LAVAGE

Le lavage est fait en trois fois avec de l’eau distillée stérilisée. Les opérations sont faites aseptiquement grâce à un appareil spécial.

On opère de la façon suivante. Tout d’abord on enlève le liquide d’une façon aseptique en utilisant l’appareil schématisé dans la figure 1.

Il se compose d’une fiole tubulée, reliée à une trompe à vide. Au bouchon de cette fiole est adapté un tube de verre long

Ait

de 30 centimètres environ et à l’extrémité effilée duquel se trouve un manchon de verre protecteur, destiné à empêcher les poussières atmosphériques de tomber sur Je col pendant l’opération. Pour utiliser cet appareil, on met en marche la trompe à vide, puis, après flambage on glisse l’extrémité effilée sous le voile du mycélium. Le liquide se trouve alors aspiré très rapidement dans le récipient. On dégage alors la fiole d'ERLENMEYER qui ne contient plus que le mycélium à sec sans liquide.

D s’agit maintenant, avant de remplacer l’ancien liquide par la solution titrée, de laver aseptiquement le mycélium à étudier.

Pratiquement, on fait trois lavages successifs, espacés de trois en trois heures ; toutefois le dernier est fait immédiatement après le précédent, sans attendre. En opérant ainsi, on élimine complètement toutes traces du premier liquide. La technique de ces lavages est la suivante :

On prend un gros ballon Pyrex tubulé à la partie inférieure (fig. 2). Un tube en caoutchouc fort relie cette tubulure à un tube effilé légèrement recourbé à sa partie inférieure, et d’une longueur d'environ 30 centimètres. L'appareil est rempli d’eau distillée, et bouché à sa partie supérieure avec du coton cardé ; la pointe de l’extrémité inférieure du tube de verre est scellée à la lampe. L’appareil entier est porté à l’autoclave pendant 20 minutes à 120°. Après refroidissement on l’adapte à un support, on place une pince de FE 2 Monr sur le tube en caoutchouc et

un manchon de verre à la partie inférieure du tube effilé. La pointe scellée est brisée et l’appareil, rempli d’eau est prêt à fonctionner.

On prend la fiole d'ERLENMEYER contenant le mycélium. On introduit alors la pointe effilée de l’appareil dans la fiole et on la fait glisser sous le voile et on introduit 20 à 25 cc? d’eau sté-

he

rile dans la fiole. On flambe à nouveau avec beaucoup de soin. Pour soutirer cette eau de lavage on opère comme il a été dit au paragraphe précédent.

Après le dernier lavage on est en présence d’un mycélium sec et parfaitement lavé. Si on a bien opéré, ce mycélium n’est ni traumatisé ni contaminé (1).