DE CES PRODUITS

Tous nos lapins sont traités par injections soit sous-cutanées, soit intraveineuses. Nous avons eu l’occasion de pratiquer aussi quelques injections intradermiques.

«Les émulsions-mères ou extraits concentrés dont nous venons de voir la préparation sont dilués au moment de l'emploi de façon convenable ; les injections sont pratiquées à l’aide d’une seringue stérile et d’une aiguille plus ou moins fine selon la nature du liquide et le mode de traitement. On opère toujours de façon stérile.

10) INJECTIONS SOUS-CUTANÉES. — Elles sont pratiquées dans le tissu sous-cutané à la face interne de la cuisse. Si le traitement se répète on opère alternativement sur chaque cuisse.

20) INJECTIONS INTRAVEINEUSES. — J/injection est faite dans une veine de l'oreille, de préférence la marginale, dont on a provoqué au préalable le gonflement par friction énergique entre les mains. |

Le traitement ne peut être alterné aux deux oreilles si l'animal doit être tuberculisé, car une oreille intacte est réservée à l'injection d’épreuve, effectuée aussi par voie intraveineuse.

30) INJECTIONS INTRADERMIQUES. — Je liquide est injecté dans Je derme sur ie flanc (préalablement rasé) à l’aide d’une aiguille très fine que l’on enfonce dans un repli de peau main- . tenu entre les doigts. On laisse la peau reprendre sa position et l’on pousse l'injection : on observe un décollement de l’épiderme, de forme arrondie, formant une saillie très nette.

III. — TECHNIQUE ET MÉTHODES UTILISÉES POUR SUIVRE LA RÉACTION DES ANIMAUX TRAITÉS.

10) Pesées.

Les animaux traités sont pesés le plus régulièrement possible, tous les 10 jours, à la même heure, à jeun de préférence. On note les poids obtenus et on en établit les variations d’une pesée à l’autre. Cette différence est rapportée à 100 g. du poids de l'animal: la courbe des pourcentages ainsi obtenus, fonction du nombre de jours, donne des indications sur l’état’. de l'animal, la chute brusque ou régulière étant un mauvais pronostic. H faut tenir compte aussi ici du facteur de croissance, car nous utilisons des animaux qui ne la DIQESTE n'ont pas atteint l’état adulte. |

Nous tiendrons compte dans la traduction de nos courbes, du poids initial, du poids final, des maxima et minima obtenus au cours du traitement, et en particulier du poids au moment de la tuberculisation qui nous servira de base pour établir les pourcentages des pesées ultérieures.

20) Séro-agglutination.

Le taux des agglutinines du sérum est recherché à intervalles réguliers, de 20 ‘jours à un mois selon les cas. Un taux croissant révèle une réaction favorable de l’animal, s’accompagnant de la formation d'anticorps ;. une chute brusque est observée généralement aux approches de la mort. Ù

Pour cette recherche, nous utilisons la technique de A:-Ch. HOLLANDE et Mile PENN qui consiste à mettre en contact des dilutions croissantes de sérum avec une même quantité d’émulsion microbienne de taux déterminé ; on regarde ensuite le

degré d’agglutination obtenu pour chaque dilution, en comparant avec des témoins de l’émulsion et du sérum.

a) OBTENTION DU SÉRUM. PRISES DE SANG. — Les prises de sang se font couramment à la veine marginale de l'oreille à l’aide d’une aiguille stérile à biseau court.

La difficulté d'obtenir du sang en quantité suffisante, par cette méthode, chez certains animaux, nous a obligée parfois à faire une prise de sang intracardiaque, à l’aide d’une aiguille assez longue que l’on enfonce dans un ventricule après avoir au préalable repéré la place du cœur. Ce procédé, rapide et efficace, n’a été employé qu'exceptionnellement, car il est. a sez délicat et fait courir le risque de perdre l'animal.

