ETUDE PRATIQUE DE LA COAGULATION PAR LA TRYPSINE

Nous avons utilisé dans nos expériences de la trypsine Merck que Monsieur le Pharmacien Principal Babin a bien voulu mettre à notre disposition, nous l’en remercions bien vivement.

Nous plaçant à un point de vue pratique, nous avons voulu savoir s’il était possible d'utiliser la trypsine pour mesurer le taux de la prothrombine plasmatique. Toutes nos recherches ont done été faites sur des plasmas humains normaux ou pathologiques qui, décalcifiés, étaient par la suite recalcifiés. Nous cherchions en effet à obtenir un temps de coagulation suffisamment court pour une faible concentration de trypsine, ce qui nous permettait de diminuer la protéolyse des éléments du plasma pendant le temps nécessaire à la formation du caillot.

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a) MÉTHODE D’ ETUDE :

Nous avons utilisé une méthode imitée de celle de Quick mais où la thromboplastine était remplacée par une solution de trypsine.

Voici un schéma de notre technique :

On met, dans un tube à hémolyse maintenu à 38° au bain-marie :

Solution de trypsime 7.....,+. + 026:

Solution Tecalcifiante .......... 0/2%et:

A ÉSre CHU), M re OP TT 0,2 cc.

Les trois solutions doivent être ajoutées dans cet ordre pour éviter que la trypsine n’agisse sur le plasma avant l'adjonction du calcium. Le chronographe est déclanché lors de l'addition du plasma et arrêté dès que la coagulation se produit.

b) DÉTERMINATION DE LA SOLUTION DE TRYPSINE :

Quand on veut utiliser la trypsine comme agent coagulant, il faut tenir compte :

— Du pH de la solution,

— De l’activité protéolytique du ferment sur le fibrinogène.

1°) Le PH : Le pH obtimum d'action de la trypsine est compris entre 7,3 et 7,8; on ajoutera done un tampon au phosphate dans la solution où sera dissoute la trypsine, Voici la composition que nous avons adoptée :

Sérum physiologique à 9 p. 1.000. 160 Solution décalcifiante .......... 0,2 ec.

Tampon au phosphate (PH 7,6).. 0,8 ce.

2°). CONCENTRATION EN TRYPSINE : La concentration en trypsine doit être bien déterminée pour éviter la protéolyse trop rapide du fibrinogène.

Nous avons fait une série de dilutions de trypsine dont les titres étaient : 10 p. 100, 5 p. 100, 2,5 p. 100 et 1 p. 100.

Nous avons constaté que pour un taux de 10 p. 100 de trypsine, la coagulation ne se produisait pas. Nous avons pu vérifier que l’adjonction de thrombine pure n'entraînait alors aucune coagulation, done le fibrinogène avait été digéré avat d'avoir pu se coaguler,

La concentration de 2,5 p. 100 nous ayant paru optima, en première approximation, nous avons essayé de déterminer si des concentrations comprises entre 2,5 et 4 grammes et 2,5 et 1,5 grammes p. 100, donnaient des temps plus courts. Nous n'avons pas trouvé de grandes différences entre les temps obtenus pour des solutions de trypsine à 3 gr. p. 100 et à 2,5 grammes p. 100, mais au contraire au-dessus et au-dessous de ces valeurs, le temps de coagulation augmente soit pas digestion du fibrinogène, soit par insuffisance en trypsine.

Dans le reste de notre travail, nous utiliserons donc une solution de trypsine à 2,5 grammes p. 100 dans un solvant ayant la composition déterminée ci-dessus.