SUR

dire que nos expériences ne nous ont pas permis de confirmer entièrement son existence, et nous ne les rapporterons qu’à titre documentaire.

On peut, malgré tout, tirer les conclusions suivantes de l'étude expérimentale réalisée à propos de l’eau oxygénée

1° Deux lipoïdes, la lécithine et le cholestérol, possèdent un pouvoir prolecleur marqué vis-à-vis de l’action toxique de l'eau oxygénée:

2° Les deux pouvoirs protecteurs présentent des modalités différentes :

a) L'action protectrice de la lécithine se manifeste rapidement, mais elle est moins marquée que celle due au cholestérol;

b) L'action protectrice du cholestérol est assez lente à se manifester, mais elle est plus marquée que celle de la lécithine;

c) Les mélanges des deux lipoïdes possèdent une action protectrice assez rapide, mais moins marquée que celle des deux corps pris indépendamment.

L'action protectrice vis-à-vis de l’eau oxygénée est donc à peu près parallèle à celle manifestée par ces corps vis-à-vis des rayons X. Toutefois, elle est plus durable dans l’ensemble et plus nette pour les mélanges des deux lipoïdes.

Comme pour les rayons X, elle croît avec le temps, passe par un maximum, décroît ensuite.

Enfin, il faut remarquer que les concentrations de lécithine ou de cholestérol nécessaires pour exercer une action antitoxique marquée vis-à-vis de l’eau oxygénée sont nettement plus faibles que celles nécessaires pour obtenir une radioprotection nette.

Il convient de faire ressortir que, logiquement, on devrait, si l’on porte les temps en abscisses et la durée de l’irradia-

PEN qe

tion nécessaire pour obtenir la léthalité en ordonnées, pouvoir tracer, comme dans le cas de l’action des rayons X, une courbe pour chaque concentration de lécithine ou de choles-

Duree de contact /ethal

1j 2j nn. 4) 5) k He ce Durée de séjour dons le mieu ———-— /ec/ne See Chol/estéro/

térol et obtenir, pour ces différents corps, une famille de courbes.

Les chiffres obtenus, compte tenu des erreurs expérimentales, sont trop près les uns des autres pour permettre des courbes séparées, et nous nous bornons donc à tracer une courbe rendant compte de l’activité moyenne du cholestérol, une de la lécithine et une des mélanges.

TRAVAUX RELATIFS AU ROLE DES PHENOMENES DE SURFACE ET ‘A LA NATURE CHIMIQUE DES COMPOSES ETUDIES VIS-A-VIS DE L'ACTION DES RAYONS X DE GRANDE LONGUEUR D'ONDE.

Ayant mis en évidence le pouvoir protecteur notable que possédait le cholestérol, nous avons voulu savoir si cette propriété était liée à la structure chimique du composé, et nous avons été tout naturellement amené à expérimenter avec les sels biliaires, tels cholate, glycocholate, taurocholate de Na, qui sont, comme on le sait, très proches parents du cholestérol.

Mais ces sels biliaires sont des corps tensioactifs puissants, c'est-à-dire qu'ils abaissent très fortement la tension superficielle des milieux dans lesquels ils sont placés, et l’on pouvait se demander si les phénomènes de surface ne jouaient pas un certain rôle dans le mécanisme de la radioprotection. Voici comment nous avons conduit l’expérimentation :

Nous avons réalisé des muilieux témoins pour déterminer dans quelles limites de concentration les sels biliaires permettaient la vie des infusoires. Naturellement, chaque solution de sel biliaire était additionnée d’une quantité égale de milieu de culture :

Ce sont par conséquent les solutions contenant des taux de sels biliaires égaux inférieurs à 1/700 que nous avons utilisées.

Il était donc possible de voir les paramécies vivre dans un milieu de tension superficielle notablement abaissé. Cette

constatation pouvait être prévue: facilement étant donné la faculté d'adaptation bien connue de ces infusoires.

