CHAPITRE II

Etude toxicologique et expérimentale.

Doses toxiques.

Après l'étude chimique de l’acide anhydro-oxyméthylène-diphosphoriqué, il nous a paru rationnel de nous livrer à une étude approfondie de la toxicologie de ce produit médicamenteux. Les recherches expérimentales et pharmacologiques doivent, en effet, précéder l'étude thérapeutique ; puisqu’à elles seules, il appartient de fixer les doses utiles d’un médicament et d'en préciser les indications.

Dans le cas particulier, les conclusions auxquelles nous ont amené nos recherches expérimentales sont loin d’être dénuées d'intérêt, et l’on verra combien puissante est l’activité du produit que nous étudions.

Nous allons d'abord exposer la technique et le modus faciendi de nos expériences, nous réservant ensuite d'en dégager les conclusions.

Nos expériences, faites pour la plupart en colla-

js COOP

boration avec M. Lippmann ont porté principale-

ment sur des lapins, des cobayes, des serins.

Nous nous sommes servis du sel neutre de soude de l'acide, CH°P°O'Na: et du sel de chaux acide C’'H'PO’Ca, une expérience première citée par MM. Gilbert et Lippmann (1) nous ayant démontré l’égale toxicité de l'acide à l'état libre et des sels de chaux et de soude. Nous avons employé deux solutions ütrées différemment, l’une à 3 l’autre à 15 0/0.

Nous avons étudié l’action toxique de lacide anhydro-oxyméthylène-diphosphorique par les einq voies ordinaires susceptibles de transmettre à toutes les cellules de l'organisme tout produit toxique ou médicamenteux.

A). Par la voie buccale :

B). — sous-cutanée ; C). —— péritonéale; D). — sanguine (injection intra-veineuse) ; E): — intra-cérébrale.

A. — Par la voie buccale. — Expérience 1 (Personnelle).

— Un lapin de 3 k. 060 reçoit 21 grammes de sel neutre de ner n5 grammes d’ ; :

soude dissous dans 75 grammes d’eau (5 gr. par kilogr. de

poids d'animal). Deux jours après, nous constatons une légère

diminution de poids: le lapin pèse 2 k. 895. Les matières

sont molles: il n'y à pas de diarrhée. Quatre- jours après,

1. Gilbert et Lippmann. Sur le principe phospho-organique des graines végétales, La Pr. Méd. N° 60.

le lapin pesé à nouveau, a augmenté de 6o grammes. Il pèse 3k. 120. |

Nous recommençons à nouveau à faire ingérer à l'animal 21 grammes de sel neutre. Le lapin n'a présenté aucun phénomène ni physiologique, nitoxique. Ilest resté vivant.

Expérience I (Personnelle). — Nous faisons ingérer à un lapin d'un poids de 2 k. 639. 10 grammes de sel de chaux acide. Le lendemain même de l'expérience, le lapin avait augmenté de 25 grammes. Il pesait donc : 2. k 655. -

Expérience IL (MM. Gilbertet Lippmann). — Un chien, âgé de { ans, d’un poids de 15 kilos, reçoit 5 grammes de sel de chaux, et pendant les 10 jours qui suivent cette première expérience, on lui fait ingérer 1 gramme 6 par 24 heures en moyenne. Le onzième jour, l'animal pesé, on constate une augmentation de poids de 560 grammes. Il pesait 15 k. 500.

Expérience IV (MM. Gilbert et Lippmann). — Un cobaye femelle, du poids de 685 grammes, reçoit à 5 heures du soir, 6 gr 40 de sel neutre de soude dissous dans 30 centimètres cubes d'eau. L'animal meurt dans la nuit. A l'autopsie, on constate une distension énorme de l'intestin grèle et du gros intestin, par un liquide abondant, tenant en suspension des particules vertes. — Nous verrons plus loin l'explication

physiologique de cette mort.

B) Par la voie sous-cutarée. — Expirience V (Person- ‘ nelle) (Solution: titrée à 15 0/0). — Nous injectonssousla pcau

d’un lapin de 3 kil. 620, 16 cent. cubes d’une solution contenant 2 gr. 40 de sel neutre de soude. L'animal survit.

