QUE

ont tenté de stériliser par la chaleur la trichophytine obtenue par eux : tyndallisation à 56, 58° (LomBARDO), voire même Stérilisation à 100° en une seule fois (Pécortr). Ce dernier constate d'ailleurs avec tous les auteurs que la chaleur à 100° diminue considérablement l’activité du produit, mais sans la détruire complètement.

De leur côté, BLUMENTHAL et HAUPT, mais surtout Excezuaror, cherchèrent aussi à distinguer la toxine ou exotoxine contenue dans le bouillon de culture et obtenue par simple filtration, de l’endotoxine renfermée dans la substance même du thallophyte vivant. Pour obtenir cette dernière, ils pratiquaient un broyage de la culture, soit au mortier avec du sable, pour la reprendre ensuite par l'alcool afin d’en obtenir un extrait alcoolique (ENGEL- HARDT), soit après congélation (BLUMENrHAL et Haupr). Ces deux dernîers auteurs centrifugeaient alors le mélange obtenu par ce broyage et employaient comme antigène soit directement le liquide résultant de cette centrifugation, soit au contraire un extrait alcoolique du rési- “du qu’elle avait permis de séparer.

Quelle serait, d’après les auteurs, la plus active des deux trichophytines, endo ou exo? Et y a-t-il un avantage à employer l’une plutôt que l’autre? La question ne paraît pas nettement tranchée. THarpsHiMANJANZ avait obtenu les plus fortes réactions avec son endotrichophvtine; cependant ExGELHARDT conclut de son côté à la plus grande toxicité de l’exotoxine. Au surplus, la technique habituelle de préparation, par broyage de la culture et filtration, fournit une trichophytine totale qui enferme

à la fois les produits externes du métabolisme du chan-

pignon ef lé contenu soluble des albumines du thalle et qui s’est montrée très active. Ce sont des trichophytines préparées de cette façon qu'ont utilisées la plupart des auteurs qu’il nous reste à passer en revue rapidement. Beaucoup d’entre eux (Scnocrz, Arzr et Funs, Ma- RIANI, Farcnr, etc.), ont employé diverses trichophytines provenant d'établissements ou d’instituts spécialisés qui les préparaient suivant leurs indications. Scnorrz le premier fit préparer à Hôcasr, par la firme Mister, Lucrus et BruaNING, une trichophytine polyvalente qui fut mise dans le commerce et qu’on désigne sous le nom de « trichophytine Hôcnsr ». Cette trichophytine fut utilisée ultérieurement par de nombreux auteurs et particulièrement par Arzr et Funs. Ceux-ci utilisèrent d'ailleurs concuremment, lors de l'épidémie viernoise de trichophytie, plusieurs autres trichophytines et en particulier une trichophytine polyvalente préparée à Berlin d’après Bruck par les Scheringschen Werken et désignée par tous les auteurs qui l’ont utilisée sous le nom de « trichon Schering », et aussi une « trichophytine Busson » préparée sur leurs propres indications par le Serotherapeutiches Institut de Vienne avec les germes isolés au

cours de cette épidémie.

Il nous faut encore citer la Tineatoxine Pollaci polyvalente (trichophyton, microsp., Ach.) de l’Institut sérothérapeutique de Sienne étudiée surtout par FaLCour, le trichosykon (Karre) et le Phyagen des Sächssiche Werke (1).

(1) Nous verrons au chapitre de l'utilisation thérapeutique de la trichophytine, la technique particulière proposée en

Toutes ces trichophytines, polyvalentes pour la nlupart, ont servi à de nombreux auteurs pour des étades comparées de la spécificité des réactions qu'elles f. urnissent, études dont nous étudierons plus loin les résul-

tats plus ou moins divergents.

