EXPÉRIENCES PAR LA MÉTHODE DES VOILES SOLIDES
La culture indirecte va nous permettre d’obvier, au moins en partie, à l'influence toxique de l’acide oxalique. Les adultes sont en effet plus résistants et peuvent encore assimiler sur des milieux qui ne permettent plus la germination des spores.
Milieu de culture initial :
Le milieu suivant m'a donné de bons résultats
mycéliums
Décoction de carottes à 500 g. p. 2000 cc. .. 1000 cc. Constante minérale Br ee 90 ce.
Glucose cerrsetomRrararteonties ‘ 90 g.
Ciraté de Na me ra here een 20 g. CIN TT ps 6 RES Re 0 20 g.
HGI EESTI 10 cc.
tampon ; l'addition de NaCl a pour but d'augmenter la pression osmotique du milieu, l’Aspergillus repens ayant besoin d’une pression osmotique élevée pour se développer.
Le citrate sert de
Lion
L’addition de HCI a pour but d’amener le pH aux environs de 6, pH optimum pour la germination des spores (KLEBS, MANGix, Bac).
Ce milieu est réparti à la dose de 50cc. dans les fioles d’Erlenmeyer, et stérilisé dans les conditions habituelles,
Ensemencé avec 20 gouttes de l’émulsion de spores, il m'a donné des cultures bien régulières, présentant après 7 jours à l’étuve à 27° (température optima) un début de sporulation. Ce sont des voiles de cet âge que j’ai utilisés.
a) Consommation de l'acide oxalique sur un milieu de substitution complet.
Les résultats obtenus en présence de glucose manquent de netteté, et ces expériences n’ont été effectuées qu’à titre d'orientation. On les trouvera rapportés au tableau XVIII.
On remarquera dans ces expériences la convergence des pH après 24 heures de contact (Fig. 12). Ce phénomène peut s'expliquer de la façon suivante :
Le mycélium agit sur le milieu de deux façons différentes qui font subir au pH des variations de signes contraires. D'une part, le champignon assimile le radical acide et libère ainsi la base qui lui était associée, d’où il résulte une alcalinisation du milieu. D’autre part, BACH a montré que l’Aspergillus repens, à l'encontre de l’Aspergillus niger, peut se comporter avec NO;NH, comme source d’azote de deux façons différentes : dans les milieux acides (pH 3-4) il assimile de préférence l’ion nitrique en libérant de l’ammoniaque ; dans les milieux peu acides, au contraire, il consomme surtout l'ion ammoniacal et les radicaux nitriques mis en liberté acidifient le milieu.
On conçoit donc aisément que suivant le pH initial les variations soient différentes. Les milieux les plus acides s’alcalinisent à la fois par suite de l’assimilation de l’acide oxalique et de l'ion nitrique, les milieux peu acides au contraire s’acidifient par suite de la disparition des ions ammoniacaux que ne compense pas la consommation de l’acide oxalique devenue très faible.
On voit par ces expériences (tableau XVIII) que l’Aspergillus repens assimile beaucoup plus rapidement l'acide oxalique que l’Aspergillus niger. La consommation très forte vers pH 5 diminue
ou.
EXPÉRIENCE XVII (Tableau XVIII,
Milieu de substitution :
Figure 12)
Oxalsterde RON ES TC, ÉCc 25 Sol. detNONEL 45m 100802 o CC.
Constante minérale À... Je:
GDS EL NE ARE Re 1825 HODN meer demeure Variable Han disullée 20050027 qd 2) cc.
TABLEAU XVIII AG oxalique Ua 200. 0 140 mg Glucose -mitial, 453220: l'a 225 DH initiales men RaLRee Variable Durée ER 2 eee 8 et 24 heures
Récolte en m4.
Durée en heures
Série initial
Consommation en Mg.
AC. oæalique final en Mg.
Lemns er heures 24
FIGURE 12. — Convergence des pH par action des voiles d'Aspergillus repens
sur un milieu de substitution complet
rapidement comme la concentration en ions H, suivant en cela la courbe des quantités d’ions oxalate acide présentes dans la solution. On ne peut tirer aucune conclusion quant à la pénétration des molécules entières puisque dans la série la plus acide (pH initial 4,01) les molécules non dissociées n’existent déjà plus, et qu’à aucun moment le milieu ne devient plus acide.
b) Consommation de l'acide oxalique sur un milieu de substitution sans glucose.
La convergence des pH notée plus haut est très gênante pour établir les courbes de consommation en fonction du pH, puisqu'elle tend dans tous les cas à ramener le mycélium dans les mêmes conditions. La suppression du glucose va nous permettre, en diminuant la puissance d’attaque du champignon, d'éviter cet inconvénient.
Une expérience préliminaire m'a permis de constater que le comportement des voiles d’Aspergillus repens était le même qu'ils aient été lavés seulement à l’eau distillée, ou qu’ils aient subi, comme dans le cas de l’Aspergillus niger, un dernier lavage avec une solution
isotonique avec le milieu de substitution. J'ai préféré me servir de ces derniers pour éviter les irrégularités toujours possibles avec les voiles épuisés.
Les voiles utilisés dans les expériences qui vont suivre ont donc été lavés trois fois à l’eau distillée pour les priver du milieu initial, le quatrième lavage, d’une durée de 16 heures, a été effectué avec une solution isotonique avec le milieu de substitution préparée dans les conditions décrites au chapitre précédent.
me en mm
Le CONSOM
Re LE
ge
Acide Uxrali NN S
FIGURE 13. — Consommation de l'acide oxalique en fonction du PH
par l'Aspergillus repens sur ur milieu de substitution sans glucose | : Consommation après 8 heures de contact. Il : Consommation après 24 heures de contact.
111 : Courbe des quantités d'ions oxalate acide présentes dans le milieu.
EXPÉRIENCE XVIII (Tableau XIX, Figure 13)
Milieu de substitution :
Oxslate de KIN PRE ee 06e 20 Constante minérale A... Hicc.
Sol de NO/NH a 361p 100000. 5 ec.
HCl'eL NACRE ee Variable
Eau dstiliéé pement o qs 25cc.
