PO)

5 g. Eau distilléee=—"25"Cc;

Solution PB:

Sulfate de Magnésium (SO, Mg. 7 H,0)

Chlorure de Sodium (CI Na) — 0,50 g.

Sulfate de Fer (Fe SO,, H0) — 0,5 g.

Sulfate de Manganèse (Mn SO, 2 H0) — 0,537:9. Eau distillée — 125 cc.

Il est inutile de préciser que tous ces composants doivent être très purs, et, le milieu fraichement préparé.

Solution standard de Biotine.

Les auteurs de la méthode, Lanpy et DICkEN, indiquent que la concentration la plus favorable pour obtenir des troubles facilement mesurables, en ce qui concerne le dosage de la Biotine, serait de 5 y par litre, soit 0,005 y par ec.

Après un essai préalable, la croissance du Lactobacillus casei s’avérant trop faible dans les tubes de la gamme étalon, en comparaison de ceux qui contenaient les dilutions de Pro-