LS k x

Il nous faut remarquer a priori qu'il serait absolument vain d'espérer une concordance plus que générale entre ces résultats. Comme nous venons de le voir les trichophytines sont, en effet, fort loin d’être des substances chimiquement définies ou même des substances pures; elles diffèrent ainsi d’un auteur à l’autre sous de rombreux chefs. D’une part la solution employée sous ce nom contient , outre la toxine proprement dite, les éléments (maltose, glucose, etc...) du bouillon de culture artificiel et souvent une proportion notable d'acide phénique. D'autre part, à l’exotoxine en solution dans le liquide de culture, et à l’endotoxine supposée libérée par l’autolyse ou par le broyage des éléments du mycélium, se joignent toutes les substances organiques provenant de la désintégration de ces éléments.

D'un expérimentateur à l’autre on constate aussi des

différences dans la technique d’extraction aussi bien que

1929 par Jausion et Sonier pour l'obtention d’une endotoxine exclusivement destinée à la thérapeutique et qu'ils disüinguent, sous le nom de claso-vacein, du filtrat-toxine obtenu par simple filtration du bouillon de culture. Ce dernier, bien que préparé sans broyage du champignon, est une trichophyline proprement dite et paraît se comporter comme telle,

dans le milieu de culture employée, dans l'âge de cette

culture, et surtout enfin dans l'espèce mycélienne utili-

e : Ni cette espèce, ni sa virulence, bref aucun de ses caractères biologiques et pathologiques ne sont nécessairement les mêmes chez les différents auteurs envisagés et cela suffit à montrer quelle distance sépare la question des trichophytines et de leur spécificité de la question de la tuberculine dont les conditions d'obtention, à partir d’une espèce microbienne bien déterminée, sont rigoureusement précisées et dont la constance donne à L'expérimentation clinique une autorité que personne ne peut encore revendiquer pour la trichophytine.

Une prudence extrême devra donc présider à la comparaison des divergences dont nous parlions plus haut. Mais avant d'arriver à ce chapitre, nous devons justement envisager de plus près deux des points sur lesquels devaient porter les efforts des chercheurs quant à l'élimination des causes d'erreurs que nous venons d'exposer, c'est-à-dire quant à RONDE d'une trichophytine purifiée et quant au choix du germe ensemencé. Le premier point est intimement lié à l'étude des propriétés physico-chimiques de la trichophytine el au nom du professeur Bruno BLocu. Quant au deuxième que nous avons volontairement négligé jusqu'alors, il devrait en bonne justice être l’objet des conclusions de l'essai clinique des trichophytines provenant des divers parasites susceptibles d’être utilisés dans ce but. Nous passerons cependan! en revue les choix qui ont été faits de ces germes par les différents auteurs et nous trouve-

rons peut-être dans les données générales de la biologie

CS LES des mycoses des directives assez précises pour nous guider dans ce choix.

Propriétés physico-chimiques. — C'est Trurr1 comme nous l'avons vu, qui amorça lé premier l'étude des propriétés physico-chimiques de la trichophytine. Il avail trouvé que l’agent toxique résistait à la chaleur et avait déjà préparé des extraits alcooliques et éthérés d’une culture desséchée.

KusuNoxi, ayant constaté que la chaleur à 56° diminuait considérablement l’activité de la trichophytine, mais sans l’abolir éomplèternent, concluait qu'en dehors de l’endotoxine stable, la trichophytine devait aussi contenir des produits de métabolisme actifs et thermolabiles.

ENGELHARDT et PÉCORI constatèrent la mème influence affaiblissante de la chaleur. BLuMEeNTHAL et Haupr avaient aussi constaté la solubilité de l’antigène dans l'alcool et préparé une trichophytine en l’extrayant, à l’aide de ce solvant, du résidu de centrifugation d’une culture broyée.

Mais c’est au professeur Bruno BLocn qu'on doit les premières recherches systématiques sur les ipropriétés physico-chimiques de la trichophytine et récemment, avec LABOUCHÈRE el SCHAAF, sur la possibilité d'obtenir une trichophytine puritiée. Nous lui empruntons tout ce qui suit.

