CYCLE ÉVOLUTIF DU SPIROCHÈTE EN CULTURE

Le mode de reproduction des spirochètes a, dès le début de la connaissance de ces germes, suscité de nombreuses recherches. La plupart des observateurs étrangers croient à l'existence d’un vérilable cycle évolutif, n'hésitant pas à assimiler, de ce fait, ces organismes à des protozoaires, quelquesuns allant mème jusqu’à supposer à certains de leurs éléments un caractère sexuel nettement différencié.

L'existence d'une phase dans laquelle les spirochètes ont une morphologie différente du type classique est admise par la presque totalité des auteurs qui se sont occupés de cette question; seul, un petit nombre la nient, certains croient à l’existence de formes quasi invisibles, d’autres, les plus nombreux, décrivent aux spirochètes une phase granulaire.

La multiplicité des travaux qui ont paru sur ce sujet n’a fait que compliquer la question. Un fait d'observation avait frappé tous les cliniciens : une spirochétose sanguine se traduit, en général, par la succession de deux phases : l’une dans laquelle les spirochètes sont plus ou moins abondants et visibles, l’autre dans laquelle les organismes sont invisibles. C'est la conclusion à laquelle ont abouti les chercheurs devant l'impossibilité de démontrer la localisation et la forme de ces organismes pendant la seconde phase.

Frappés de l'apparition de granules coïncidant avec Ja disparilion des spirochètes, ils ont admis l'hypothèse d’une phase

granulaire : reprendre l'exposé de ces travaux dépasserait le

cadre de cette thèse. Nous nous bornerons à en mentionner les principaux : Dutlton et Todd, en 1907, constatent la segmentation du spirochète Duttoni en granules de chromatine à l'intérieur du cæcum de Ornithodorus Noubata. Ils retrouvent ces granules mis en liberté par la rupture de la membrane spirochétienne dans le tube digestif et les tubes de Malpighi des tiques infectées et signalent leur transformation possible en spirochète.

Leishmann, en 1909 et 1910, confirmant ces faits, attribue à ces granules un rôle dans la transmission de la fièvre récurrente : ces corps sont, dès lors, connus sous le nom de « granules de Leishmann ».

Depuis ces deux publications, des granules ont été retrouvés à propos de tous les spirochètes ; ce sont les travaux de Carter en 1907, Breinl en 1908, Wollbach en 1914, à propos du spirochète de la récurrente africaine. Sir Patrick Manson, en 1914, dans son Traité des maladies tropicales, rappelle que ces corps avaient déjà été décrits par Obermeyer et von Jacks.

Des granules analogues sont étudiés également à propos du spirochète des poules, par Balfour en 1911, Blanc en 1911, Hindle en 1911, Marchoux et Couvy en 1913, Fantham en 1914. Noguchi les signale à propos du tréponème pâle, en 1911, dans les cultures qu'il croit avoir obtenues de ce germe; le fait est, d’ailleurs, confirmé par O’Farrel, Balfour et Hoffmann en 1911, Mecrowsky en 1913. Fantham, Gross et Bosanquet les mentionnent dans leurs études sur les spirochètes des huîtres. Noguchi étudie ces granules dans ses essais de culture du spirochète de Dutton, d'Obermeyer, de Koch, de Novy dans spirochela phagenensis, dans spirocheta microdentium et treponema mucosum.

Scott Maclie les indique dans une élude sur un spirochète de l'urètre, Wollbach et Binger dans des spirochètes des eaux, Fontham en 1915 dans spirocheta bronchialis, Hubner et Reiter en 1916, Reiter et Ramme en 1916. Martin et Pettit, en 1919, les mentionnent dans les cultures de spirocheta icterohemorragiæ et Marian Gieszczykriewicz en reprend l'étude sous leur direction en 1920.

