TECHNIQUE

A) Dosage des matières protéiques totales:

Dans un vase à précipiter, on mesure :

CH° CH? OH à 95° — 25 cc.

CH CO CH° — 25 cc.

Y verser par petites portions et en agitant continuellement, 5 cc. de sérum mesurés à la pipette. Attendre quelques minutes et filtrer sur deux filtres équilibrés (filtres sans centre de 11 c). Entraîner les parcelles du précipité qui adhèrent au fond du vase au moyen de quelques cc. de CH* CH° OH. Le précipité étant formé par les matières protéiques et la lécithine du sérum, on dissout cette dernière en lavant deux fois avec 10 cc. de CH CH° OH et même plus souvent

[19] F. Kayser. Bul. Soc. Chi. Bio., 1930, 12, p. 533.

ET

jusqu'à ce que plus rien ne soit entraîné. Les filtres sont alors placés sur un verre de montre et desséchés à l’étuve à + 100° à poids constant.

Soit p la différence de poids entre les deux filtres, On a :

p X 200 — matières protéiques totales du sérum %o.

B) Séparation et dosage de la sérum-albumine et de la sérum-globuline.

Dans un ballon jaugé de 100 cc. on introduit dans

l’ordre :

SO'Mzg, 7 H°0 soigneusement pulvérisé 7 gr.

Sérum 10 cc.

Agitez doucement pour éviter la mousse. La dissolution s’effectue rapidement en 2 ou 3 minutes. Complétez alors à 100 cc avec une solution saturée de sulfate de magnésie (SO*Mg, 7H°0 550 gr. + H°0 500 cc. Dissoudre à chaud. Si la solution est trouble, laisser au repos jusqu’à floculation puis filtrer) en versant d’abord lentement et en agitant par un mouvement giratoire pour éviter la mousse. Après ajustage au trait de 100 cc., obturer avec le doigt et agiter vigoureusement quelques instants, laisser en contact 30 à 40 minutes, en renouvelant l’agitation de temps en temps de façon à amener une floculation convenable.

Verser d’un seul coup tout le contenu du ballon sur un filtre plissé en papier Chardin (D — 19-19 centi) et recueillir le filtrat dans une fiole jaugée de 50 cc. Repasser s’il y a lieu les premiers centi. cubes. Il faut de 30 à 35 minutes pour obtenir les 50 cc.

Les introduire dans un vase à précipitation chaude

conique de 125 cc. en rinçant la fiole jaugée deux ou trois fois avec 2 cc. d’eau à chaque fois. Y ajouter 1 cc. de soluté officinal d'HCHO dilué au 1/2 et 15 gouttes de solution de CH* COOH au 1/10, (pH aux environs de 4,7). Porter lentement en agitant à l’ébullition que l’on maintiendra 10 à 20 secondes et verser le liquide bouillant sur deux filtres équilibrés placés dans un entonnoir à longue douille. La filtration est rapide si les filtres sont bien placés, laver ensuite avec une solution de CH* COOH à 1/2.000. Ces lavages doivent être faits en employant pour chaque lavage un volume de solution acétique de 5 cc. environ, que l’on porte au préalable à l’ébullition dans un tube à essai, Laisser couler complètement le liquide avant d’ajouter une nouvelle quantité. Poursuivre ces lavages jusqu’à ce que le liquide qui s’écoule ne donne plus qu’un louche à peine perceptible avec une solution de ClBa au 1/10. Il faut pour obtenir ce résultat au moins une quinzaine de lavages. Laver une ou deux fois avec quelques centi. cubes d’alcool puis d’éther. Porter à l’étuve à + 100° jusqu’à poids constant (au minimum 3 H).

Peser soit p gr.

On a P le poids de sérum-albumine par litre,