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Nous n'avons jamais conservé de réactif plus de deux mois; dans ces limites, les résultats restent constants d’une façon satisfaisante, à condition toutefois d'utiliser un flacon teinté bouchant émeri; il n’en est pas de même d’un réactif à l’autre, l’oxydation du phénol étant rapide lors de la fusion en vue de la préparation du réactif. Quelles que soient les précautions prises, il vaut mieux refaire, pour chaque nouveau réactif, une courbe d’étalonnage et, en conséquence, préparer une assez grande quantité de produit à la fois.

Voici, en résumé, la technique que nous préconisons :

a) Préparation du réactif et du diluant. (Voir BACHMAN, Journal of biological Chemistry, 1939, 131, 456.)

b) Technique de la réaction colorée : préparer une solution saturée de nitrate de sodium; faire évaporer la solution d’œstrone; verser 2 em* de réactif; porter au bain-marie dix-sept minutes en agitant de temps en temps: refroidir: diluer avec 10 em° du mélange : SO.H, + H,0 (3/7) ; effectuer la mesure sous 5.200 À.

Cette réaction colorée présente sur les autres d’incontestables avantages de simplicité et de maniabilité. Elle ne nécessite pas du manipulateur des talents particuliers. Elle n’a qu’un défaut, toujours le même : si l'extrait urinaire est impur, la coloration brune parasite apparaît.

STIMMEL avait signalé, en 1946, qu’on pouvait extraire une partie importante des colorations parasites de la réaction de KoBER par traitement de la solution par un égal volume dacétate d’éthyle; ce procédé élimine les impuretés sans toucher le pigment rose dû aux œstrogènes. L’acétate d’éthyle se sépare rapidement au-dessus de la phase aqueuse; l'opération peut être faite dans le tube même où a été effectué la réaction colorée.

Nous avons voulu savoir si la remarque de SrIMMEL, faite à propos de la réaction de KOBER, se montrait applicable à la réaction de BacHMAN. Nous avons alors constaté qu’il en - était bien ainsi.

Pertes

Si l’on ajoute de l’alcool amylique ou butylique, ou de l’acétate d’éthyle, ou de l’azotate d’éthyle, ou de l’azotate d’amyle au réactif non dilué, ces produits se mélangent et sont ainsi susceptibles de faire disparaître le léger trouble que l’on rencontre avec certains extraits urinaires.

Après dilution, les alcools amyliques et butyliques sont capables d'extraire très énergiquement toutes les colorations, la rose comme la brune.

L'azotate d’éthyle reprendrait plutôt la coloration rose que l’autre; mais le coefficient de partage est insuffisamment ‘en faveur de la coloration rose. ;

L’acétate d’éthyle, acétate d’amyle n’extraient pas du tout la coloration rose, et plus ou moins la coloration brune.

Nous ne sommes donc pas parvenu par ce procédé à nous débarrasser totalement des colorations parasites.

Même avec la réaction de BACHMAN, qui aboutit à un pigment particulièrement stable, on note que la coloration reprise par l’alcool amylique ou lavée par l’acétate d’éthyle ou l’acétate d’amyle, s’affaiblit plus rapidement que si l’on s’abstient de toute manipulation. |

D’autres solvants, tels que le chloroforme, le tétrachlorure de carbone, le sulfure de carbone, l’éther, le benzène, n’ont pas présenté de particularité intéressante.

La réaction de BACHMAN, surtout pratiquée suivant nos indications, permet un dosage colorimétrique des œstrogènes lorsque ceux-ci se trouvent à l’état pur, mais ne convient pas mieux que les autres lorsqu'elle se trouve effectuée sur un extrait urinaire impur.

RÉACTION DE PINCUS

PiNcus a décrit, en 1943, une réaction colorée pour le dosage des androgènes. Cette réaction met en jeu le trichlorure d’antimoine et donnerait également une coloration avec le prégnandiol et le cholestérol.

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Recherches personnelles

Nous avons eu l’idée de l’essayer pour les œstrogènes. Dans les conditions indiquées par l’auteur pour les androgènes, avec lesquels on obtient une belle coloration bleue, l’œstrone, l’œstradiol, le benzoate d’œstradiol donnent une coloration rose avec fluorescence verte, le diéthyl stilbœæstrol une coloration rouge violette, la progestérone une coloration brunâtre.

Nous avons étudié la cinétique de la réaction avec les œstrogènes. ;

Nous n’avons pas pu pousser aussi loin que nous l’aurions voulu son étude, par manque de chlorure d’antimoine. Nous avons pu seulement noter les points suivants qui mériteraient d’être éclaircis :

1° La durée du temps de chauffage et la température à laquelle on opère influent sur l’intensité de la coloration d’une façon assez différente de celle indiquée par PINcus pour les androgènes;

2° La quantité de réactif mise en jeu doit être plus élevée. Nous conseillons de mettre en jeu au moins 0,5 cm* de réactif ;

3° Le milieu coloré peut être dilué aussi par l’acétone, le benzène, le chloroforme:;

4° Utilisé sur un extrait urinaire obtenu par la méthode de JAYLE, il fait apparaître la coloration rose entachée malheureusement de la coloration brune habituelle.

Nous pensons que cette étude mériterait d’être reprise à cause de la facilité de mise en évidence de la coloration, de la stabilité du réactif et des couleurs caractéristiques qu’il donne avec les stérols sexuels.

D'autre part, le réactif de PINCuS présente encore d’autres avantages :

1° Il constituerait l’un des rares réactifs du prégnandiol

(le réactif du GUTERMANN, mettant en jeu l’acide sulfurique seul, étant bien peu spécifique) ;

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2° Il agirait sur des stéroïdes estérifiés (succinate ct sulfate d’androstérone; succinate de déhydroiso-androstérone) (PINCUS).