INTRODUCTION

Parmi les méthodes de dosage de la tyrosine et du tryptophane dans les matières protéiques publiées jusqu’à ce jour, les méthodes colorimétriques sont celles qui ont suscité les recherches les plus nombreuses et les plus approfondies.

Les méthodes colorimétriques sont en principe très simples ; à première vue, leur application ne soulève pas de difficultés très grandes. A la réflexion, elles apparaissent, par contre, soumises à de nombreuses incertitudes.

Tout d’abord la spécificité du réactif utilisé n’est jamais telle qu’on soit sûr de ne doser que le corps ou la fonction ue lon désire déterminer. On est ainsi amené assez souvent à pratiquer, avant le dosage, une séparation destinée à rendre la coloration observée plus spécifique.

De là une première difficulté, qui, d’ailleurs, ne peut jamais être résolue qu’incomplètement. On connaît en effet trop imparfaitement encore l’exacte composition des matières albuminoïdes ; même lorsqu'on croira ne laisser entrer en réaction qu’un composant déterminé, un doute subsistera toujours et l’on pourra se demander s’il ne reste pas quelque acide aminé inconnu non séparé et donnant la même réaction. De plus, par le fait même que l’on est amené à séparer le corps à doser, il devient nécessaire d'opérer une hydrolyse afin de simplifier à l’extrême la

molécule albuminoïde. Que cette hydrolyse soit chimique (alcalis, acides) ou fermentaire, au bout de combien de temps sera-t-elle complète ? Ne risque-t-on pas bien souvent de ne soumettre à la réaction que des corps imparfaitement dissociés ou des molécules insuffisamment simplifiées ?

De plus, cette hydrolyse est-elle sans dommage pour le corps à doser, le respecte-t-elle, ou bien ne crée-t-elle pas des produits d’altération susceptibles d’interférer avec la réaction colorée cherchée ? C’est ce que l’on peut craindre avec une hydrolyse alcaline ou acide forcément brutales. On peut même se demander si lhydrolyse par ferment n'apporte pas à la réaction un facteur de réversibilité, ce qui contribuerait évidemment encore à compliquer le problème. Les ferments utilisés, de nature protéïque, apportent aussi une autre cause d’erreur ; d’abord ils sont plus ou moins purs et ensuite participent eux aussi à la réaction colorée. Ici encore difficulté nouvelle puisque l’on devra au: préalable opérer un titrage de chaque ferment comme pour une matière protéique ordinaire.

En supposant au contraire que le réactif employé soit très spécifique d’un composant des protéines, qu’une séparation de ce composant ne s'impose pas et par conséquent une hydrolyse non plus, on peut toujours se demander avec juste raison si la réaction que l’on obtient est bien intégrale et si elle équivaut bien à ce que donnerait ce composant s’il agissait seul et débarrassé du reste de la molécule.

On voit donc qu'un dosage colorométrique sur des

matières protéiques n’apparait pas comme une chose très

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aisée à réaliser et que même lorsque toute difficulté semblera surmontée, lorsque la réaction paraîtra s'effectuer

normalement, il sera très difficile d'attribuer aux résultats une valeur absolue.

Aussi, plutôt que d'élaborer de nouvelles méthodes colorométriques, il nous a semblé intéressant de soumettre à des comparaisons celles qui ont déjà été décrites. Toutefois, même en limitant nos investigations à la tyrosine et au tryptophane, nous nous sommes trouvés devant: un nombre trop grand de méthodes pour pouvoir toutes les énoncer et nous avons dû limiter notre choix.

Parmi les méthodes proposées, les unes s'adressent à des réactions considérées comme spécifiques de l’un des deux acides aminés, les autres utilisent des réactions communes à ces deux corps qui ont été au préalable séparés par une technique appropriée.

Comme réaction spécifique de la tyrosine, ou plus exactement de la fonction phénol, on a proposé la réaction indiquée en 1849 par MiILLoN pour les matières protéiques. Nous retiendrons pour étude quelques procédés basés sur cette réaction.

En ce qui concerne le tryptophane, de très nombreuses méthodes ont été proposées qui utilisent la réaction très marquée donnée par ce corps avec diverses aldéhydes (benzaldéhyde, acide glyoxylique, paradiméthylaminobenzaldéhyde, vanilline) en milieu fortement acide (acide chlorhydrique, sulfurique, phosphorique). Malgré la sensibilité de ce genre de méthode, nous n’avons pas cru devoir engager nos recherches dans cette voie ; car il semble bien qu’il soit très difficile d'éliminer les couleurs parasites

ainsi que d’obtenir des teintes comparables, comme vient de le montrer MGRNER [23] récemment.

Enfin, la tyrosine et le tryptophane présentent deux réactions colorées communes qui peuvent aussi être considérées comme étant vraisemblablement spécifiques de la fonction phénol : la réaction dite xanthoprotéique et Ia réaction dite de Folin avec le réactif phosphotungstique. Ces méthodes nous ont paru intéressantes à examiner.

Avant de les passer en revue qu’il nous soit permis de rendre hommage à la mémoire de M. le Professeur GRIMBERT, professeur de chimie biologique à la Faculté de Pharmacie, qui nous avait paternellement accueilli au nombre de ses élèves, et de remercier sincèrement M. le Professeur HÉRISSEY d’avoir bien voulu accepter la présidence de cette thèse.

Nous nous en voudrions également de ne pas dire ici. toute la reconnaissance que nous avons envers M. le Professeur agrégé FLEURY pour les conseils qu’il n’a cessé de nous prodiguer au cours de nos travaux. Qu'il veuille bien {rouver ici l'expression de notre gratitude.

Nous n’aurons garde non plus d’oublier l’hospitalité qui nous fut si largement accordée dans leurs laboratoires par M. le Professeur GUÉRIN, notre oncle, et par M. Henry GUÉRIN, Assistant. Nous tenons à les remercier une fois de plus pour leur obligeance qui nous a facilité l’élaboration de cette thèse.