I. — La méthode des disques

Elle dérive de deux méthodes.

La première employée par Flemming au début des études sur la pénicilline consistait à mettre en présence un germe repiqué sur gelose et des bandes de papier imbibées de solutions à titre variable de pénicilline. La diffusion de l’antibiotique dans la gélose inhibait l’innoculum et la mesure de la zone d’inhibition comparée à celle d’une souche étalonnée permettait de juger le taux de sensibilité du germe étudié.

Pour diminuer le nombre de boîtes de Petri à employer et simplifier la lecture des résultats, Garrod préconisa de ereuser dans la gélose des cupules que l’on remplissait de dilutions variables de l’antibiotique à étudier.

La méthode que nous avons employée remplace les cupules par des disques imbibés de solution de titre donné d’antibiotique que l’on pose sur la gélose de la boîte de Petri. Les divers temps de manipulation sont les suivants :

a) Préparer les boîtes de Pétri avee 20 ce du milieu que l’on sait être le mieux adapté au germe à étudier : gélose lac-

St

tosée tournesolée, milieux au sang, milieux sélectifs : SS ou Christiensen, Pezzer, Steffen, pour le gonocoque.

b) Ensemencer les boîtes. Une goutte du produit à étudier est placée au milieu de la gélose. On l’étend avec une pipette Pasteur coudée, le plus régulièrement possible, en faisant tourner la boîte de Pétri autour de la pipette qui sert d’axe de rotation. Il importe d’obtenir des colonies peu denses et séparées les unes des autres. Pour cela, il convient de diluer les crachats et le pus assez épais au 1/10 et les culots urinaires au 1/500.

c) Placer sur la gélose les disques imbibés de solution d’antibiotique en laissant entre chacun d’eux un espace libre. Les disques sont de couleurs différentes suivant l’antibiotique. Le disque de pénicilline que l’on utilise sera saisi rapidement et le tube qui les contient, refermé soigneusement pour éviter l'hydratation.

d) Recouvrir la boîte. La porter à l’étuve à 37° pendant 24 heures.

Les résultats sont obtenus en mesurant autour de chaque disque le diamètre de la zone où les cultures ont disparu. On peut, à première vue, fixer le ou les « antibiotiques de choix » d’après le plus ou moins grand diamètre de surface claire autour de chacun des disques.

Pour obtenir un résultat quantitatif, Chabbert a établi des courbes de concordance entre les résultats donnés par la méthode de dilution et les diamètres obtenus par la méthode des disques. Cette étude, portant sur 150 souches, a permis d’établir un tableau fixant la sensibilité du germe étudié.