AGENTS PHYSIQUES ET CHIMIQUES

La lumière solaire altère les cultures en détruisant une sucrase sécrétée par B. viscofucatus.

L’oxygène est nécessaire à la vie de ce germe. Un tube ensemencé et cacheté avec de la cire présente un développement abondant, mais il ne se produit aucun pigment. Si on ouvre le tube, le pigment réapparaît, mais redisparait en trois jours, si on referme le tube hermétiquement. On observe en même temps un fort dégagement gazeux. Le chlorure de sodium gène la croissance et la production du pigment.

Dans les milieux contenant 8 % de chlorure de sodium la production du pigment s’amoindrit et à O % la croissance est complètement arrêtée,

CARACTÈRES DE CULTURE

MILIEUX SOLIDES

Gélatine. — La gélatine à 10 % se montre défavorable à la croissance de B. wiscofucatus même si elle est additionnée d’hydrates de carbone. Il en est de même pour la production de pigment. Le développement est amélioré en réduisant la concentration de gélatine à 6 %.

Gélatine sucrée. — Par addition d'hydrate de carbone, on obtient un milieu électif: gélatine 6 %, extrait Liebig 0,5 %, hydrate de carbone

25 %, chlorure de sodium 0,5 %. Au bout de 24 heures à 20 ° C. les colonies apparaissent sur ce milieu, mais il n’y a pas encore de pigmentation. Au bout de cinq jours les colonies de surface ont environ 1 mm. La liquéfaction commence dans les parties de la plaque où les colonies sont les plus nombreuses. Elles sont gommeuses et s’enlèvent facilement.

On peut alors distinguer deux sortes de colonies: bleues et violettes sur gélatine sucrée (saccharose, dextrose, mannite et maltose), vertes sur gélatine sans hydrates de carbone, ou additionnée de dextrine, de galactose ou d’amidon. La coloration violette des colonies ressemble plus au violet de gentiane qu’à la teinte violaceus de la table de SACCARDO.

Sur gélatine maltosée les colonies sont violet foncé, il y a peu de grains de pigment.

Sur gélatine saccharosée les colonies étaient d’un bleu très net dans certaines parties, violettes dans d’autres, tandis que sur gélatine dextrosée et mannitée elles étaient nettement bleues bien que présentant du vert foncé par places; on notait en même temps de nombreux grains de pigment dans les parties où la gélatine était colorée, c’est-à-dire où il y avait

le plus de sucre.

= Sur gélatine sans hydrates de carbone il est à remarquer que certaines colonies vertes présentent des cristaux incolores entourant les colonies à une certaine distance; ces cristaux accusent une forme pyramidale à base carrée et sont placés bout à bout.

Ensemencé sur gélatine en piqüre B. ziscofucatus ne se développe que faiblement. En ajoutant à ce milieu des hydrates de carbone on a au bout de 24 heures une colonie plate, blanche, parfois pigmentée, qui croit le long du canal d’inoculation. Au bout de huit à dix jours la liquéfaction commence sur gélatine mannitée, plus tard avec d’autres sucres. Au bout de deux mois le tube est complètement noir, toute la gélatine est liquéfiée.

Gélatine alcaline. — Si on alcalinise la gélatine avec de la potasse N/10, le pigment se manifeste, mais à condition que l’alcalinité ne soit pas trop grande. Une acidité notable gène la production de pigment.

Gélose. — La gélose peptonée semble peu favorable au développement de B. viscofucatus. La croissance est lente; en dix-huit jours on n’observe aucun pigment. Si on ajoute 1 % de saccharose à la gélose neutralisée en présence de phtaléine on observe une croissance rapide et abondante, l’eau de condensation étant très visqueuse, il n’y a pas production de pigment.

En utilisant de la gélose à l'extrait Liebig de composition suivante:

Extrait Liebig 0,5 %, peptone 1. %, chlorure de sodium 0,5 %, gélose 1 %, préalablement acidifiée on observe une croissance rapide à la température de 18°-22° C.

Sur gélose saccharosée les colonies sont mi-bleues, mi-violettes.

Sur gélose dextrinée elles prennent une teinte bleue franche.