Il est bien difficile, malgré cette abondance de recherches, d'en dégager une idée d'ensemble. Ainsi, tandis que Marchoux,

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Couvy, Blanc, considèrent les granules de Leishmann comme des produits de dégénérescence spirochétienne ou même comme des formations n'ayant aucune relation avec le spirochète des poules; tandis que Wollbach et Gieszezykriewicz formulent des conclusions identiques pour certains corps observés par eux dans les cultures du spirochète de Inata et Ido; pour Leishmann, Fantham, Dutton et Todd, Balfour, les granules décrits par eux constituent une phase de l'évolution cyclique des spirochètes. Balfour crée le terme malheureux de « granules infectieux » et voit dans ces corps des formes résistantes ou particulièrement infectantes du spirochète, ce qui vient compliquer encore la question et donner des arguments faciles aux adversaires de celte conception. Les auteurs allemands vont encore plus loin dans le domaine de l'hypothèse bactériologique et en font, comme Reiter et Ramme, des sortes de spores, comme Hübener et Reiter, des formes sexuelles.

Les granules spirochétiens n’ont donc pas échappé à la loi commune et s'ils ont eu leurs partisans, ils ont suscité de nombreuses recherches contradictoires. Un auteur, Hindle, semble être le premier à avoir essayé de mettre un peu de clarté dans celte question; il signale la présence de deux ordres de corps :

1° Des granules latéraux ou terminaux, en général au nombre de un par spirochète, de dimensions beaucoup plus considérables que l'organisme qui lui a donné origine et qui constituent des formes de dégénérescence ;

2 Des granules nombreux, beaucoup plus petits, contenus dans la capsule et qui sont mis en liberté par les mouvements actifs du spirochète (tels que le dog shaking movement de Balfour) ou par la rupture de sa membrane d'enveloppe. Ces granules seraient susceptibles de s'allonger et de donner naissance à des spirochètes.

L'apparente complexité de cette question provient de ce que chacun des observateurs a étudié un germe différent appartenant à des espèces dissemblables. Rien ne permet, jusqu à présent, de supposer que les organismes enroulés en hélice auront tous un mode de reproduction identique par le fait même de leur forme hélicoïdale. D'autre part, le matériel

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utilisé pour ces études a été prélevé, au cours des spirochétoses, à défaut de cultures, dans le sang ou dans les organes, et les causes d'erreurs résultant de ce fait sont particulièrement nombreuses. Enfin, il n'existe aucune dénomination similaire, les auteurs parlent de granules, d’autres de corpuscules, d’autres de corps cacenides ou globoïdes, sans que lon puisse donner le même terme à une espèce de corps bien défini.

Nous avons repris cette étude pour le spirochète des oreillons : les faits que nous avons constatés ne valent évidemment que pour l'organisme étadié.

Le spirochète se reproduisant par division, en ensemençant une culture d'âge déterminé on est à peu près cerlain d'obtenir une culture-fille qui, au bout de trente-cinq à quarante jours, aura les mêmes caractères que celle qui lui a donné origine. 1] existe, en effet, dans la vie du spirochète en culture, un véritable cycle. Les germes d'apport se divisant successivement, c'est vers la cinquième semaine, alors que la culture est déjà assez abondante que l'étude de ce cycle est Le plus facile. A cette époque, en effet, après une phase d’agglutination transitoire, succède la première division portant sur un grand nombre de germes. On peut encore, après cette première mulüplication, en observer une deuxième, mais il est impossible de suivre au delà la vie en culture. Au fur et à mesure du vieillissement, la division s'opère sur des individus de plus en plus petits et la caractéristique des cultures de trois mois est de cuntenir, à côté des formes de dégénérescence, de tout petits spirochèles.

Les spirochètes se reproduisent par division transversale ; nous n'avons Jamais observé de séparation dans le sens longitudinal, séparation dont il est, du reste, difficile de se représenter le mécanisme.

Indiquons de suite que nous croyons à l'existence de deux modes de division transversale : l'un, en quelque sorte régulier, classique, connu depuis longtemps; l’autre, irrégulier et non encore décrit jusqu'ici.

Division RÉGULIÈRE LA PLUS FRÉQUENTE, — Le premier Symptome de la division prochaine du spirochète est, à l'examen ultramicroscopique, l'indépendance des mouvements des deux

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segments de l'organisme sur le point de se diviser. Sur les frottis de culture imprégnés par l'azotate d'argent et dans lesquels on peul étudier le mode de division, on voit sur les spirochètes arrivés à ce stade de leur évolution, un segment du corps mal coloré, de teinte grise, séparant les autres parties de l'organisme prenant une coloration nettemeut brune (voir fig. 7).