En 1915, il s'exprimait ainsi : Ces endotoxines ont une structure très complexe. Elles se composent d'une substance très labile, non dialysable, de constitution

moléculaire élevée; et d’une autre substance simple,

dialysable et thermostabile, soluble dans l’eau, insoluble dans l’alcool et l’éther. La combinaison de ces deux substances peut seule provoquer l'allergie, mais celle-ci, devenue potentielle après la maladie, peut être déclanchée par la deuxième substance seule qui ne peut ren- - dre allergique un animal non encore infecté. » C'est donc cette seconde substance qui répond plus particulièrement aux propriétés des trichophytines utilisées en clinique, et les travaux de BLocx, LABOUCGHÈRE et SCHAFF sur les propriétés physico-chimiques de celte trichophytine ont été résumées par Bruno BLocx dans les termes suivants : « On peut obtenir une trichophytine sèche relativement pure par broyage d'une culture d’achorion quinckeanum avec de la neige carbonique et du sable, centrifugation, filtration, dessication du filtrat, reprise du résidu par l'eau et précipitations répétées par l'alcool méthylique.

Contrairement aux ferments, aux antigènes albuminoïdes, et aux toxines vraies, c'est un corps très stable qui garde pendant des années, toute son activité. Elle

résiste à la température de 100° pendant 8 heures, à l’ac-

lion de l’eau oxygénée: et elle est réduite par l'hydrogène

sulfuré et l’aluminium pulvérulent.

Elle est détruite par la solution d'acide sulfurique à

Elle est soluble dans l’eau, insoluble dans les solvants organiques sauf la glycérine et le glycol. L'alcool méthylique absolu la précipite d’une solution salurée de .sulfate d’ammoniaque.

La trichophytine ne donne aucune des réactions de

Die

l'albumine et n'est pas précipitable par les réactifs des alcaloïdes, ni par lacide phospho-tungstique. Elle ne contient pas de soufre mais de l'azote (6,75 % dont 1,3 % d'azote aminé), La trichophytine est complètement dialysable; le produit ainsi obtenu est azoté et pleinement actif. Ce principe biologiquement actif de la trichophytine se trouve étroitement lié à une substance voisine des corps amylacés, à un polysaccharide, soluble aussi dans l’eau, également dialysable et azoté et qui, déviant à gauche le plan de polarisation. de la lumière, ne réduit pas le sulfate de cuivre, se colore en bleu par l'iode et donne en se décomposant des glucosanes.

Au cours de toutes ces manœuvres d'isolement et de dissociation (précipitations, solutions, extractions, dialyse, etc.), la teneur dans le produit de ce corps amylacé d'origine mycélienne, « trichophytose », semble varier parallèlement à l'activité biologique de ce produit, c'est-à-dire à sa teneur en principes actifs. Lors de sa décomposition par des champignons vivants, tous les deux sont réduits de 0 % de leur valeur; par hydrolyse en milieu acide, tous deux sont détruits à la même concentration en acide, 12,5 %. Seules la benzylation et l’acétylation (après lesquelles on obtient respectivement un trichophytose benzylé ou acétylé, insoluble dans l’eau, soluble dans la benzine et le chloroforme), semblent amener un divorce entre les deux ordres de propriétés ; c'est-à-dire que si le produit retrouvé par saponification présente bien les caractéristiques d’un

corps amylacé il a par contre perdu toute son activité

biologique. » Et Bruno Brocn ajoute : « Le mode de

comportement que nous venons de décrire peut présenter deux signilications » : pour la première le corps azoté actif serait lié au polysaccharide par des rapports purement physiques d’adsorption et partagerait avec lui ses propriétés au cours des diverses opérations de précipitation, solution, dialyse, etc... Il serait détruit par la benzylation et l'acétylation, cette destruction étant indépendante des transformations que subit le polysaccharide lors de ces deux processus et, au Contraire, de ceux-ci, non réversible. à