Résultats

2 cm3 milieu cuiture. 2 em sol. 14/100 Mort en 15 minutes.

do 1/200 Mort en 10 minutes.

d° 1/400 | Concentration compatible

avec la vie, mais mouwve-

ments désordonnés et très

intenses.

1/500 | Vie: Les paramécies sont vi-

vantes après 48 heures.

1/800 Vie.

1/700 | Vie : Retour des mouve-

- ments à la normale.

Par ailleurs, des travaux antérieurs effectués in vitro sur les mélanges sérums-sels biliaires, avaient mis en évidence deux ordres de phénomènes :

1° Lorsqu’à un sérum dilué on ajoute une trace d’un sel biliaire quelconque, on constate, si l’on suit les variations de la tension superficielle en fonction du temps, que dans les premiers moments de l’expérience la tension superficielle du milieu s’abaisse puis revient rapidement à la normale, et la courbe qui traduit le phénomène semble être une courbe d’adsorption;

2° Si on néglige le paramètre temps, on met en présence des sérums diversement dilués et une quantité constante de sels biliaires (quantité extrêmement faible), on note, si l’on a soin de faire la mesure immédiatement, que la tension superficielle du milieu en expérience s’abaisse notablement et passe par un minimum pour une dilution de sérum comprise dans une certaine gamme de concentrations (de l’ordre de 4/1.000), puisque la tension superficielle pour des sérums moins dilués remonte et atteint finalement la tension superficielle initiale. |

Reprenant l'hypothèse de travail précédemment exposée,

nous avons voulu savoir si l’adjonction de sels biliaires au milieu de culture des paramécies dans des proportions compatibles avec une vie normale, modifie la dose léthale.

Nous avons eu la surprise de constater que, bien que les sels biliaires possèdent une formule chimique voisine de celle du cholestérol, ceux-ci n’exercent aucune action protectrice, mais sensibilisent, au contraire, à l'action des rayons X.

L'appareil fonctionnant avec les constantes habituelles 17.000 volts, 10 milliampères, filtre de 15 w, on irradie en goutte pendante des milieux de culture contenant des dilutions diverses de sels biliaires, immédiatement après l’adjonction des sels biliaires.

Les résultats obtenus sont résumés dans le tableau suivant :

A eulture | PONS ra nr

TE ee immédiate.

Témoin. y

Guidé par les considérations de ces travaux sur la tension superficielle, nous avons pensé que si nous réussissions à cultiver des paramécies dans des milieux contenant du sérum, nous pourrions ainsi mettre en évidence le rôle de cette tension superficielle en ajoutant des sels biliaires et en procédant ensuite à des irradiations sur ces milieux.

Nous avons réalisé différents milieux contenant du sérum à des taux variables (1/5, 1/10, etc., jusqu'à 1/500). Les paramécies ne paraissent nullement incommodées dans les mieux contenant des quantités de sérum égales ou inférieures à 1/10. En aucun cas nous n'avons constaté de troubles de la vie des infusoires après des séjours prolongés dans ces milieux.

Nous avons également réalisé un certain nombre de prépa-

MEYNIEL. 4

rations identiques aux précédentes, mais à partir de sérums préalablement délipidés selon la méthode de Saias. Les paramécies n'étaient pas davantage incommodées dans ces milieux que dans les précédents et elles continuaient leur évolution normale jusqu'aux dilutions de l’ordre de 1/5.

Les paramécies des milieux précédents, irradiées en goutte pendante meurent en 17 comme les témoins, quelle que soit la dilution en sérum entier ou délipidé du milieu dans lequel elles vivent.

| Action des sels biliaires ajoutés aux milieux contenant des sérums.

Nous avons expérimenté avec différentes dilutions de sérum, mais nous nous bornerons à rapporter les expériences réalisées avec des dilutions de sérum au 1/20, car c’est pour ces dilutions que nous avons obtenu les seuls résultats intéressants. Nous avons procédé comime suit :

A des milieux au 1/20 de sérum entier ou délipidé nous avons ajouté des solutions de sels biliaires de titre variable et avons soumis ces différents milieux à l'irradiation. D’après ce qui précède, nous savons que la tension superticielle du milieu ne subit que peu de modification.