À partir de ce stade, on peut observer tous les termes de transition allant du spirochète qui va entrer en division jusqu'aux organismes séparés entre eux par un long intervalle, mais encore reteuu par un filament encore plus fin que les cils: la division, dans ce cas, a lieu par étirement du cil.

Les grandes formes spirochétiennes, au lieu de se segmenter en deux germes, peuvent donner naissance à trois ou quatre spirochètes, tous réunis par leurs cils, constiluant entre eux un véritable « train » de spirochètes. Les mouvements propres de chacun des nouveaux germes les rendent rapidement indépendants les uns des autres.

DivisiON IRRÉGULIÈRE. — On peut observer des germes dont la division s'opère suivant un mode irrégulier. Un spirochète de erande taille, au lieu de donner origine à une suite de trois ou quatre spirochètes égaux, se divise en spirochètes inégaux : un spirochète de 4 ou 5 tours; un de 3 tours, un de 1 ou 2 tours, par exemple. Ces trois organismes, après rupture du cil qui les maintient en contact, reprendront une vie autonome, seront à leur tour susceptibles d’accroissement et pourront donner des spirochètes-lypes (fig. 7).

Nous n’aurions même pas signalé ce mode de division irrégulier des spirochètes s'il ne devait nous faire comprendre un autre mode de segmentation, non encore signalé, croyonsnous, jusqu'ici.

Un spirochète peut se diviser en deux parties inégales : en donnant un organisme de dimension à peu près identique à un spirochète typique, et un spirochète d’un tour. Ces deux spirochètes sont réunis par leur cil commun : il semble qu'un tour d’hélice du germe-origine se soit séparé de ce dernier. IL est hors de doute que cet élément d’un tour est susceptible d’une vie autonome et d’accroissement : une fois libre, il correspond

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aux formes d'un tour de spire, cilié ou non, visibles tant à l'ultra que sur les froltis colorés (fig. 9-10).

L'inégalité de cette division peut aller plus loin encore : au lieu d'observer la segmentation en un spirochète de plusieurs tours et un spirochète d’un tour, il n’est pas rare, à certains moments, de voir dans les cultures un spirochète donner naissance à un granule. Ce granule situé à l'extrémité du cil, relié au spirochète par un segment de celui-ci, est incontestablement de nature spirochétienne. On peut l’observer aussi bien à l’ultramicroscope que sur les frottis colorés à l'argent; ce n’est pas une tache ou une micelle accolée au cil; il se colore comme Le spirochète : les figures 11,12, 13, 14, 15, 16 montrent mieux que toute description le mode de formation de ce granule.

La grosseur de ce granule est celle du corps du spirochète et il est environ d’un tiers de micromillimètre. Le granule s’accroît, donne un corps un peu allongé, puis s’infléchit en une sorte de croissant qui représente le premier segment de spire. Il atteint enfin la dimension d'un spirochète d’un tour.

Il existe donc véritablement des granules spirochétiens, mais qui ne correspondent en rien aux descriptions déjà données. Ces granules sont susceptibles d'une vie autonome après rupture du ceil Les reliant au spirochète qui leur a donné origine et on peut rencontrer sur les fins étalements nitratés des gra. nules ciliés libres. Ces granules ciliés sont facilement reconnaissables, ils ne peuvent être confondus ni avec les bactéries voisines, ni avec les petits renflements piriformes que l'on observe parfois à l'extrémité des cils.

Ces granules sont de nature spirochétienne, le mode de division qui leur donne naissance, les types de transition que l'on observe, leur cil, tout plaide en faveur de cette origine.

Mais il est impossible, à l'heure actuelle, de différencier les granules dont les cils ont disparu des nombreux corps de forme granulaire en suspension dans les sérums ou les milieux de culture. I} ne s’agit donc pas de l'existence d’un stade invisible dans l’évolution des spirochèles, mais de formes que nous ne savons pas reconnaître.

Nous venons de voir que les granules pouvaient donner par accroissement de leur corps origine à des spirochètes, mais cer-

Thèse Yves KERMORGANT. Pralle

ee ….

#7 . Fig. 9. — Division spirochétienne Fi6. 10. — Autre division irrégulière (un spirochète d'un tour irrégulière (un spirochète normal et un spirochèle normal). et un spirochète d’un tour).

