RÉACTION DE BACHMAN

Cette réaction colorée consiste à effectuer, en un seul temps, les deux stades (acide sulfurique ou acide B-naphtolsulfonique puis eau) de la réaction de KoBER.

Le réactif de BACHMAN (à base de phénol, d'acide sulfurique et d’eau) est versé sur l’œstrogène desséché; l’ensemble est alors porté au bain-marie à 150°. La coloration jaune primitivement observée vire graduellement au rose et atteint un maximum après sept minutes pour l’œstradiol, neuf minutes pour l’œstrone, et onze minutes pour l’œstriol:; au delà, elle pâlit.

L’auteur a tracé, pour chacune de ces trois substances, la courbe représentative des variations de l'intensité de la coloration en fonction du temps de chauffage.

On a noté ainsi qu’à neuf minutes et demie de contact à 150°, les trois courbes passent par un même point,

Si, à ce moment, on refroidit les solutions, les colorations restent stables et leur intensité n’a diminué que de 10 p. 100 après vingt-quatre heures.

De plus, la courbe représentant l'intensité de la coloration en fonction de la quantité de substance est une droite entre 10 y et 60 y. Enfin, le réactif se conserve à la température ordinaire, en flacons teintés, pendant deux mois et demi, sans détérioration appréciable.

Recherches personnelles

Nous nous sommes attaché à l’étude des modalités de cette réaction, que nous avons cherché à perfectionner.

Tout d’abord, nous avons tracé, pour les œstrogènes naturels, la courbe représentative des variations de l’intensité de la réaction en fonction du temps de chauffage à 150°. Nous avons bien retrouvé le maximum d'intensité décrit par BACHMAN, mais nous avons constaté que, le maximum une fois atteint, l’intensité de la réaction diminuait très rapidement, rendant ainsi les mesures assez délicates.

Nous avons donc effectué de nouvelles déterminations en opérant à des températures plus basses, et nous avons noté que, si la réaction mettait plus de temps à atteindre son maximum, ce dernier persistait beaucoup plus longtemps.

Nous pensons donc préférable d’opérer à une température plus basse que celle préconisée par BACHMAN. |

Le maintien d’une température constante constitue un facteur important. Or, il s'avère difficile d’obtenir le résultat escompté avec un bain d'huile ou un bain de sable. Après un certain nombre d’essais, nous avons adopté la solution saturée de nitrate de sodium qui permet d'opérer à la température de 122°,5. Dans ces conditions, l’intensité maximum de coloration est obtenue après dix-sept minutes, et reste pratiquement constante entre la quinzième et la vingtième minute, ainsi que le montrent les résultats de nos mesures effectuées avec l’électrophotomètre de MEUNIER (sous 5.200 A).

Intensité de la coloration en fonction du temps de chauffage à 122°,5.

5 minutes — 100 divisions 10 ous ip ee 15 = oil = 16 eZ. AM = 14 — A PAS 19 — Pr EE Du AO Mt 25 —— = "126 30 — "119 =

Le temps optimum (dix-sept minutes) ayant été ainsi déterminé, nous avons effectué quelques mesures avec des doses variables d’œstrone, chaque prise d’essai étant additionnée de 10 cm* du réactif de BACHMAN (épaisseur de la cuve : 1 cm. diaphragme : 10). Les résultats obtenus permettent de tracer la courbe de la densité optique en fonction de la quantité d’œstrone mise en jeu.

9 y d’œstrone — 45 divisions 10 y —— — 58 — 90 14 ES — 132 SE

200 à PER RE

Intensité de la coloration en fonction de la quantité d’œstrone.

On peut encore opérer en présence de quantités plus grandes ou plus petites d’hormone, il suffit alors de modifier les doses de réactif et de diluant.

Voici, à titre documentaire, les résultats que nous avons obtenus avec des quantités beaucoup plus petites d’œstrone auxquelles nous avons ajouté 1 cm° de réactif et 4 cm° de diluant.

0,5 y d’œstrone — 24 divisions

Tr He = 25 Er.

DE + oh de 5 y RSR) ee 10 y ee 77 ce

En opérant dans les conditions que nous avons décrites, les mesures s'avèrent commodes, et les résultats obtenus pour.une même dose de substances restent très acceptables. C’est ainsi qu’en opérant avec une dose de 50 y d’œstrone, nous avons obtenu successivement les chiffres suivants :

50 y d’œstrone — 132 divisions

50 y A5 1191 nr ED DO PNRERE SEE 100 y ÈS 201 rs OT EP RRSFTIN RRE