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Comparateur vu d’en haut.

Dans 1 on place deux tubes:

a) Tube renfermant la solution en essai avec indicateur. — b) Tube renfermant de l'eau distillée. Dans 2 on place trois tubes :

a) Tube alcalin. — D) Tube acide. — c) Tube renfermant la solution en essai sauf indicateur.

Les milieux dont les pH au moment de l’ensemencement sont compris entre 3,8 et 8,6 et qui sont plus ou moins favorables à la végétation du champignon subissent au cours de la culture des variations vers l’alcalinité. Cette modification est d’autant plus prononcée que le pH de départ est plus petit. Si par conséquent on laisse à l’organisme tout le temps nécessaire pour qu’il produise la modification définitive de la concentration en ions H des milieux sur lesquels il vit, le champignon végétera durant la plus longue période sur le milieu le plus acide au départ et cependant lui permettant encore le développement. kw Durant cette phase la concentration H du milieu variera de la zone acide à la zone alcaline en passant forcément par la concentration H la plus favorable à la vitesse maxima de croissance

Il y aura donc à ce moment sur ce milieu la récolte la plus abondante.

Tous les milieux acides à pH différents sont par la culture des champignons amenés finalement à une concentration en ions H voisine de celle exprimée par pH=—0, sur les milieux très alcalins (pH plus grand que 9) le développement ne s’est plus produit. Nous pouvons donc conclure que la vitalité de lAspergillus peut se manifester dans les milieux jusqu’à une concentration en ions H exprimée par pH=—9 et que puisque le poids de la récolte est en rapport direct avec la durée de la culture, nous aurons dans ce cas le maximum de récolte sur le milieu le plus acide au départ, mais n’inhibant pas le développement (pH=—3,6). 4 nd

En considération de ces résultats nous avons ete amenés à employer la deuxième série de nos cultures. Sur celles-ci nous avons pratiqué journellement des examens microscopiques avec ou sans coloration, et nous basant sur ces constatations, nous avons déterminé le jour où la croissance du mycélium et des appareils reproducteurs paraissait la plus favorable pour effectuer

mer.

Fig 4.

Courbe indiquant la croissance de l’Asp. fum. sur des milieux de pH différents.

la pesée des récoltes du champignon tué, lavé et séché. On a aussi déterminé sur la troisième série de tubes les milieux de concentration optima en ions H pour la vitesse de croissance des organismes en expérience. Les résultats obtenus sont exprimés dans la courbe ci-jointe (Fig. 4), dont les abcisses indiquent les pH et les ordonnées, les poids en milligrammes.

De ce schéma nous pouvons conclure que la vitesse optima de croissance de l’Aspergillus fumigatus est assurée dans un milieu de pH—4,6; la récolte optima sera obtenue en partant d’un milieu de pH voisin de 3,6.

Considérant les travaux de J. RAv sur l'influence exercée par un milieu sur le développement des champignons inférieurs, nous avons pensé que les solutions sucrées : Glucose et saccharose, répondaient fort bien à nos exigences. Dans cette ordre d’idée, nous avons constaté qu’une solution aqueuse de Glucose à 5%, stérilisée à 120° a un pH de 4,6 et une solution aqueuse de Saccharose pure cristallisée de Poulenc à 10% tyndalisée pendant 8 jours possède un pH=—4,5. Nous avons, remarquant ces caractères favorables, effectué des cultures sur ces milieux pour suivre le

ic". VUE

développement. Après 4 jours de séjour à l’étuve à +370 on constate la formation des appareils reproducteurs; tous les caractères de culture nous ont d’ailleurs confirmé les résultats obtenus précédemment par Ray : Le thalle demeure filamenteux articulaire. Les caractères de genre se maintiennent le plus souvent. Les appareils reproducteurs gardent dans le premier milieu de passage les caractères de la culture mère. Après plusieurs passages successifs sur nouveaux milieux sucrés, les appareils reproducteurs présentent des formes qui oscillent; mais la forme et le volume des spores restent constants. Ray exprime ces résultats dans le tableau suivant : désignons par a) les caractères variants souvent, par b) ceux qui ne varient pas souvent et par c) ceux qui ne varient jamais par l’influence des milieux; on obtient :

Thalle Appareil reproducteur

a) Dimensions a) Dimensions b) Différenciation du pied.

Tête renflée, avec stérigmates.

c) Filaments c) Filaments dressés (hyphes), * Articles Ramifications terminales Chapelet de spores, Volume des spores.

