RÉVÉLATEURS

Il existe différents réactifs colorés permettant de révéler les spots des sucres. Nous avons choisi les deux suivants :

— Le Réactif au naphtorésorcinol, indiqué par PARTRIDGE [38] qui révèle en rouge le lévolose et le saccharose.

Il est obtenu en mélangeant à parties égales les deux solutions suivantes :

Solution à 2 p. 1000 de naphtorésorcinol dans l'alcool à 95 c.

Solution à 2 p. 1000 d’acide trichloracétique dans l’eau.

— Le réactif à l’oxalate d’aniline, indiqué par Horrockxs [39], qui révèle en brun le glucose.

Acide oxalique : 50 ml. d’une solution aqueuse à 25,2 g p. 1000

Aniline : 0,93 g en solution dans 50 ml d’alcool à 95 c.

MODE OPÉRATOIRE

On utilise des feuilles de papier de 26 cm. de large sur 26 em. de haut. A 5 cm. de la base, on trace un trait parallèle à celle-ci. Sur cette droite on marque des points à partir de 2 cm. du bord et ensuite tous les 3 cm. C’est sur ces points que nous déposerons de petites gouttes de la solution à étudier, à l’aide de micropipettes calibrées. Si la solution est suffisamment dilués, nous déposerons plusieurs gouttes en attendant chaque fois que la goutte précédente soit complètement sèche ; cette dessiccation est rapide si on opère sur une platine chauffante que l’on recouvre d’une plaque de porcelaine pour ne pas salir le chromatogramme.

On procède à une chromatographie descendante de 48 heures, ou une chromatographie ascendante de 24 heures.

On fait quatre chromatogrammes

deux avec le Solvant I

deux avec le Solvant IT

Deux chromatogrammes, obtenus avec des solvants différents sont révélés par le réactif au naphtorésorcinol ; les deux autres par le réactif à l’oxalate d’aniline.

Les résultats obtenus sont indiqués dans la figure n° 1.

Lignes de depart

Saccharose

Glucose

Levulose

Fronts du Solvant

de evulose Saccharose Blucose

Lignes de depart

Fig. 1. — A gauche : chromatogrammes révélés par le réactif au naphtorésorcinol ; à droite : chromatogrammes révélés par le réactif à l’oxalate d’aniline : en haut : chromatogrammes obtenus avec le solvant I, chromatographie descendante de 48 heures ; en bas : chromatogrammes obtenus avec le solvant II, chromatographie ascendante de 24 heures.

RÉSULTATS

Les résultats obtenus sont différents suivant la concentration en saccharose de la solution utilisée. Nous envisagerons tout d’abord le cas de solutions dont la teneur en saccharose est à la limite des possibilités d'identification de cette méthode; puis nous verrons le cas de solutions plus riches et plus pauvres en saccharose.

I. — Solutions dont la teneur en saccharose est égale au 1/200 de la teneur en sucres réducteurs (glucose et lévulose à parties égales). Soit la solution | glucose 100 g lévulose 100 g saccharose 1 g eau distillée q.s.p. 1000 ml

Nous sommes à la limite qui nous permet d’obtenir pour le saccharose une tache nette quoique très faible. Nous verrons plus loin comment on peut s'assurer que cette tache représente avec certitude du saccharose.

Pour obtenir cette tache, nous sommes obligés de déposer sur le papier un nombre de gouttes important, destiné à fournir une quantité de saccharose suffisante. Si nous augmentons ce nombre pour avoir davantage de saccharose, nous accroissons également la quantité de glucose et de. lévulose dans de bien plus grandes proportions. Nous sommes donc limités par le pouvoir d'absorption du papier et sa capacité de séparation par chromatographie.

IT. — Solutions dont la teneur en saccharose est supérieure au 1/200 de la teneur en sucres réducteurs.

Par la méthode indiquée, on obtient une tache nette qui correspond au saccharose. On peut déterminer approximativement le taux de la solution en saccharose. Pour cela, on dose par les méthodes chimiques les sucres réducteurs de la solution. On prépare des solutions contenant la même quantité de sucres réducteurs et des taux de saccharose variables : 1/200, 1/100, 1/50, 1/30. On dépose sur le chromatogramme en des points différents la même quantité de la solution à doser et des solutions précédentes. Après révélation, la comparaison de l'intensité et surtout

GLUCIDES DE LA VIGNE il

de la grosseur des taches nous donne une idée sur la teneur de la solution en saccharose.

Si la solution est trop concentrée en saccharose, on peut diminuer le pourcentage de ce dernier, par addition de quantités connues de glucose et de lévulose.

III. — Solutions dont la teneur en saccharose est inférieure au 1/200 de la teneur en sucres réducteurs.

La présence de saccharose est indécelable par la méthode précédente, de même que par les méthodes chimiques. Nous avons sensibilisé cette méthode par un enrichissement de la solution en saccharose.

Ceci nous a permis de déceler la présence de saccharose dans la solution suivante :

glucose 100 g lévulose 100 g saccharose 0,10 g

eau distillée q.s.p. 10000 ml.

ce qui correspond à une concentration en saccharose égale au 1/2000 de la teneur en sucres réducteurs, soit dix fois moins que précédemment.

Cette solution enrichie en saccharose est alors soumise à une chromatographie descendante avec le solvant I, ou à une chromatographie ascendante avec le solvant II. Après révélation nous obtenons une tache très nette de saccharose.

Cet enrichissement sera utilisé chaque fois que la caractérisation du saccharose par chromatographie de la solution initiale sera négative ; elle nous permettra de déceler ce sucre à des concentrations variant de 1/200 à 1/2000, sans qu’il soit toutefois possible d'évaluer cette concentration avec précision. On pourra seulement. apprécier si elle se trouve au voisinage de 1/200 ou de 1/2000 ou entre les deux, vers 1/1000,