Pomme de terre. — Sur pomme de terre le pigment colore lé tubercule en bleu verdâtre, puis en bleu brillant, devenant foncé (à 18°-22° C.) après quatre à sept jours. Au bout de huit jours la coloration commence à atteindre la colonie microbienne, mais elle reste toujours moins colorée que le substratum. À une température de 25°-27° C. le bleu apparaît déjà après 24 heures, mais disparaît beaucoup plus vite. Si on opère à 37° C. il n’y a plus de coloration.

MILIEUX SOLIDES

Lait. — Cultivé sur lait B. viscofucatus donne une coloration bleue ou bleue foncée. La peptonisation atteint 2 à 3 mm. de profondeur en six jours. Au bout de quinze jours la transformation est complète.

Les cultures sur lait en flacon (à 25°-27° C.) présentent en huit jours une coloration verte diffuse, dans la moitié supérieure du flacon.

MILIEUX SYNTHÉTIQUES

Les milieux permettant le mieux de mettre en évidence le pigment, sont les liquides de Con. Tel est du moins l'avis des auteurs.

Les liquides de CoHN sont gélosés à 1 %. Le développement est rapide. Le pigment atteint sont maximum d'intensité en quatre à cinq jours de culture à 20° C. et colore tout le milieu. Cette teinte persiste douze jours, puis prend une teinte vineuse. Cette couleur est très visible par transparence. Le milieu d’abord translucide devient opaque, puis une couleur verte remplace la teinte vineuse, faisant place à une coloration ocre au bout de deux mois. # ,

Certaines cultures évoluent plus rapidement et la couleur bleue est remplacée par une teinte jaune ambrée.

Les différentes teintes ont été évaluées à l’aide de l'échelle de teintes de SACCARDO. On a observé les teintes suivantes: 29 ochraceus, 30 melleus, 31 ferrugineus, 33 flavo-virens, 36 prasinus, 37 aerugineus, 40 atrocyaneus, 41 cyaneus, 42 cœruleus, 44 plumbeus, 46 atro-violaceus, 47 violaceus, 49 lividus, 50 vinosus.

PIGMENT

Il semble que la production de pigment est sous la dépendance d’hydrates de carbone et d'éléments minéraux, ainsi que sous l'influence de l'acidité. La fonction chromogène est favorisée en milieu acide.

Extraction. — Le pigment est extrait des cultures sur agar par l'alcool à 50°. On obtient une solution bleue par réflexion, vineuse par transparence. Ce pigment précipite par addition d’alcool à 95° et le filtrat garde sa couleur vineuse.

Propriétés du pigment. — Te pigment est soluble dans l’eau, dans l’alcool faible, insoluble dans l'alcool, l’éther, la benzine, le chloroforme.

En traitant le pigment par l’acide chlorhydrique, sulfurique ou azotique, il devient bleu brillant, violet, puis vineux. Avec des solutions acides N/10 la variation est plus lente et moins intense. On observe les mêmes phénomènes avec les acides organiques.

Les solutions alcalines de soude N, de potasse N, de carbonate de soude font passer la couleur bleue primitive au bleu verdâtre, puis la font disparaître.

Les solutions alcalines N/10 ou de concentration plus faible produisent des variations de couleur mais plus lentement. Par addition d’un excès d’acide ou d’alcali on fera apparaître à volonté la coloration vineuse ou bleue. La coloration vineuse peut elle-même être changée en bleu vert par un excès d’alcali.

Le sulfate de magnésium change le bleu en violet intense.

Toutes ces variations se produisent en l’espace de quelques minutes. Selon les réactifs utilisés les morceaux d’agar colorés sur lesquels ils agissent prennent un aspect de pierres précieuses brillantes telles que saphir, améthyste, émeraude.

Le chlorure de sodium a une action différente suivant la proportion dans laquelle il est mélangé au milieu de culture. À 1 % déjà il exerce une action défavorable sur la croissance et la pigmentation. Cette action se confirme avec l'augmentation de la concentration en chlorure de sodium. Dans la proportion de 9 % la croissance et la pigmentation sont totalement arrêtées.