LES RÉACTIONS COLORÉES CONSIDÉRÉES COMME SPÉCIFIQUES

Les techniques mettant en jeu .les réactions colorées restent les plus employées et ceci en raison des quantités particulièrement faibles d’œstrogènes trouvées dans les urines : le milligramme de folliculine par litre d'urine n’est atteint qu’au cours de la grossesse.

Bien des réactions colorées ont été décrites pour les œstrogènes, nous les rappellerons brièvement.

En 1929, WIELAND, STRAUB et DORFMULLER remarquent que les réactions de SALKOWSKI et de LIEBERMANN-BUR- CHARD, décrites pour le cholestérol, se montrent également positives avec les extraits urinaires contenant des œstrogènes : dans le premier cas, il se produit une coloration jaune; dans le second cas, une coloration jaune rougeâtre avec fluorescence verte. Cette fluorescence, qui est provoquée par l’acide sulfurique du réactif (MARRIAN), a d’ailleurs servi pour essayer de diagnostiquer la gestation chez la Jument (CUBONI, GALLOT et ROUSSEL).

TECHNIQUE DE KOBER

Deux ans plus tard, KoBER découvrait une réaction qui, par la suite, a reçu de multiples applications : après chauffage de l’œstrone en milieu sulfurique concentré et

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refroidissement, l’addition d’eau provoque l’apparition d’une coloration rose très intense avec atténuation de la fluorescence verte. En substituant l’acide benzène sulfonique à l’acide sulfurique, l’intensité de la coloration est plus grande encore et la teinte obtenue peut être comparée avec celle d’une solution de rouge de crésol.

5 y d’œstrone donnent ainsi la même intensité de coloration que 25 y de rouge de crésol. |

Enfin KoBer remplaçait l’acide benzène sulfonique par l’acide B-naphtol-sulfonique, qui donne une coloration avec un maximum, de densité optique vers 4.880 À.

La réaction de KoBER se montre très fugace et disparaît instantanément en présence d’eau oxygénée ou d’acétone.

Un grand nombre de recherches, dont nous résumerons l'essentiel, a été publié sur cette réaction.

Après avoir étudié la cinétique de la réaction et la mise en jeu du colorimètre de LoviBoND, COHEN et MARRIAN notent que les extraits urinaires donnent des courbes de coloration très différentes de celles obtenues avec l’æœstrone ou l’œstriol; ils en concluent que l’urine contient des substances gênantes qui interfèrent dans la coloration cherchée.

Dès lors, de multiples efforts se sont concentrés sur l’élimination de ces substances gênantes, et il faut bien reconnaître que bien peu de progrès ont été réalisés dans ce domaine. |

COHEN et MARRIAN proposèrent d’abord de faire disparaître, grâce à l’emploi de l’eau oxygénée, la coloration propre aux œstrogènes; dans ces conditions, la coloration due aux substances gênantes ne serait pas touchée. Il suffirait donc de soustraire cette dernière de la coloration totale, primitivement obtenue, pour en déduire la coloration propre aux œstrogènes. :

Malheureusement, l’action de l’eau oxygénée est beaucoup moins spécifique qu’on ne l’avait cru tout d’abord : ce réactif fait non seulement disparaître la coloration rose due aux œstrogèries, mais encore une partie de la colora-