Le lendemain, injection sous-cutanée nouvelle de 52 eme. avec7 gr. 80 de sel neutre de sou le. L'animal mourtdans la

nuit. À l'autopsie, nous trouvons un cœur en systole avec

quelques tractus inflammatoires sur la muqueuse intestinale. A l'endroit où nous avions pratiqué l'injection: œdème inflammatoire assez considérable. La dose mortelle avait été de 2 gr. 7 par kilogramme.

Expérience VI (Personnelle) (Solution titrée à 15 0/0). — Nous injectons 6 gr. 6 de sel sodique neutre par kilo sous la peau d’un lapin pesant 2 kil. 185. L'animal meurt trois heures après. À l'autopsie, congestion intestinale.

Expérience VII (MM. Gilbertet Lippmann) (Solution titrée à 15 0/0).— On injecte aun cobaye mâle pesant 450 grammes 2gr. 20 de sel sodique neutre sous la peau. Mort après six heures: l'animal est autopsié: cœur en diastole, pas de congestion.

Expérience VIIT (Personnelle) (Solution titrée à 3 0/0). — Un serin, pesant 15 grammes reçoit sous la peau, 15 milligrammes de sel de soude,isolé desgrains de chénevis, correspondant à peu près à la quantité absorbée par cet oiseau. par 24 heures avec les grains. Après l’injection,le serin reste accroupi sur la table, les yeux clos. Ne réagit pas aux bruits, même très intenses ; s'envole cependant lorsqu'on letouche. Mort au bout de 3 h. 15. À l’autopsie, congestion de l'intestin grêle. e

C) Par la voie intra-péritonéale. — Expérience IX (Personnelle) (Solution titrée à 3 0/0). — Nous injectons dans le péritoine, à un cobaye mâle pesant 480 grammes, 153 milligrammes de sel sodique neutre (soit o gr. 319 par kilogram. d'animal). Sitôt après l'injection, l'animal présenté une tendance marquée à un état spasmodique des muscles et une dyspnée notable. Le réflexe conjonctival est conservé. Il n'y

a pas de contraction des pupilles. PER:

Au bout de 1 h. 1/2, amélioration très légère. L'animal survit.

Expérience X (Personnelle) (Solution titrée à 15 0/0). — Un cobaye de 470 grammes recoit, par voie intra-péritonéale, une injection de sel sodique neutre de 150 mill. par kilo. Après l'injection, au bout d’une dizaine de minutes envi-

ron, l'animal présente de la dyspnée, et une légère parésie des

membres. Une 1/2 heure après, il est agité de soubresauts,

alors que la dyspnée augmente, puis survient une contracture généralisée. L'animal mourut deux jours après

Expérience XT(MM. Gilbert et Lippmann) (Solution titrée à 15 0/0). — Un cobaye de 335 grammes reçoit en injection intra-péritonéale 200 milligr. par kilo. d'animal, de sel sodique neutre ; 15 minutes après, l'animal présente des convulsions cloniques, puis de la tétanisation, puis de la dyspnée. Les réflexes sont conservés. 1/2 heure après, cet état de contracture cesse, et l'animal survit 12 heures environ.

À l'autopsie, on trouve un cœur en diastole, une exsudation séreuse intestinale abondante et de la congestion viscérale généralisée, particulièrement du côté des reins.

D) Par la voie sanguine. — Expérience XII (MM. Gilbert et Lippmann) (Solution titrée à 3 0/0).— On injecte dans la veine marginale de l'oreille d’une lapine de 3 k. 500, o gr. 180 d acide libre (soit 52 milligrammes par kilo d’ animal).

Après l'injection, dyspnée coissante, et péristaltisme exagéré de l'intestin. +:

La lapine meurt au bout de 15 minutes.

A l'autopsie. l'utérus et les ovaires sont congestionnés,

avec taches ecchymotiques. Pas de congestion rénale ni céré-

brale. Le cœur est dilaté, en diastole.

Re

Expérience XII (Personnelle) (Solution titrée à3 0/0). — Lapine 3 k. 560. Nous injectons dans la veine marginale de l'oreille o gr. 222 milligrammes de sel sodique neutre. T'animal meurt au bout de 19 minutes. La dose toxique était de 59 milligrammes de sel par kilo.