Ayant ainsi constaté le développement et les caractères de l’Aspergillus fumigatus sur nos milieux, il fallait choisir un récipient de culture commode, se prêtant le mieux à nos recherches : le tube de BoRREL large et haut se laissant très facilement stériliser offrait tous les avantages. Nous avons fait de petits supports au moyen de baguettes de verre de 3 millimètres de diamètre (Fig. 5). Les tubes de radium se placent sur ceux-ci de sorte qu’ils se trouvent à 2 où 3 millimètres au-dessus du niveau de la culture sans aucune séparation.

La stérilisation des milieux de glucose est ue effectuée à l’autoclave à 1100 pendant 20 minutes, |,4472# celle des milieux de saccharose est assurée par tyndalisation à 60° pendant une heure par jour durant 10 jours successifs. Les dosages de sucre réducteurs pouvant provenir de la tyndalisation, sont effectués au polarimètre et par la méthode Fig. 5 de Bertrand. Les résultats nous donnent 12 à jé 4e Borrel 14 milligrammes de sucre réduit pour 100 grammes. avec support L'inversion produite par la tyndalisation est donc pour le Radium très minime et par conséquent négligeable.

Généralités sur le Radium. — En Curiethérapie on peut utiliser soit le Radium, soit son émanation, tous deux en équilibre radioactif avec leurs produits de désintégration.

Le radium est enfermé à l’état de sels (chlorure, bromure; sulfate) dans des tubes généralement en platine, de 10 mm. environ

de longueur, de 1 à 3 mm. de diamètre extérieur, dont les parois ont 0,5 mm. environ d'épaisseur de façon à ne laisser passer que le rayonnement « Gamma ». La teneur en radium de ces tubes est évaluée en Radium-élément (c’est-à-dire que l’on tient compte seulement du poids de radium que renferme les sels). Cette teneur est mesurée par comparaison avec un tube contenant un poids connu de radium. La comparaison est basée sur la mesure des courants d’ionisation, produits par le tube à mesurer et le tube étalon dans une même chambre d’ionisation.

Au lieu du Radium, on peut aussi utiliser l’émanation qui se laisse enfermer dans des tubes capillaires de verres de quelques dixièmes de millimètre de diamètre. L/inconvénient de l’émanation

résulte de la nécessité de l’extraire; cette opération est délicate et ne peut être menée à bien que par un personnel expérimenté. Aussi leur intensité baisse régulièrement de moitié en 3,85 jours, suivant la période de l’émanation. Nous n’insisterons pas sur ces techniques car, vu les inconvénients, nous avons toujours préféré employer des tubes de radium renfermant 5 et 10 milligrammes de radium-élément enfermés comme nous venons de le dire dans des filtres de Platine de 1 mm. d'épaisseur, de sorte que chaque tube fournit soit 37,5, soit 75 microcuties par heure. Rappelons ici que 1 gramme de radium-élément en équilibre fournit dans une heure 7,51 millicuries d’émanation et la même quantité se détruit pendant le même temps. 1 milligramme de radium-élément fournit 7,51 microcuries par heure.

Nous avons alors en premier examiné si le radium seul n’avait pas d’action réductrice sur notre milieu de Saccharose. On a donc exposé un tube de BORREL renfermant le milieu de Saccharose à une irradiation de 7,5 millicuries à l’étuve (4329). Le dosage effectué après 4 jours de séjour à l’étuve, par la méthode de BER- TRAND nous donna 16 milligrammes de sucre réducteur pour 100; quantité presque égale à celle trouvée après la tyndalisation. L’influence du radium sur l’interversion du sucre dans le milieu sans organisme peut donc être considérée comme nulle.

Pour la stérilisation des tubes de radium nous avons pendant toutes les diverses opérations de ce travail employé le passage à la flamme d’un bec Bunsen pour éviter les inconvénients pouvant résulter de l’emploi d’un antiseptique chimique quelconque. Le radium est introduit dans le tube de BORREL avec toutes les précautions possibles de l’asepsie. Pour chaque essai nous avons employé un tube témoin qui est toujours exposé, sauf l’irradiation aux mêmes conditions et manipulations que le milieu irradié. Les essais se font chaque fois à l’étuve à + 329 et les témoins sont séparés des tubes irradiés par une épaisse plaque de Plomb (6 mm.) qui partage l’étuve de haut en bas en deux compartiments étanches.

Les doses de radium. — Pour être fixé sur les doses de radium exerçant une influence sur les champignons inférieurs, nous n’avons pu trouver malgré la grande littérature parcourue par nous à ce sujet des indications exactes sur les mesures; aussi les auteurs

sont ils souvent en contradiction sur les termes de doses faibles où doses fortes.