Les résultats obtenus sont résumés dans les tableaux sui-

vants ne Mesa ele Durée d'irr.

Pan Je dan 8m

Témoin. — 17:

SETUMSÉ OT 1 /800 1/20 16° 1/900 1/26 16739

1/1.000 1/26 ras

: Témoin. — 15

de a do 1/700 1/20 16° Sérums délipidés. 1/800 1/20 16:30 | 1/900 1,20 1630

1/1.000 1/26 117Ée

1/2.000 1/20 re

L'expérience n’a pas montré de différences notables entre les milieux contenant des sérums et ceux n'en contenant pas et, S'il est logique de penser que les phénomènes de surface jouent un rôle, il ne nous est pourtant pas permis de conclure nettement par l’affirmative.

Restait à déterminer si l'action protectrice du cholestérol et de la lécithine était modifiée dans ces conditions.

Nous avons pour cela ajouté à des préparations placées dans le cholestérol au 4/5 depuis deux jours, des traces de sels biliaires. Et nous avons constaté qu'il n’y avait aucune modification, que la radioprotection subsistait intégralement, ce qui ne nous à pas étonné étant donné la couche de cholestérol déposée en surface des paramécies, comme le montre un examen à l'ultra-microscope.

Etude chimique des composés.

Nous avons ensuite fait porter notre étude sur les constituants de la lécithine, acide gras, choline, glycérine.

La glycérine ne présentait pas d'intérêt.

La choline, même à de faibles doses, était incompatible avec la vie des infusoires.

Et les acides gras, insolubles dans les solvants usuels, très difficilement émulsionables à une concentration suffisante, n’ont pu être retenus.

Plus intéressante paraissait être l’étude des corps présentant une analogie de structure chimique avec le cholestérol.

Nous avons tout d’abord étudié le pouvoir protecteur du calciférol. Les solutions alcooliques se montrant toxiques, nous avons fait appel aux suspensions huileuses contenant 15 mg de produit actif par centimètre cube. Les infusoires placés dans de tels milieux prenaient une teinte plus sombre, mais, au bout de quarante-huit heures, les mouvements se ralentissaient, la mort survenait par formation, vraisemblablement de substances toxiques sous l’action de la lumière.

Nous avons expérimenté, sans plus de succès, avec une sus-

pension contenant de la vitamine: D, l’émulsion ne nous permettant pas une concentration suffisante en produit actif.

Importance de l’état physique.

Avant de terminer ce chapitre, il nous paraît intéressant de signaler l'importance de l’état sous lequel se trouve le cholestérol.

Nous avons en effet essayé une solution de cholestérol dans l’acétone. Même pour les taux compatibles avec la survie des infusoires, nous n'avons, à l’état dissous, trouvé aucun pouvoir protecteur.

Nous avons d’autre part essayé des émulsions de cholestérol dans l’eau : elles ne présentaient aucun pouvoir protecteur, ce qui pourrait s'expliquer par la faible concentration en produit actif.

La simple émulsion d'huile d'olive dans l’eau confère aux paramécies une teinte plus foncée, mais ne donne aucune radioprotection., Par contre, les émulsions de cholestérol dans l’eau, en présence d’une certaine quantité d'huile d'olive, se montrent très actives.

Dans une autre série d'expériences, nous avons essayé d'éliminer autant que possible la lécithine ou le cholestérol du milieu où vivaient les infusoires par plusieurs lavages successifs avec des milieux de culture ne contenant ni lécithine, ni cholestérol. On arrivait à une dilution telle que la quantité de substance active restant libre ne pouvait jouer qu'un très petite rôle. Les paramécies ainsi traitées gardaient encore un pouvoir protecteur marqué vis-à-vis de l’action des rayons X et de l’eau oxygénée.

Un examen en lumière polarisée et à l’ultra-microscope permit de voir une couche de substance active à la surface des infusoires.

En conclusion, on peut dire que :

La radioprotection due à la lécithine et au cholestérol ne