Le sang est recueilli en tube stérile que l’on abandonne momentanément, incliné, à la température ah laboratoire ; la coagulation terminée, le tube est conservé à la glacière (449), dans une position verticale, en attendant que le sérum exsude. Parfois l’exsudation n’est pas spontanée, il est alors nécessaire de détacher le caïllot des parois auxquelles il adhère, et même de le dilacérer légèrement avec l’anse.

De toutes manières, le sérum prélevé est centrifugé pour isoler les globules qui sont presque inévitablement entraînés, par suite de la faible quantité de sang dont on dispose le plus souvént.

b) OBTENTION DE L'ÉMULSION. — On utilise une émulsion, à 40 millions par cc., de B.K. provenant d'une culture de 48 heures. Ce taux est obtenu par comparaison avec un test établi au préalable, et numéré au néphélomètre. L'émulsion doit être très bien faite pour éviter un dépôt qui gênerait la traduction de la réaction. L'émulsion doit être stable Du une durée de 24 heures au minimum.

c) RÉACTION D’AGGLUTINATION. — On effectue d’abord |des dilutions croissantes de sérum avec du sérum physiologique à 7,50 0/00, dans une série de tubes : dilutions au 1/2,1/3..: 1/10. Dans une autre série de tubes, dits tubes de réaction, on

porte 1/10 cc. des dilutions précédentes et on ajoute 0 cc. 9 d’émulsion ce qui donne des dilutions finales au 1/20, 1/30... 1/100.

Deux tubes dans lesquels on met respectivement o cc. 2 et o cc. 1 de sérum donnent, complétés au centimètre cube avec de l’émulsion, les dilutions du 1/5 et du 1/10 ; enfin la dilution au 1/15 est obtenue à partir de o cc. 2 de sérum au 1/3 et occ. 8 d’émuilsion. On obtient ainsi une gamme du 1/5 au 1/100 qui suffit en général pour nos recherches. Cependant, dans certains cas, où le taux d’agglutination est très élevé et dépasse le 1/100, on opère sur des dilutions supérieures allant jusqu’au 1/200 en utilisant les dilutions de sérum correspondantes.

On prépare en outre un tube-témoin du sérum, qui en est une dilution au 1/5,et un tube-témoin renfermant l’émulsion microbienne en liquide physiologique. Ces diverses mesures sont effectuées à l’aide de pipettes stériles divisées en 1/10 cc.

Souvent, par suite de la faible quantité de sérum dont nous : disposions, nous avons été obligée d’utiliser une autre méthode, qui, bien qu'offrant moins de garantie, nous a permis cependant d’avoir une indication suffisamment précise, en utilisant une quantité minime de sérum : c’est la méthode à la goutte. Les mesures sont faites à l’aide de pipettes Pasteur obtenues en ‘étirant à la flamme un tube de verre stérile ; on sectionne à la lime en son milieu la partie étirée dont le calibre doit être aussi régulier que possible, de façon à obtenir deux pipettes identiques : l’une sert à mesurer le sérum physiologique et l’'émuision, l’autre le sérum et les dilutions.

La méthode est calquée sur la précédente, on compte les gouttes au lieu de mesurer des dixièmes de centimètre cube. Les tubes, convenablement agités, sont portés à la glacière jusqu’au lendemain.

d) LECTURE DE LA RÉACTION, INTERPRÉTATION. — La lecture se fait à la 24€ heure, exceptionnellément un peu plus

tard quañd il y a floculation et retard dans le dépôt des amas microbiens,

RE

On. observe chaque tube en les plaçant devant une source lumineuse et sur fond noir. Les microbes agglutinés se présentent en dépôt au fond du tube ou sur les parois, le liquide qui le surmonte a une opalescence plus où moins prononcée selon le degré de l’agglutination. On peut évaluer le dépôt microbien par vision indirecte au moyen d’un miroir placé au-dessous du fond des tubes.

Par comparaison des divers tubes, entre eux et avec les témoins, on établit le degré d’agglutination de chacun d'eux, que l’on note de la façon suivante :

+ + + + + : Agglutination totale. Microbes en fort dépôt. Liquide

limpide.

