RÉACTION DE ZIMMERMAN

En 1935, ZIMMERMAN a proposé le m-dinitrobenzène comme réactif spécifique du groupement méthylénique actif. L’année suivante, il envisageait son action sur un certain nombre de 17-cétostéroïdes dont l’androstérone, la testostérone, l’œstrone, etc.

Différents auteurs, par la suite, essayèrent de lPutiliser pour le dosage des androgènes urinaires.

Nous avons pensé l’appliquer au dosage de loœstrone.

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Comme tous nos prédécesseurs, nous avons constaté, dans le tube témoin, la présence d’une coloration rouge vineuse constante, très intense et analogue à celle que-donnent les 17-cétostéroïdes en général.

Recherches personnelles

Nous nous sommes donc efforcé de faire disparaître ou de diminuer cette coloration de base. «

Nous avons tout d’abord pensé que cette coloration relevait d’impuretés provenant de l’alcool éthylique utilisé. Pour les éliminer, nous avons essayé de purifier l’alcool par distillation et rectification, par passage sur charbon activé, par addition de bisulfite et distillation en vue d'éliminer les aldéhydes.

Nos efforts ne se sont pas montrés couronnés de succès, car toujours une appréciable coloration est apparue.

Ayant alors remarqué que la quantité d’alcool employée influait sur la coloration, nous avons essayé de remplacer l’alcool éthylique par d’autres alcocls de la série grasse de C; à C;, ou par le glycérol (tous ces produits de qualité R.P.). Nous avons toujours obtenu une importante coloration de base; faut-il admettre que la fonction alcool est en cause ? à

Les propriétés réactionnelles connues de cette fonction ne permettent pas, cependant, une telle interprétation, nous proposons donc l’explication suivante :

— on sait qu’une des principales propriétés des dérivés nitrés est de donner naissance, par réduction, à toute une série de composés azotés de moins en moins oxygénés, dont le terme ultime est une amine. Nous ne parlons ici que de la réduction en milieu basique. Elle nous permettrait d'expliquer la formation concomitante d’aldéhyde à partir de lalcool au cours de la réaction elle-même. Sous l'effet d’un tel milieu apparaîtrait un composé bi-moléculaire provenant de la condensation de deux dérivés de réduction du m-dinitrobenzène, C’est ainsi qu’un réducteur doux,

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comme la solution alcoolique de potasse, se montre capable de provoquer la formation de composés du type azoxy à partir du dérivé nitré, l'alcool jouant le rôle de désoxydant en passant à l'état d’acétate de potassium. La réaction peut s’écrire :

MAENOSSCHOES KOH > - CH;COOK + 2 Ar-N-N-Ar + 6 H,0 ITA O Cette transformation de l'alcool en son dérivé le plus oxygéné, l’acide, se fait, on le sait, par l’intermédiaire de corps carbonylés, > C = O. C’est ici qu’il pourrait y avoir formation de R-CHO qui serait peut-être responsable de la coloration de base. i Cette manière de voir permet de comprendre les remarques suivantes : |

1° CaALzLoW (N.H.) et CazLoW (R:K.) ont signalé que l’action de l'alcool et de la soude sur le m.-dinitrobenzène, en vue de sa purification, ne doit pas être prolongée au delà de cinq minutes : un traitement excessif fait apparaître des aiguilles jaunes identiques à celles du 3-3’ dinitroazoxybenzène. |

Si l’on ajoute expérimentalement de l’éthanol, la coloration augmente; ce groupement a donc bien la même action que le groupement cétonique.

Plus la quantité d’alcool employé est grande, plus la coloration de base est intense.

L'alcool absolu donne un témoin plus intense que l'alcool à 95°.

2° CALLOW (N.H.) et CazLoW (R.K.), FRIEDGOOD et WHIDDEN, CAHEN et SALTER ont tous signalé l’intensification de la coloration de base par augmentation de la quantité de potasse mise en jeu, ce qui accentue probablement le pouvoir réducteur du mélange : potasse + alcool.

3° CAHEN et SALTER ont pu mettre en évidence, lors de la réaction de ZIMMERMAN sur un 17-cétostéroïde, la forma-

tion de deux pigments : l’un rose, propre à l'hormone, l’autre jaune, indépendant. Ce dernier ne serait-il pas dû à l’action de l’aldéhyde sur le m.-dinitrobenzène ?

Nous pensons donc qu’il est impossible de faire disparaître la coloration de base de la réaction de ZIMMERMAN. Ce fait ne serait cependant pas tellement gênant si l’expérience montrait la constance de l'intensité de la coloration de base; mais nous avons justement constaté le contraire; par ailleurs, CALLOW (N.H.) et CALLOW (R. K.) ont mis en évidence que l’addition d’une même quantité de CH;CHO à deux séries de tubes, l’une contenant une hormone cétonique, l’autre n’en contenant point, n’amène pas, dans les deux cas, une augmentation égale de la coloration totale. La présence de l’hormone modifie donc l’action du CH,;CHO sur le réactif.

Dans quelle mesure ? Comment le prévoir ?

C’est pourquoi, en conclusion, nous pensons que la réaction de ZIMMERMAN nous semble difficilement utilisable pour un microdosage. |

RÉACTION DE DIAZOTATION

Les trois œstrogènes, œstrone, œstradiol, œstriol, présentent un même groupement phénolique que ScHMuLowipz et WYLie ont utilisé en vue de la production d’une azo-couleur par action de l’acide diazobenzène sulfonique.

Recherches personnelles

Nous avons étudié cette réaction et voici, brièvement résumées, les remarques que nous avons pu faire :

a) La coloration jaune rosée présente son maximum d'intensité sous 4.300 À pour l’œstrone, et sous 4.700 À pour l’œstradiol. Beaucoup d’autres phénols donnent une réaction à peu près semblable.

b) La soude, comme l'ont noté les précédents auteurs, stabilise bien la réaction; voici quelques-uns de nos résultats confirmant ce point de vue :

1° Evolution de l'intensité de la réaction en fonction du

temps, sans addition de soude :

D LR EN RENTE