VO

MÉTHODE PAR INHIBITION DU POUVOIR RÉDUCTEUR DE W. PERFRINGENS SUR LE VERT-JANUS DE À. R. PRÉVOT

A. R. PRevor a mis au point une méthode extrêmement nouvelle et très rapide — le temps du dosage étant d’environ une heure — en mesurant le pouvoir inhibiteur de la Pénicilline sur la réduction du Vert-Janus, par W. Perfringens.

Technique : « Un litre de bouillon VF, glucosé à 2 % de pH 7,4 est additionné de 2,5 ec. d’une solution de Vert- Janus à 1 % et réparti en tubes de Hall, sans bille, de façon que le niveau supérieur du milieu atteigne exactement l’étranglement, ce qui représente environ 7 ce. ; on stérilise trente minutes à 110°. Le Vert-Janus, au cours de cette stérilisation vire au mauve violacé. Les tubes stockés doivent subir une ébullition de trente minutes avant l’emploi, pour provoquer l’état d’anaérobiose, puis être refroidis aux environs de 37° avant de recevoir des doses croissantes des jus de Pénicilline à titrer. Un témoin ne reçoit pas de Pénicilline.

Souche : On utilise la souche H.A. qui pousse en une heure environ, réduit Le Vert-Janus dans le même temps et dont 0,1 cc. ensemencé en tube de Hall est inhihé par 0,50 U.0. La souche est préalablement repiquée sur bouillon VF glucosé en tube de Hall et il faut utiliser une culture très jeune (deux heures) en pleine fermentation.

Titrage : On répartit très exactement d’abord les dilutions de Pémicilline et aussitôt après 0,1 cc. de cette culture dans tous les tubes, y compris le témoin. Cette répartition doit être extrêmement exacte sous peine de rendre le titrage illisible et exige une petite manœuvre préparatoire : Les cultures jeunes de W. Perfringens dégagent énormément de gaz naissant. Il faut stopper pendant quelques minutes ce dégagement qui, s’il se produi-

ete

sait dans la pipette graduée, rendrait toute précision illusoire ; il est donc nécessaire de transvaser stérilement la souche de titrage de la pipette à boule dans un nouveau tube stérile. Ce simple transvasement provoque l’éclatement des bulles de gaz naissant et permet un pipetage exact.

Après la répartition des doses de Pénicilline et de W. Perfringens, il est absolument nécessaire de bien homogénéiser le mélange, car en général, la Pénicilline reste en surface et la suspension microbienne tombe au fond, ce qui provoquerait des irrégularités. Cette homogénéisation se fait au mieux en imprimant au tube tenu debout un mouvement rapide de rotation dans un plan vertical qui amène un brassage parfait du mélange.

On place au bain-marie à 37°, de préférence à l’étuve, ce qui accélère le titrage. Dès que le témoin pousse (environ une heure), il se décolore. En même temps, se décolorent tous les tubes où la Pénicilline n’a pas inhibé la croissance du Perfringens. Le premier tube non décoloré indique la dose minima inhibant 0,1 ce. de Perfringens équivalant à 0,50 U.O. Cette méthode est non seulement rapide mais sensible, puisque une différence de 0,1 ce. d’une solution contenant de la Pénicilline amène la décoloration ou la non-décoloration ».

La même méthode peut, comme les précédentes, être employée pour mesurer la sensibilité d’un germe isolé d’un malade. Toujours d’après À. R. Prevor : « Le même principe d’action inhibitrice de la Pénicilline sur la décoloration des indicateurs de Rh par les bactéries réductrices permet d’apprécier en un temps très.court si le malade est justiciable de la Pénicillothérapie. Il suffit de remplacer la suspension de Perfringens par une suspension du matériel infectieux à examiner et les dilutions inconnues de Pénicilline par des doses croissantes connues de Pénicilline titrée. Il est bon de faire des bornes espacées : 100 U.O., 50, 10, 5, 1. En quelques heures, si