A J'autopsié, l'utérus, les ovaires, les reins sont congestionnés : l'intestin grêle, très congestionné, renferme un contenu sanguinolent. Il y a, en même temps, un péristaltisme exagéré de l'intestin.

Le cerveau et le poumon sont indemnes:

‘Expérience XIV (Personnelle) (Solution titrée à 3 0/0). — Lapin, 3k.090.On injecte dans la veine marginale de l'oreille o gr. 027 milligrammes de sel sodique neutre, soit 6 gr .009 par kilo. On n’observe aucun phénomène pathologique.

Expérience XV (MM. Gilbert et Lippmann) (Solution titrée à 3 0/0). — Lapin, 2 kilog. 540. On injecte dans la veine circulaire de l'oreille o gr. 119 de sel sodique neutre, c'est-àdire 45 milligrammes par kilo. On ne note aucun phénomène pathologique. Deux jours après, l'animal avait augmenté de 130 grammes. Il pesait 2 k. 650.

Expérience X VI (Personnelle) (Solution titrée à 3 0/0). — Lapin, poids : 2 kilog. 350. On injecte dans la veine circulaire de l'oreille o gr. 153 de sel sodique neutre, (soit 64 milligr. par kilog.). | es

L'animal meurt en 21 minutes avec quelques contractions

cloniques.

Expérience XVII (MM. Gilbert et Lippmann) (Solution

titrée. à 30/0). — Lapin, 2. kilog. 830. On injecte dans la

vememésentérique 170/milligrammes, (60 milligr. par kilog.).

Ce lapin mourut en 112 minutes après la fin de l'injection.

Les Le foie, auquel la veine mésentérique est reliée presque diréctement, ne diminue donc en aueune facon, comme il le fait pour d'autres poisons, la toxicité de l'acide anhydro-oxyméthylène-diphosphorique

Expérience X VTIT: (MM. Gilbert et Lippmann). — Lapin, poids : 3 kilog. o10. On injecte dans la veine circulaire de l'oreille 5 eme. d'une solution titrée à 15 0/0. On ne constate rien. Huit minutes après, on fait une seconde injection de 5 eme. de la même solution, puis une troisième, deux minutes après. On constate quelques mouvements de va et vient de la tête et un léger tremblement.

Le lendemain, rien de particulier ; le ox paraît normal.

Trois jours après cette expérience le lapin pesé, aceuse 3 kilog. 060. Il avait augmenté de 50 grammes.

Expérience XIX. — (Personnelle).

Lapin, poids 1 kilog. 905 grammes. Nous faisons successivement, à 21 minutes d'intervalle deux injections dans la veine marginale de l'oreille de r eme. chacune. (Solution titrée à 15 o/o).

Immédiatement après la deuxième injection, phénomènes convulsifs, tétaniformes. Le lapin se rejette alternativement de droite à gauche. Puis : crise de contracture avec tremblement rapide des extrémités. Puis, diminution de cette contracture, partielle d’abord, totale ensuite. Respiration anhélante, et mort après 5 minutes.

SATA autopsie; intestin grêle hyperhémié, gros intestin légèrement congestionné ; exsudation assez considérable.

Le cœur est en diastole ; on note quelques suffusions sanguines aux bases des deux poumons ; rien du côté rénal.

Expérience XX (Personnelle), — Lapin. Poids : 2 k. 585.

Nous injectons dans la veine marginale de l'oreille 48 milligrammes par kilo d'une solution titrée à 15 0/0. Nous notons, immédiatement après l'injection, des phénomènes convulsifs qui durent 3 minutes, puis l'animal tombe dans un état de prostration complète et meurt 7 minutes après.

ÆE) Voie cérébrale. — Expérience XXI (Personnelle). — Lapin : Poids 2 k.860.On injecte dans le cerveau 0,22 centimètres cubes contenant 6 milligrammes de sel neutre de soude. L'animal meurt au bout de 27 minutes avec des con- ‘Lractions cloniques, du trismus, de l'opistothonos et un tableau d'intoxication tel qu'ii fait penser à l'intoxication

par des doses moyennes de strychnine.

