EXPERIENCES SUR STAPHYLOCOCCUS AUREUS

Pour l'étude de cette bactérie, nous avons utilisé un milieu liquide dont la composition est la suivante:

PÉRIODE RE A ne tente on 20 gr.

CMOS CNE TS Gevere AOL.

Éhlorurende Sous 700. 2 gr.

Pauiordinairetiinl. "eme Mb 1000 gr.

On dissout la peptone dans l’eau (900 gr.) à la vapeur fluente. Le glucose et le sel sont mis en solution à part dans 100 gr. d’eau; on réunit les deux portions qu’on ajuste à un Ph voisin de la neutralité 6,8-7,2 avec de la soude au 1/10.

On répartit le milieu à raison de 2,5 cc. dans des tubes à essai. On en prend 8 pour réaliser une gamme et l’on ajoute de l’eau ordinaire dans les tubes (2), (4), (5), (6) comme l’in-

engEt, e

dique le tableau suivant. Les tubes de la gamme et les autres sont ensuite stérilisés 15 minutes à 120°. Une fois la stérilisation terminée, on y distribue au moyen de pipettes stériles le jus à raison de 2,5 cc. dans le premier, 1 cc. dans le deuxième et 0,5 cc. dans les 5 tubes suivants. On agite, le contenu est homogène.

Cette addition d’eau. potable est nécessaire pour arriver à des dilutions parfaitement définies. Ainsi dans le premier tube on a une dilution de 1/2 qui, s’ajoutant à une dilution initiale de 1/5, nous donne comme dilution définitive 1/10 et ainsi de suite.

Tubes

Jus au: 1/5

Eau potable.

Bouillon. . .

Dilutions

Le tube (7) est un témoin pour nous assurer que le jus est bien resté stérile, et le tube (8) un autre témoin pour le contrôle éventuel du S'aphylocoque (pureté).

Après la distribution du jus, on ajoute stérilement dans chacun des tubes à l'exception de (7) au moyen d’une pipette de Pasteur 5 gouttes d’une suspension de Staphylocoque doré âgé de 24 heures dans le même milieu liquide et que l’on a agité avant l’emploi. On dispose: à l’étuve à 37°.

La souche de ce Staphylocoque est conservée sur gélose à la glacière et repiquée toutes les 3 à 4 semaines également sur gélose. C’est à partir de la souche solide qu’on ensemence le milieu liquide pour obtenir la culture de 24 heures employée plus haut. Pour toutes nos expériences avec le Staphylocoque nous nous sommes toujours adressés à cette même souche.

Après 24 heures de séjour à l’étuve à 37° on constate à première vue que tous les tubes montrent une culture, excepté le n° (7), ce qui nous prouve que le jus est bien resté stérile. Comme les 2 premiers tubes sont assez foncés, le trouble provoqué par le Staphylocoque n’est pas très apparent, On préfère repiquer chacun des 6 tubes dans 2,5 ec. de bouillon liquide et stérile au moyen d’une œse par tube. On replace les 2 gammes à l’étuve à 37°. 24 heures après, on aperçoit nettement dans la 2° gamme les tubes qui avaient poussé

24 heures auparavant dans la 1" gamme. On repique à ce moment la 1" gamme qui est âgée de 48 heures dans une 3° gamme et on dispose à l’étuve et ainsi de suite.

Dans le tableau qui suit, nous constatons

Tubes

Dilutions

24 heures . .

qu’au bout de 24 heures aucune action antibiotique n’a eu lieu. Au bout de 48 heures dans (1) et 72 heures dans (2) et (3). toute trace de microbes vivants a disparu.

Il faut conclure qu’au bout de 24 h: dans (1) et 48 h. dans (2) et (3) l’action n’était que bactériostatique. Les microbes n’ont pas pu se développer beaucoup ou même pas du tout. Ce n’est qu’au bout de 48 h. dans (1) et 72 h. dans (2) et (3) qu'ils ont été tués, donc à ce moment l’action est devenue bactéricide. Si l’on prélève une œse du premier tube de la 1° gamme au bout de 48 h. et qu’on l’examine au microscope après fixation et coloration à la Fuchsine diluée, on voit nettement des coques désagrégés. L'action bactéricide est donc accompagnée d’une action bactériolytique.

Les coques semblent pouvoir se multiplier au début, puis ensuite s'arrêter de croître, s’hypertrophier et se désagréger à la fin.

En conclusion, le jus d’Aristoloche est actif jusqu’à une dilution se situant entre 1/30 et 1/40 donc aux environs de 1/35.

EXPERIENCES SUR ESCHERICHIA COLI.

La méthode générale employée pour le Staphylocoque peut être utilisée ici. Pour la:culture du Bacille coli, on utilise un milieu spécial: le bouillon au bleu de bromothymol glucosé. En voici les caractéristiques.

jre solution:

Pépioné 22-42 re Re ME HUE Chlorure de Sodium 22 0,5 gr.

Eau -distilléees 22e re 100 gr.

On dissout la peptone à la vapeur fluente, on ajuste à UP 1722:

2e solution:

Blenide brOMOINRyMOIT HT CET 0,4 gr AÏCOOL PE RCE PT EU RTE PERS 100 cc.

EAU AISNE RAS ACER PP CCPER LE 200 ce

On dissout le colorant dans l’alcool, on ajoute l’eau tout en agitant pour bien homogénéiser. On fait ensuite le mélange suivant:

DOLUITIOI EL) TE er pe nee 00 "CC:

SOIUHOMIG) CE LR OT EME AUMECC:

GHACOSE ERREUR EE CU 2,5 gr.

On chauffe pour dissoudre; après filtration, on répartit 2,5 cc. dans chaque tube et on stérilise 30 minutes à 110°. On peut introduire un petit tube à hémolyse renversé dans le tube à essai pour constater que si le Bacille coli pousse il y a dégagement gazeux. Mais comme il acidifie, le milieu et que le bleu de bromothymol vire au rouge puis au jaune, cette dernière caractéristique suffira amplement pour nos recherches.

Nous opérons donc de la même facon à la seule différence que nous ensemençons dans les tubes 5 gouttes d’une culture âgée de 24 h. de Bacille coli, culture liquide et jau-

nâtre. On place à l’étuve à 37° et l’on repique au bout de 24, 48, 72 heures.

Résultats:

Tubes .

Dilutions 24 heures

Aie.

Il apparaît donc qu'aux dilutions où nous travaillons aucune action antibiotique ne peut être mise en évidence. Le trouble du premier tube de la première gamme semble moins intense que le trouble des suivants. Il faudrait donc concentrer le produit. Cette concentration nous la réaliserons par la suite.