Dans cette hypothèse d’un phénomène d’adsorption, deux faits sont surprenants : d’une part le parallélisme rigoureux de la persistance ou de la disparition des deux substances (polysaccharide adsorbant et principe biologique actif), lors de réactions aussi dissemblables que la précipitation par l'alcool méthylique, l’hydrolyse en milieu acide, la décomposition par ferments, la dialyse, el d'autre part le fait que lors de la benzylation la substance alcaline n'emporte pas les propriétés biologiques, L'autre hypothèse est alors que le polysaccharide prend une part intégrante à la constitution de la trichophytine proprement dite ; qu'on doit par conséquent concevoir celle-ci comme un polysaccharide azoté ou un à des corps dérivant de la décomposition de celui-ci et qui serait au cours de ‘la benzylation irréversiblement séparé en polysaccharide et reste azoté, inactifs, alors que tout autre processus chimique la conserve où la détruit dans son intégralité.

Ce ne sont là, conclut Bruno BLocr, que des hypothèses

Rene

qui ont encore besoin de bien des études. Mais nous voyons par le résumé de ces travaux dans quelle voie on devrait chercher à préciser une technique de purification de la trichophytine permettant d'obtenir un produit chimiquement constant et comparable à la tuberculine actuellement standardisée. Il y aurait là un progrès considérable éliminant certaines divergences dues à la multiplicité et à la complexité des produits que leurs techniques particulières ont mis jusqu'alors entre les mains des différents expérimentateurs. .

Mais dans cette voie une question d'apparence aussi grave que celle de la purification chimique de la trichophytine viendrait immédiatement se poser : celle de la détermination de ses propriétés biologiques. Celles-ci dépendent à la fois du germe ensemencé (espèce, virulence, âge de la culture, etc.), propriétés qualitatives auxquelles

s’ajouteraient des propriétés quantitatives (concentration

en antigène, etc.), qui nécessileraient, pour autoriser toute

rigueur dans la comparaison des différentes séries expérimentales, un titrage et un étalonnage d'activité dont la technique est sans doute assez aisément concevable, mais dont l'utilité ne justifierait probablement point les très

grandes difficultés.

Choix du germe ensemencé. — Toutes les espèces de parasites peuvent sans aucun doute servir à préparer une trichophytine particulière, suivant la technique générale que nous avons décrite, et a priori, sous le nom générique de trichophytine, il a été entendu que sont désignées les toxines diverses que les agents des dermatomycoses

sont capables de produire.

Die bon déjà plus précise, on peut distinguer pä-

rallèlement aux cadres cliniques et étiologiques les tricho-

phytines proprement dites des favines, microsporines, et même sporotrichines, etc.

Déjà, nous l’avons vu, PLaro et Trurr1 avaient préparé

une favine et l'avaient expérimentée aussi bien sur ‘des

faviques que sur des trichophytiques, et réciproquement |

leur trichophyÿtine chez des faviques : c’est que déjà, sur-

tout pour PLATO, se posait la question des réactions de

groupe, et d'une façon fort précise. Là encore, ce sont.

les phénomènes particuliers à la maladie tuberculeuse, où

il voyait les organismes atteints de celle-ci, réagir aussi.

vivement aux tuberculines provenant des différentes races du bacilie de Koch, qui lui firent, par analogie, soupçonner qu'une même trichophytine était susceptible de

faire réagir des organismes atteints de mycoses différen-

tes. Cette analogie, n’était d’ailleurs que lointaine, car les

différences qui séparent deux races de bacilles tuberculeux

sont probablement d'un ordre moins élevé que celles qui -

séparent les hyphomyÿcètes parasites. Quoi qu'il en soit la question était nettement posée et nous verrons par la suite que certains auteurs se fondant sur la proximité sys-

tématique relative du bacille de Koch et des-hyphomy-

cètes ont cru pouvoir étendre aux deux classes nosolo-.

giques dont ils sont les agents, le « groupe » à l’inté-.

rieur duquel leurs toxines respectives feraient réagir indifféremment les organismes infectés de l’un ou de l’autre de ces agents. Les faits ne répondent malheureuse-

ment pas à cette hypothèse : tuberculine et trichophytine

sont, comme nous le verrons, douces de propriétés bio-