TS nn : nn

F16. 11. — Formation d'un granule F16. 12. — Formation d’un granule spirochétien. spirochétien.

Fr6. 13. — Granule cilié sur le point 16.14. — Bactléries granule cilié à droite de se détacher. spirochèle cilié d'un tour à gauche.

a < - F 4 7 " F16. 15. — Granule cilié libre. Fic. 16. — Autre granule cilié libre.

Photomicrographies de P. Jeantet. Grossissement : 1559/1.

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taius d’entre eux n'ont pas cette évolution el ils se transforment sans avoir donné naissance à un spirochète en corpuscules arrondis ayant des dimensions doubles ou triples des granules. Nous ne savons si ces corpuscules représentent des formes de dégénérescence ou des formes d’involution, mais ils sont, en tout cas, absolument comparables aux corps que nous décrirons en étudiant plus loin les divers modes de terminaison des spirochètes.

Ainsi, à origine identique, correspond un mode de terminaison identique, ce qui constitue encore une preuve en faveur de la nature spirochétienne de ces granules.

Maintenant, quelle est la valeur des granules spirochétiens et à quoi correspondent-ils? Ce ne sont assurément pas des formes de résistance puisqu'ils meurent à la même température que les spirochètes, ils sont susceptibles, comme eux, de déterminer l'infection; nous le verrons plus loin. Ce sont les formes filtrables des spirochètes.

L'étude systématique des cultures de cet organisme nous a donc permis de mettre en évidence, d'une façon nette, ce mode de division particulier aboutissant au granule spirochétien.

Il nous reste à indiquer les derniers stades de l'évolution des spirochètes qui sont, à notre connaissance, au nombre de deux.

Un organisme perd peu à peu de sa rigidité; son éclat à l'examen ultra-microscopique se ternit; son aptitude à prendre la couleur diminue; il se colore en Jaune au lieu de la teinte brune caractéristique; son corps présente enlin des épaississements renfermant des grains chromatophiles. A un degré plus avancé, le corps n’est plus rond, mais aplati, ses extrémités sont déchiquetées. En dernier lieu, comme terme ultime, on observe un filament gris flexueux reliant parfois quelques grains prenant encore la couleur.

À côté de cette évolution il en existe une autre : à une extrémité du spirochète et aux dépens de celui-ci, il se forme un épaississement qui augmente peu à peu jusqu'à conslituer une boule absolument ronde dont il semble émerger un spirochète d'un ou deux tours. Le spirochète se réduit en un corpuscule rond dont le diamètre peut atteindre lrois ou quatre fois celui

du spirochète lui-même. Nous concevons très bien que des formes analogues, lorsqu'elles sont munies de cils, aient pu prêter à confusion et que certains auteurs les aient considérées comme des formes de résistance; ou comme la preuve d'un stade corpusculaire dans le cycle évolutif des spirochètes. Il n'en est rien, il ne s’agit que de corpuscules spirochétiens analogues aux autres et auxquelles est resté appendu le cil de l'organisme aux dépens duquel ils se sont formés.

Enfin, ces corpuscules n'apparaissent jamais que sur des vieilles cultures de deux à trois mois; et si l’on veut admettre l'hypothèse de formes de résistance, il faut bien concéder à ces corps leur propriété la plus habituelle, la résistance aux agents thermiques, à la chaleur ou au froid. Il nous a été facile de déterminer la température maxima nécessaire (56°) pour tuer une cullure jeune et d'y soumettre une culture vieille riche en corps de cet ordre. Alors que le repiquage témoin donnait origine à une culture de spirochètes la culture chauffée à 56° n’en donnait point.

En conclusion, nous ignorons la valeur exacte de ces corps: constituent-ils des formes de dégénérescence? Sont-ils des formes d'involution? Il nous semble impossible, à l'heure actuelle, d'exprimer une opinion et d'indiquer en tout cas leur rôle dans la reproduction des spirochètes (1).

(1) Nous réservons pour plus tard l'étude de certains corps apparaissant dans l'épaisseur du spirochète qui font l’objet de nos recherches actuelles et différant de tous ceux que nous avons décrits jusqu'ici.