Tel estle résumé succinct des expériences principales faites avecles sels de l’'acideanhydro-oxyméthylène-diphosphorique. Les résultats variés de cette étude expérimentale fournissent des conclusions que nous allons discuter en serrant de près les phénomènes observés et en les commentant.

Tout d'abord, faisons remarquer que la dose toxique varie suivant l’individualité de Fanimal, la concentration du sel injecté et la rapidité de l'injection. Nous avons vu, en effet (Expériences XII, XHH, XIV d’une part, et expériences XIX et XX d'autre part), combien la toxicité était. plus grande avec les solutions titrées à 15 0/0 et les phénomènes amenant la mort,-plus rapides, qu avec la deuxième solution titrée à 3 0/0. Alors que dans les. expériences XIT, XHT et XVI, l'animal meurt en quinze et vingt-une

eh)

minutes, dans les expériences XIX et XX, l'animal meurt en 5 minutes, ; minutes au maximum.

D'autre part, nous avons observé que si l'on vient à ralentir l'injection de facon à faire pénétrer un centimètre cube en ro minutes, la dose mortelle s'élève jusqu’à 65, 30 milligrammes de sel de soude par kilogramme.

Quant à ce qui est de l’individualité de l’animal, nous n’en dirons rien, sinon qu’elle est presqu’entièrement dénuée d'intérêt dans le cas particulier. Il reste en effet acquis dañs l'étude des phénomènes toxicologiques que les différentes espèces réagissent différemment au même poison. À D’autres considérations plus importantes découlent de l’expérimentation qui précède. Si nous étudions de près les phénomènes observés suivant les doses introduites dans l'animal, nous remarquons que ce dernier succombe avec une dose de 50 milligrammes de sel neutre de soude par kilog ; si nous diminuons celte dose, pour tomber à 45 mil- ligrammes, nous sommes frappé de constater que, non seulement l'animal ne meurt pas, mais encore, qu'il accuse, au bout de deux ou trois Jours une augmentation de poids notable (Expérience XV). Il existe donc un écart très faible entre la dose rapidement mortelle et celle compatible avec la survie. C'est là un fait, assez exceptionnel dans l'histoire des poisons, pour que nous le signalions. | C’est par les voies circulatoire et intra-cérébrale ‘queles animaux nous ont paru succomber le plus

EG

rapidement ; les injections péritoncales et souscutanées n'ont amené la mort qu'à des doses beaucoup plus fortes : 200 milligrammes d’anhydrooxyméthylène-diphosphate neutre de soude, dans le péritoine, par kilogramme de cobaye, provoquent la mort au bout des 12 heures (Ex. XI) ; sous la peau, 2 grammes et 2 gr. 25 ont été nécessaires. Chez Île lapin, la dose mortelle sous-cutanée fut de 2 gr. 30 à 3 grammes par kilogramme.

Quant à l'administration des sels de l'acide anhydro-oxyméthylène-diphosphorique par la voie buccale, malgré des doses énormes, elle n'a amené la mort que dans un cas (Exp. IV). Les expériences 1, I où deux lapins traités successivement, ingérèrent respectivement 10 grammeset 21 grammes de sel neutre de soude et de sel de chaux acide, sont absolument démonstratives. Aucun phénomène morbide n’apparut. Mème quelques-uns de ces animaux présentérent 4 ou 5 jours après ces expériences une augmentation de poids notable.

Dans lexpérience IV, il s'agit d’un cobaye qui mourut une dizaine d'heures après l'ingestion du sel. La dose avait été de 9 g. 5 de selneutre de soude. L'autopsie révéla une exsudation séreuse intestinale abondante, analogue à celle que provoquent les ingestions salines très concentrées.

En résumé, les doses toxiques de l'acide anhydro-

oxyméthylène-disphosphorique sont donc variables -

et dépendent de la voie par laquelle‘on l'introduit dans l’organisme. Nosexpériences nous ont conduit

1/1 à Ci Si

aux chiffres suivants : Pour tuerun kilogramme d’ani-

mal, il faut, en chiffres ronds : 50 milligrammes par la voie intra-veineuse , 200 milligrammes parla voie péritonéale, 2.500 milligrammes par la voie souscutanée et enfin 9.500 Milligrammes par la voie gastrique.

