IV. — PYOCYANINE
Bacillus pyocyaneus GESSARD peut produire quatre pigments: une substance bleue la pyocyanine de ForDos, une substance fluorescente, une matière colorante rouge et un pigment mélanique.
La fluorescence, vu sa fréquence chez de nombreuses espèces bactériennes n’a pas grande valeur diagnostique. Les pigments rouge et noir ne définissent pas suffisamment l'espèce pyocyanique. La pyocyanine seule est spécifique et caractérise B. pyocyaneus.
GEssArD (1882) décrivait B. pyocyaneus comme un germe donnant trois sortes de pigments: un gris bleu soluble dans le chloroforme, un verdätre insoluble dans le chloroforme et l'alcool, mais soluble dans l’eau, un rouge brun qui n’a pu être caractérisé au début.
Une étude plus approfondie dûe à BoLAnND (1899) a montré qu'il fallait reconnaître deux pigments : l’un la pyocyanine avec son dérivé la pyoxanthose et l’autre la fluorescéine.
En ce qui concerne la pyoxanthose, BOLAND a supposé qu’elle était un dérivé de la pyocyanine. Il a constaté, en effet, que sous l’action des substances réductrices le pigment bleu devient jaune blanchâtre. Bien d’autres auteurs ont observé cette transformation de la pyocyanine. Si en solution chloroformique à l’air libre cette transformation s'effectue lentement, au soleil elle s'effectue beaucoup plus rapidement. Les rayons solaires agissant sur le chloroforme mettent en liberté, le chlore, auquel setrait imputable cette transformation. |
La fluorescence verte est dûe à une substance soluble dans l’eau maïs insoluble dans l'alcool et le chloroforme ; ce n’est pas une particularité de B. pyocyaneus car elle est produite par d’autres Bactéries. Certaines espèces telles que B. fluorescens ne sécrètent que cette substance: d’autres au contraire, telles que B. Le Monnieri, B. chlororaphis, B. caryocyaneus, B. cyaneo-fluorescens, etc. produisent un pigment bleu en même temps que le pigment fluorescent.
La fluorescence à été étudiée d’une façon magistrale au point de vue spectroscopique et spectrographique par DHÉRÉ (1933) dont les remarquables travaux sont très connus des Biologistes.
= 189 LS Extraction de la Pyocyanine
En 1860 Forpos isole à l’état cristallisé sous forme de prismes ou d’aiguilles d’un beau bleu, le pigment du Bacille du pus bleu auquel il donne le nom de pyocvanine.
La pyocyanine rougit par les acides et vire de nouveau au bleu par les alcalis tout comme le tournesol.
GESSARD (1800), à cause de certaines de ses réactions, la rapproche des bases organiques.
= Les réducteurs la décolorent et la changent, comme l’indigo bleu, en dérivé blanc. L’agitation à l’air fait réapparaître la couleur bleue originelle.
L'extraction se fait grâce à la solubilité de la pyocyanine (base) dans le chloroforme. Par évaporation de cette solution chloroformique on obtient la pyocyanine cristallisée. GESSARD note cependant que d’autres substances ont pu passer dans le chloroforme et se retrouver dans le résidu de l’évaporation d’où, nécessité d’une purification.
Dans son étude sur les pigments microbiens LASSEUR a extrait la pyocyanine qui a servi pour ses expériences, par le procédé FORDOS GESSARD. Il évitait l'oxydation et la transformation partielle en pyoxanthose en effectuant les cristallisations dans le vide, celles-ci au nombre de trois.
Le chlorhydrate de pyocyanine, pratiquement stable à la température et à la pression ordinaires, se dissocie facilement dans le vide et à la US rature du Laboratoire.
En opérant sous une pression réduite, il est Dossible, en faisant durer acide sulfurique) d’obtenir un produit donnant dans l’eau une solution bleue.
Pour éviter l’altération rapide, LASsEUR dissout le chlorhydrate de pyocyanine dans très peu d’alcool absolu. I le précipite de sa solution alcoolique à l’aide de l’éther anhydre. Cette opération répétée trois fois évite l'hydrolyse du sel.
l'opération plusieurs jours (sous un exsiccateur à
Composition de la Pyocyanine
LEDDERHOSE (1888) attribuait à la pyocyanine la formule globale suivante :
