ENRICHISSEMENT EN SACCHAROSE DE PETITES QUANTITÉS DE SOLUTIONS SUCRÉES

On leffectue par chromatographie ascendante de partage sur papier.

PRINCIPE

Il consiste à séparer une quantité appréciable de saccharose de la majeure partie du glucose et du lévulose qui l’accompagnent. Pour cela on utilise la propriété du saccharose d’avoir un Rf inférieur à ceux du glucose et du lévulose avec le solvant I. Le saccharose est alors remis en solution ainsi qu’une petite quan-

tité de lévulose et de glucose.

MODE OPÉRATOIRE

Dans cet exposé nous distinguerons :

— un essai préliminaire ;

— la technique d’enrichissement proprement dite.

19 Essai préliminaire

Il consiste à déterminer le nombre optimum de gouttes de la solution, qui permet la mise en jeu de la quantité maximum de saccharose compatible avec une séparation suffisante de ce sucre du mélange glucose-lévulose.

Sur le chromatogramme nous déposerons en des points différents un nombre de gouttes croissant. Nous faisons ainsi deux chromatogrammes. Nous faisons cheminer le solvant I en chromatographie ascendante de 24 heures. Nous révélons un chromatogramme avec le naphtorésorcinol, l’autre avec le réactif à l’oxalate d’aniline. Nous avons une idée de l'intensité du chevauchement des sucres après cette chromatographie. Nous pouvons ainsi déterminer la quantité de solution optima à déposer sur le papier pour avoir une séparation adéquate.

20 Technique d’enrichissement

On prépare 5 feuilles de papier de 26 cm. de large sur 24 cm. de haut. On trace trois traits parallèles à la base, à des hauteurs respectives de 19 mm., 22 mm. et 26 mm. On trace deux petits segments verticaux entre les hauteurs 19 mm. et 26 mm., à des distances de 3 cm. des bords latéraux ; on trace un petit segment identique au milieu de la feuille. On imbibe le petit rectangle, délimité par les parallèles à la base 19 et 22 et les segments verticaux latéraux, de la solution sucrée. On opère ainsi un nombre de fois correspondant au nombre de gouttes optima déterminé précédemment. On fait avec ces feuilles une chromatographie ascendante de 24 heures avec le solvant I.

Fronts du Solvant

Lignes de depart

Fig. 2. — A gauche : essai préliminaire : chromatographie ascendante de 24 heutes. Révélation du saccharose et du lévulose par le réactif au naphtorésorcinol ; À droite : chromalogramme pour enrichissement : Aire de dispersion du saccharose après une chromatographie ascendante de 24 heures avec le solvant I.

Fig. 3. — Schéma de l’élution des rectangles de papier correspondant à l’aire de dispersion du saccharose.

On découpe le papier suivant les parallèles à la base de hauteurs 19 mm. et 26 mm. ; le rectangle obtenu est coupé par le milieu. On rassemble tous les bouts de papier par l’extrémité non imbibée de sucre ; on procède alors à une élution par la pyridine, l'extrémité non imbibée de sucre plongeant dans un petit récipient contenant le solvant, l'extrémité imbibée de sucre pendant en dehors du récipient. Le liquide d’élution est recueilli dans une petite capsule. Il est évaporé à basse température grâce à l'action d’une lampe à rayons infra-rouges et d’un violent courant d’air fourni par un ventilateur.

Les quelques gouttes de solution concentrée obtenue sont utilisées pour faire une chromatographie descéndante de 48 heures avec le solvant I et une chromatographie sis teniE de 24 heures avec le solvant II.

— Les divers stades de cette technique d’enrichissement sont schématisés dans les figures n° 2 et n° 3.

IDENTIFICATION DU SACCHAROSE.

Bien que la détermination des Rf du saccharose avec deux solvants différents, représente une méthode sûre d'identification, nous avons voulu, pour éviter tous les doutes, apporter à sa caractérisation une preuve supplémentaire.

