TECHNIQUE

Nos animaux ont été sacrifiés par piqüre ou traumatisme bulbaire. Rapidement leur foie était extrait et des morceaux de 6 lobes différents chez le chien, de # lobes chez le lapin étaient introduits dans des tubes distincts contenant le fixateur. Au bout d’un quart d’heure à peine tous ces prélèvements étaient effectués.

Pour l'étude de la graisse nous avons employé comme fixateur le mélange chromo-osmio-acétique fort de Flemming (1). Ce mélange était effectué au moment de l'emploi ; la solution mère d'acide osmique pouvait, au contraire, avoir été préparée à l'avance ; mais nous avions toujours soin de traiter par l’acide sulfurique étendu, de rincer à l’eau distillée et de ne manier qu'avec des pinces propres les ampoules qui contiennent l'acide osmique ; nous n’employions que des éprouvettes et des flacons débarrassés de même de toute trace de matière organique.

(1) Flemming donne (Zeitsch. f. wiss. Mikroscopie, 1, 1884, p. 349) de son mélange fort la formule suivante :

ACIdO 06MIQUO à ZIDAM00 00 een semence & parties Acide chromique à 4 p: 400 ......... M see MAD te Acide acétique glacial.......,,....:....,.,...,.. 4 —

Nous prenions pour notre mélange 8 parties d'acide osmique à 4 p. 100,

AD

De cette sorte nous n'avons jamais eu à déplorer la moindre réduction de l'acide osmique avant l'usage.

Les morceaux de foie à fixer au Flemming avaient 1/2 à 1 cent. de côté et une épaisseur n’excédant pas 2 millim. Ils séjournaient de 20 à 24 heures dans ce liquide, étaient rincés de 48 à 52 heures dans un bain d'alcool à 60° (1) renouvelé 2 fois en moyenne, jusqu'à ce que celui-ci ne prît plus la teinte jaune de l’acide chromique. Après un passage de 2 heures dans l'alcool absolu ils étaient maintenus 22 heures à l’étuve à 37° dans les tubes bouchés remplis d'un mélange composé de parties égales, en volume, de chloroforme et de paraffine forte fondue. Puis nous les coulions dans cette même paraftine fusible à 54° après 2 heures d’étuve à D4.

Les coupes étaient pratiquées au 300° de millim.

Elles étaient examinées sans coloration préalable ou bien étaient colorées à la fuchsine acide ou suivant la méthode de Flemming safranine-violet de gentianeorange G.

La fuchsine acide doit être employée en solution très faible, à peine rosée, après un mordançage de 18 à 24 heures à l’étuve à 37° dans une solution aqueuse d’alun de chrome à 4 °/, environ, Nous avons monté au baume de Canada les coupes ainsi colorées.

Nous appliquions la méthode de Flemming de la façon suivante : Pendant deux jours les coupes restent dans la chambre humide en contact avec un peu de safranine

(1) Nous rappelons que l'alcool à 60 se prépare en ajoutant à 400 cent. cub. d’alcool à 900 53 cent. cub, d’eau.