PLAN DES EXPÉRIENCES

Nous avons d’abord répété les expériences de Moxrez*: nous avons déposé dans le sac lymphatique dorsal de grenouilles du ‘calomel en suspension dans l'huile de vaseline. Mais le liquide obtenu est formé d'huile et de sérum ; à l'examen dans la cuvette, on a deux couches : l’une supérieure, huileuse, l’autre inférieure, séreuse et, la supérieure, dans laquelle nagent de nombreux cristaux de calomel, nuit à la netteté de l'inférieure où se trouvent les leucocytes. De plus, les cristaux de calomel ne présentent n1 coloration, m1 forme parfaitement caractéristiques ; 1ls ne sont pas toujours semblables à eux-mêmes, au moins à l'examen microscopique et il faut un œ1l exercé, habitué à les déceler pour les découvrir à l’intérieur des globules blancs. Moxrez avait d’ailleurs résolu la question de l'absorption du calomel par les leucocytes; nous n'avons pas continué ces expériences qui nous auraient mené au même point que l'élève du professeur ARNOzAx.

Caractères du mercure métallique en émulsion,— Ces considérations : difficulté d'examen du li-

ire quide mi-séreux,mi-huileux,manque de caractères différentiels des cristaux de calomel, nous firent chercher un autre mode d’expérimentation. En examinant de l'huile grise au miscrocope, on est frappé de l'aspect de l’'émulsion : on voit des sphères mercurielles de diverses grandeurs ; leur diamètre varie de 15 ou 20 # à 1 u et moins; ce sont des sphères au sens géométrique du mot, leur contour apparaît parfaitement circonférentiel; elles sont d’un noir mat avec un centre lumineux ; elles présentent aussi un secteur lumineux, étroit, parfois très net, parfois difficile à distinguer, surtout lorsque la sphère est petite. On peut le faire disparaître en ne permettant l'accès de la lumière que par la face inférieure de la lamelle porte-objet. Dans le champ du microscope, ces sphères, les unes infiniment petites, les autres d’un diamètre plus grand, qui se détachent si bien en noir sur le fond lumineux, donnent l'impression d’un « firmament négatf ». À priori, ces sphères, de par ces caractères, semblaient devoir être facilement reconnues à l'intérieur des leucocytes et différenciées des granulations physiologiques.

Mais on se trouve, avec l’huile grise, au point de vue de sa différence de densité avec le sérum, dans les mêmes conditions qu'avec le calomel dans l'huile de vaseline. En triturant, dans un mortier, du mercure avec de la gomme arabique et un peu d'eau, on obtient une émulsion miscible au sérum : dans cette préparation, le mercure est aussi finement émulsionné que dans l'huile grise. Nous n'en saurions indiquer les proportions: nous ne l'employions, en effet, jamais le jour même de sa confection, mais les jours suivants ; les gouttelettes de

ZE 107 .<Z mercure les moins finement émulsionnées avaient eu le temps de se déposer et la partie supérieure de l'émulsion ne contenait du mercure qu'à l’état de division extrême. Quand à la consistance, nous ajoutions de l’eau en quantité suffisante pour avoir une préparation facilement injectable. Mentionnons que cette émulsion ne dure pas indéfiniment : un flacon en contenant, laissé au laboratoire durant les mois d'août et septembre, préséntait des moisissures à la surface de la gomme arabique, dans laquelle on ne trouvait plus de mercure, car 1l s'était rassemblé à la partie inférieure du flacon.

Leucocytes de la grenouille. — Nous avons expérimenté surtout sur les grenouilles, dont les leucocyles sont trois ou quatre fois plus grands que ceux de l’homme ou du cobaye ; il est facile, avec une pipette, de recueillir, dans le sac dorsal, de la Iymphe qui contient de nombreux globules blancs. Il y en a de trois sortes :

1° Des lymphocytes, dont le noyau arrondi occupe presque toute la cellule ; le protoplasma tient une place extrêmement faible.

2° Les leucocytes ordinaires à noyau, tantôt arrondi et unique (c’est le cas le plus rare), tantôt multilobé. On peut avoir jusqu'à quatre lobes qui sont, en général, nettement distincts et unis entre eux par des fils d'union; le protoplasma occupe un volume double du noyau.

3° Les éosinophiles, qui, comme dimensions el comme forme du noyau, rappellent tout à fait les leucocytes hyalins précédents. Tout l'espace extranu-

cléaire est rempli de granulations arrondies se colorant en rouge par l’éosine.