PRINCIPE

Après séparation du saccharose par chromatographie, nous l’hydrolysons in situ par un acide fort à chaud. Une nouvelle chromatographie nous permet de constater que ce sucre: a donné du lévulose et du glucose.

MODE OPÉRATOIRE

Sur une feuille de 26 cm. sur 26 cm. on trace un trait parallèle au côté a, à 5 cm. de ce côté, et un trait parallèle au côté b, à 4 em. de ce côté. On dépose sur la ligne parallèle au côté a la solution sucrée, en deux points situés à 2 et 6 cm. du côté b de la feuille.

On prépare ainsi deux chromatogrammes.

On fait une chromatographie descendante de 48 heures avec le solvant I, dans le sens 1. On découpe, après séchage, la feuille suivant le trait parallèle du côté b.

On révèle le plus petit rectangle ; ceci permet de localiser le saccharose sur l’autre morceau de papier, le cheminement étant le même. La feuille est placée sur une platine chauffante ; on dépose dix gouttes de solution aqueuse à 10 p. 100 d’acide trichloracétique à la position présumée du saccharose, en laissant évaporer entre chaque goutte. Le saccharose est ainsi en partie hydrolysé.

On fait alors une nouvelle chromatographie ascendante de 24 heures dans le sens 2 avec le solvant I. Un des chromatogram-

Saccharose Ligne de départ Levulosr

da & Fe Levulose

Sa S accharose

Ligne de depart

e EE

os

fe

Ligne de depart

Glucose

Fig. 4. — En haut : chromatogrammes révélés par le réactif au naphtorésorcinol ; en bas : chromatogrammes révélés par le réactif à l’oxalate d’aniline ; à gauche : chromatogrammes obtenus avec le solvant I, chromatographie descendante de 48 heures; à droite : chromatogrammes obtenus avec le solvant I, chromatographie ascendante de 24 heures.

Les taches pleines représentent des taches obtenues par révélation. Les taches en pointillé représentent la position présumée des sucres qui n’ont pas été révélés.

mes est révélé avec le réactif à l’oxalate d’aniline ; on obtient une grosse tache brune, qui possède le Rf du glucose dans le prolongement des segments ss’et gg’ ;s et s’ correspondent aux positions du saccharose à la suite de la première chromatographie ; g et g’ à celle du glucose. Cette tache provient donc de g’ et d’une partie de s’, qui après hydrolyse a donné du glucose. L'autre chromatogramme est révélé avec le réactif au naphtorésorcinol. On obtient une tache, possédant le Rf du saccharose, d'intensité assez faible dans le prolongement du segments s’ ; on obtient deux taches, qui possèdent le R f du lévulose dans le prolongement des segments ss’ et 1l’;let l’ correspondent aux positions du lévulose à la suite de la première chromatographie.

RÉSULTAT

La substance qui par une première chromatographie possède le R f du saccharose a donné, après hydrolyse acide à chaud des substances, qui par une deuxième chromatographie possèdent les R f du glucose et du lévulose.

On pourrait, mais ce nous semble superflu, opérer de même avec d’autres solvants, ou combiner l’action de plusieurs solvants.

On a identifié ainsi d’une façon certaine le saccharose.

La figure n° 4 permettra, en s’y reportant, de bien comprendre la marche que nous suivons.

Obtention de solutions propres à la chromatographie à partir des différents organes de la vigne.

Dans la vigne, le saccharose, s’il existe, se trouve en solution dans les vacuoles des cellules. Or dans les cellules existe de l’invertine, comme l’ont montré certains auteurs. Le problème est d'éviter l’action de l’invertine sur le saccharose, qui peut exister.

On opère différemment dans les premiers temps de la méthode suivant que l’on part de baies de raisins mûrs ou des autres organes de la vigne, verts ou ligneux. |

Nous envisagerons d’abord le cas de ces organes verts ou ligneux jusqu’à ce que nous obtenions une solution dont le traitement sera identique à celui d’un jus de raisin. Nous verrons alors le traitement de ce jus de raisins.