PREPARATION DU JUS

La drogue sèche Herba Aristolochia clematitis concisa fut pulvérisée dans un mortier de fer couvert, par petites portions, tamisée, repulvérisée et tamisée une dernière fois pour obtenir une poudre fine; par cette méthode nous avons pu éliminer toutes les parties inutiles, étrangères à la feuille.

Cette poudre fut alors soumise à une infusion au 1/5 avec de l’eau potable, infusion d’une durée de 10 à 15 minutes. Après expression à travers une presse et filtration sur coton et.papier filtre, nous nous trouvâmes en présence d’un jus analogue à celui retiré de la feuille fraiche avec comme seule différence une couleur un peu plus claire, cette dernière provenant de la dilution.

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Avant de procéder à son essai, nous le filtrâmes stérilement, En effet, ne sachant pas de prime abord si notre principe actif était thermostable ou thermolabile, nous ne pouvions nous engager ni dans une stérilisation à l’autoclave, ni dans une tyndallisation.

S'il est vrai que dans la médecine populaire, on emploie l’Aristoloche sèche ou plutôt sa feuille sous forme d’infusion, raison pour laquelle nous partimes également de l’infusion, la durée n’en excède pas 15 minutes pour une température initiale de 100°. Or, la stérilisation à l’autoclave demande 120° pendant 15 minutes et la tyndallisation bien que n’exigeant que 70° réclame pourtant une durée de 3 heures en tout.

La technique de cette filtration est assez simple. Sur une fiole à vide on adapte une monture dans laquelle il est possible d’encastrer un ultrafiltre de Seitz. On stérilise le tout 20 minutes à 120° à l’autoclave, en ayant eu soin de boucher au coton la partie de la fiole qu’on reliera à la trompe à vide. Après stérilisation, on verse le jus sur le filtre et au moyen de la trompe le jus passe dans la fiole que l’on bouchera avec un coton flambé à la fin de l’opération après avoir enlevé la monture avec l’ultrafiltre. Le jus dans la fiole est absolument stérile.

Pour titrer le jus, nous allons rappeler brièvement les quelques méthodes qui se trouvent à notre disposition.

METHODES DE DOSAGES, Titrage par dilutions.

C’est la plus simple. On prépare une gamme de tubes avec 4,5 cc. de bouillon. Dans le premier tube on met 0,5 cc. d'une solution de l’antibiotique à essayer. De ce premier tube on prélève 0,5 cc. qu’on ajoute au deuxième tube. De celui on en reprend 0,5 cc. pour le troisième et ainsi de suite. Tous les tubes de la gamme sont ensemencés avec 0,5 cc. d’une suspension de microbes à étudier, suspension d'une culture de 24 heures. On détermine ainsi la dilution limite pour laquelle il n’y a plus de cultures après un séjour de 20 heures à l’étuve à 37°.

Titrage d’après le procédé de Heatley.

Il prévoit emploi de petits cylindres en porcelaine de diamètre et longueur constants. On coule dans la boîte de Pétri, servant au dosage, une couche de gélose ensemencée

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en surface. Après solidification, on fixe à la surface de la

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gélose des petits cylindres dans lesquels on ajoute des gouttes de solutions plus ou moins concentrées en antibiotiques. On peut alors observer des zones de lyse claires et transparentes, de forme circulaire autour des cylindres, dont on mesure le diamètre. Les cylindres ont un diamètre extérieur de 7,2 et intérieur de 5 mm.

Titrage d’après le procédé de Vincent.

On remplace les cylindres de la méthode de Heatley par des disques de papier filtre d’un diamètre de 7,5 mm. qu’on trempe dans la solution à étudier et qu’on applique à la surface de la gélose ensemencée préalablement. On obtient les mêmes phénomènes.

Méthode qualificative, ou gouttières de Flemming.

On fait des stries dans la gélose ensemencée et on y coule des solutions d’antibiotiques. Suivant la largeur de la zone de lyse, on peut évaluer le pouvoir antibiotique de la substance ou de sa dilution.

Unité Oxford (pour la Pénicilline). —— C’est la quantité minima de Pénicilline, qui, dissoute dans 50 cc. de bouillon de viande, inhibe complètement la croissance d’une souche type de Staphylocoque doré.

Citons encore la méthode de Vitastain sur laquelle nous reviendrons plus loin.

Au début de nos réactions, c’est à la méthode des dilutions un peu modifiée que nous nous sommes adressés.