ASSIMILATION DE NO3K PAR LA MÉTHODE DES VOILES SOLIDES
Nous avons assez insisté sur cette méthode pour passer ici très rapidement sur sa technique.
Le voile est obtenu sur le milieu dont nous avons donné plus haut la formule (voir page 43). Le milieu utilisé pour la substitution est préparé comme suit : nous partons d’une solution mère, puis nous ajustons à des pH différents et complétons par de l’eau bi-distillée, de façon à obtenit une solution nitratée d’un titre connu en azote nitrique (N/10).
a) Solution mère
à dédoubler.
NOSKF NES RER 10,10 gr NAGER SR PRIE 20 »
Citrate de soude ...... 20 »
Glucose Res 50 »
Constante minérale ... 50 cc Eau bi-distillée, q. s. .. 500 »
b) On prépare les milieux à pH différents en se reportant au tableau suivant :
TABLEAU 5 1 2? 3 4 5 6 Solution mère... ... 150 150 150 150 150 150 HOIRANP ER 7er. 24 12 10 6 0 NAOHEN/20 MEET 30 Eau distillée qs pour. 300 300 300 300 300 300
pH obtenu ..... 1.61 2 57 3.51 4.40 6.16 6.40
Les milieux étant placés aseptiquement à la dose de 25 cc. par fiole, sous les voiles d’Aspergillus repens, on place le tout à l'étuve à 27°—28° et l’on abandonne le temps voulu. Sur chaque échantällon on prend le pH, et l’on dose l’azote sous ses formes nitrique et ammoniacale.
Le mycélium est séché et pesé. Toutes ces opérations sont effectuées en suivant les techniques exposées plus haut.
Série I. — Aspergillus repens, pH = 1,6.
Obtention du mycélium sur milieu au bouillon de carotte. Milieu substitué au nitrate de potasse (dont nous venons de donner la composition) et ajusté à pH 1,61.
On utilise 5 groupes de 2 fioles. Les mycéliums sont retirés deux à deux aux temps indiqués sur le tableau. On a ainsi pour chaque groupe deux séries de résultats (voir tableau n° 6).
Le titrage de l’azote nitrique effectué sur le milieu initial donne 35,30 milligrammes pour 25 cc.
L'examen du tableau 6 nous montre une consommation de l’ion nitrique, le phénomène étant surtout marqué à la 47° heure où il disparaît environ 5 milligrammes d’acide nitrique.
Nous notons en même temps une apparition corrélative ou presque d’ammoniaque.
Rappelons que nous nous sommes mis à l’abri de la protéolyse. La série d’essais pratiqués avec des milieux sans azote, mais sucrés ayant établi que le mycélium en présence du sucre ne subit pas de protéolyse, tout au moins aux pH considérés (acide). (Voir tableau n° 1). La disparition progressive de lion NO* entraîne un déplacement du pH vers une zone moins acide.
Voile substitué avec un milieu N/10 en NOK ajusté à pH
Ne
(5 groupes de 2 fioles).
mycelium pH Azote azote nitrique Groupe heure tou pH NO ET Do der en gr. initial niacal résiduel] disparu a 0.216 1.92 1.32 34.08 1092 il 49 15 1,61 2 24 h. 1,61 b 0.172 1.96 0.48 34.3? 0.98 a 0.173 2.08 1.88 32.80 2.50 3 47.30 1,61 b 0.197 2.13 4.72 29.36 5.94 a 0.171 2.11 2.44 32.20 3.10 4 84h 1,61 b 0.178 2.04 0.84 34.16 1.24 a 0.158 2.16 2.88 32.32 2.98 9 132 h 1,61 b 0.187 2.56 2.08 32.64 2.60
Série II. — Aspergillus repens, pH = 2,5.
Obtention du mycélium sur milieu à la carotte. Substitution après 4 lavages en 24 heures par milieu nitraté habituel, ajusté à pH = 2,57.
On utilise 5 groupes de deux fioles comme dans l’expérience précédente, chaque fiole renfermant 35 mmgr. d’azote nitrique pour les 25 cc# de milieu. Les résultats sont relevés sur îe
tableau 7.