Cette variabilité dans les chiffres des doses toxiques na rien qui doive surprendre l’expérimentateur. Il est du domaine courant, en effet, qu'une substance quelconque douée d'activité, présente son minimuim d'intensité par la voie buccale, La voie intra-vasculaire vient au premier plan, mais présente, elle aussi, des degrés de toxicité divers, suivant le vaisseau par où est introduite la substance médicamenteuse. Roger, .injectant à des animaux une solution diluée de certains alcaloïdes, iels que la morphine, lastrychnine, l’atropine, la vératrine, etc., tantôt dans la veine porte, tantôt dans une veine de la grande circulation, à vu que la toxicité était deux fois moins forte dans le premier cas que dans le second. Le foie arrête donc les poisons introduits dans l'organisme, en formant avec eux des composés fixes.

Si nous avons relaté les expériences et les conclusions de Roger, c'est que nous allons voir ce qu'elles ont de particulièrement intéressant dans le cas de l'acide anhydro-oxyméthylène-disphosphorique.

Nous nous sommes demandé, en effet, le pourquoi de cette différence des doses toxiques suivant la voie

d'introduction choisie. Pourquoi cette substance,

administrée par les voies digestives est-elle en quelque sorte dépourvue de toxicité (il faudrait environ 500 grammes chez l’homme de poids moyen pour provoquer la mort) alors qu'il suffit de doses relativement faibles par voie circulatoire, pour que l’animal succombe ?

Or, au nombre des hypothèses émises, nous ne saurions invoquer ici l’action d'arrêt du foie, puisque l'injection dans la veine mésentérique du sel neutre de soude de l'acide, a produit l'effet mortel aussi rapidement et aux mêmes doses que l'injection dans la circulation générale (Cf: Expérience XVII, où un lapin, succombe en deux minutes après une injection de 60 milligrammes par kilo).

Y a-t-il donc décomposition de la substance active, dans les voies digestives, par les ferments protéolytiques, analogue à celle produite pour les venins de serpents, pour les poisons végétaux d'origine albuminoïde et pour la plupart des toxines microbiennes ?

Cette hypothèse non plus ne peut être admise, les recherches poursuivies par MM. Gilbert et Posternak ayant montré l'action nulle de ces diastases in vitro sur l'acide anhydro-oxyméthylène-diphosphorique. Comme nous le verrons plus loin (Chap. IF), l'absorption par la voie digestive et l'introducon consécutive dans l’économie de cet acide et de ses sels a été cependant mise hors de doute par l’étude précise du bilan nutritif, chez l’homme mis au régime fixe et défini. Cette étude nous montrera l’'exagération des échanges nutritifs, plus spéciale-

ment des échanges azotés, sous l'influence de l’administration par la bouche de doses même faibles de r acide et de ses sels.

Quoiqu’ il en soit, s’il n’y a point décomposition par les ferments protéolytiques dans le tube digestif, il nous semble légitime d'admettre, avec MM. Gilbert et Lippmann, l hypothèse d’un processus de transformation, sous l’action de l’épithélium intestinal.

Si cette action est réelle, l’épithélium jouerait visà-vis de l'acide anhydro-oxyméthylène-diphosphorique et de ses sels, un rôle analogue à celti qui lui fut attribué vis-à-vis des peptones : rôle de transformation du produit nocif en composés inoffensifs.L'épithélium intestinal exercerait ainsi une influence des plus considérables sur les matières alimentaires en général, - résultat probable de l'adaptation de l'homme et des animaux aux conditions d'alimentation quileur furent imposées. L'homme absorbe, journellement, en effet, quantité de produits empruntés au règne végétal tels que graines de céréales, de légumineuses, tuber-

cules, rhizomés, ete., dont la richesse en acide anhydro-oxyméthylène-diphosphorique est considéra- ANCAÉ TER

C’est donc, vraisemblablement au niveau de l'épithélium intestinal que s ’opérerait le premier stade de l'évolution de l'acide anhydro-oxyméthylène-diphosphorique, évolution qui se termine comme celle de