Dans la lymphe normale, dans ie sang, les lymphocytes atteignent quelquefois la moitié du nombre total des globules blancs; dans l’exsudat dorsal on en trouve à peine 2 pour 100. « Les vrais phagocytes, dit Mesniz (Ann. de l'Inst. Pasteur, 1895) qui a étudié la résistance de la grenouille vis-à-vis de la bactéridie charbonneuse injectée dans le sac dorsal, ce sont les leucocytes ordinaires à protoplasma hyalin ; ils arrivent les premiers, dès le commencement de la leucocytose et l’on voit des microbes à leur intérieur. Les cellules éosinophiles viennent en petit nombre au point d’inoculation. Leur rôle phagocytaire se réduit à peu de chose, bien qu'avec évidence les éosinophiles soient des phagocytes. »

Avant d'entrer dans le détail de nos expériences, nous ferons remarquer le soin qu’il faut apporter à ne pas confondre le mercure avec d’autres granulations. Nous ne voulons pas parler des granulations physiologiques petites, peu distinctes, transparentes, le plus souvent réunies en amas à une extrémité de la cellüle, présentant à l'examen à l’état frais une teinte verte jaunâtre très pâle. Les granulations que nous avons en vue sont d'un autre aspect, volumineuses (2 à 6 w), Jamais parfaitement rondes, mais toujours soit échancrées, soit vaguement quadrilatères ; leur coloration va du brun foncé marron au jaune clair. Mess signale de tels pigments dans les cellules endothéliales. Les leucocytes en contenant sont rares dans la circulation générale, de même que dans la lymphe du sac dorsal :

ils nous ont semblé y devenir plus nombreux lorsque la grenouille avait été traumatisée, après de nombreuses prises de liquide lymphatique. Ces cellules pigmentées sont au contraire infiniment nombreuses dans le foie, la rate, la moelle des os. Elles ont été maintes fois décrites.

Ce sont les Pigmentzellen homologues des cellules de Kuprer du foie des mammifères. Ce sont des macrophages.

Cette cause d'erreur ne se retrouve pas chez le cobaye, mais les leucocytes y sont bien moins volumineux que chez la grenouille, moins faciles à se procurer et, de ce fait, la phagocytose plus difficile à observer.

Technique.— Nos examens microscopiques ont été faits avec un microscope WriGerr oculaire n° 4, objectif 7 4. donnant un grossissement d'environ 800 d.

C’est toujours à l’état frais, dans une petite cuvette de 1/20 de millimètre de profondeur que nous avons observé les globules blancs. Les préparations sèches, colorées ou non, ne nous ont pas donné de bons résultats; les sphères mercurielles intra-leucocytaires qui apparaissent si nettes et caractéristiques, le leucocyte étant dans son milieu naturel, le sérum, perdent par la dessiccation et la coloration leur parfaite netteté de contour, leur teinte noire mate, leur centre et leur secteur lumineux, caractères qui nous ont permis de les différencier des autres granulations intra-leucocytaires.

Pour les noyaux des leucocytes, 1l était parfois possible de les distinguer sans réactifs; le plus fréquem-

ET 2 ment nous avons employé, pour faire apparaître le noyau, le procédé indiqué par Raxyier dans son Traité d’histologie « À une goutte de lymphe déposée dans la cuvette de la lame, on ajoute une goutte d’une solution d'alcool à 36 degrés dans deux parties en volume d'eau distillée ; les deux gouttes sont mélangées par agitation avec la pointe d’une aiguille. Toutes les cellules lymphatiques sont frappées de mort et les noyaux apparaissent nettement avec un double contour. »

Nous injections dans le sac lymphatique dorsal de la grenouille au moyen d’une pipette effilée, par une petite boutonnière faite à la peau, quelques gouttes de notre émulsion. Le lendemain et les jours suivants, avec une pipette identique, nous recueillions par capillarité un peu de liquide clair, transparent, de densité uniforme, facile à examiner de ce fait.

Pour déterminer loin du lieu de l'injection un afflux de leucocytes, nous nous sommes inspiré de la techni- . que suivie par SrAssanO (C. À. des séances de l’Académie des sciences, 1898). La grenouille ‘autant que possible ne contenant pas d’œufs dans son abdomen) est fixée sur le dos sur une plaque de liège ; la peau estsecionnée, la paroi abdominale musculaire mise à nu; on injecte, à l’aide d’un seringue de Pravaz, dans l’abdomen de la grenouille > centimètres cubes d’eau distillée ou de sérum artificiel en piquant la paroi à 3 ou 4 millimètres de la ligne médiane, pour éviter une hémorragie ; après avoir traversé la paroi, on dirige l'aiguille parallèlement à elle et l’on pousse lentement le liquide. Deux heures après, avec une pipette très effilée que l'on dirige comme l'aiguille, on peut, par

Nr capillarité, recueillir un peu de liquide, qui, déjà à ce moment, contient, de nombreux leucocytes.

Nous avons fait des injections d’'émulsion mercurielle dans la cuisse des cobayes et provoqué un afflux de leucocytes dans leur péritoine par le même procédé que chez les grenouilles. Enfin, dans le même but, chez un cobaye nous avons déterminé par l'essence de térébenthine, loin du lieu de l'injection mercurielle, un abcès de fixation dont nous avons examiné les éléments.