+ + + + — : Forts amas microbiens. Liquide légèrement opalescent. + + +—— : Dépôt microbien et opalescence assez nets. + + —— — : Iéger dépôt opalescence nette.

+ — — — — : Très léger dépôt opalescence voisine de celle du tube

témoin.

On fait dans la mesure du possible cette recherche avant tout traitement des animaux; elle est en général négative : dans ce cas, le plus souvent, l’agglutination n'est pas totale au 1/5, ou si elle l’est, elle est partielle dans un petit nombre de tubes.

Elle devient positive lorsqu'elle est totale dans les 2 ou 3 premiers tubes au minimum, des agglutinations partielles s’échelonnant à un taux décroissant sur un assez grand nombre des dilutions suivantes.

3°) Formules leucocytaires.

A l’occasion des prises de sang, nous avons fait des étalements sur lame, avec lesquels nous avons pu suivre:les variations de la formule leucocytaire au cours du traitement. On utilise des lames propres, décapées au mélange alcool-éther et flambées. Une goutte de sang est déposée à une extrémité et étalée régulièrement à l’aide d’une autre lame que l'on déplace sur Îa première, convenablement inclinée, sans trop appuyer.

L,/étalement est séché à l'air, puis fixé 10 minutes à l’alcooléther. On laisse sécher et on colore ensuite par les éosinates à la soude, selon la méthode de A.-Ch. HOLLANDE. On ‘utilise pour cela une solution alcoolique de colorant dont la composition est la suivante : |

Fosinates à la soude : 3 &.

Alcool méthylique : : 250 ec.

Cette solution-mère est diluée au 1/102 avec de l’eau distillée au moment de l'emploi en prenant soin de verser le colorant filtré dans l’eau, pour plus de stabilité. Il en faut environ 5 cé. par lame. Après un contact de 35 à 40 minutes, on lave à l’eau distillée et on examine à l'objectif à immersion la lame sèche.

Les hématies ont une couleur rose très pâle. Les leucocytes ont un noyau violet, un protoplasme incolore où bleu selon qu’il s’agit de polynucléaires ou mononucléaires. Les polynucléaires présentent des granulations orangées ou roses, violacées, ou couleur brique, de nombre et de taille variables, selon que l’on a affaire à des éosinophiles, basophiles, neutrophiles ; ces noyaux sont multilobés ou en bissac.

Les lymphocytes se présentent tantôt sous forme de petits globules à gros noyau arrondi, le protoplasme ne figurant que sous forme d’un mince liseret bleu (petits lymphocytes), tantôt sous forme de globules plus volumineux à protoplasme plus important, un peu moins coloré ; le noyau a souvent une petite encoche (moyens lymphocytes).

Les monocytes sont de gros leucocytes où le noyau est de forme plus irrégulière, souvent en bissac ; le protoplasme est plus important, mais d’un bleu plus pâle que chez les lymphocytes ; il présente parfois des granulations azurophiles.

On déplace la lame sous l'objectif et l’on note le nombre de polynucléaires, lymphocytes et monocytes rencontrés. On établit le pourcentage de chaque groupe et on calcule le lymphocyte

dont de nombreux travaux nous ont monocyte

rapport

révélé l'importance dans l'étude de la tuberculose. Les variations de ce rapport au cours du traitement sont mises en évidence par une courbe.

4°) Autopsie.

Lorsque l'animal meurt des suites de son traitement, ou est sacrifié (on l’asphyxie à l’aide d’un tampon dé coton imbibé de chloroforme), on pratique sur le cadavre une autopsie qui permet de se rendre compte de l’état de ses organes ; on note l'aspect des lésions, leur forme, leur emplacement ; les organes lésés sont d’ailleurs conservés dans du formol dilué de moitié ; des fragments sont mis dans un mélange fixateur pour permettre de faire à l’occasion une étude histologique des parties lésées. |

FH