TECHNIQUE

La variété des recherches auxquelles je me suis livré a nécessité remploi de méthodes variées elles-mêmes. Je ne donnerai ici que des indications générales sur ces méthodes, et j'aurai, dans la suite, l'occasion de fournir des renseignements plus précis sur les procédés de technique, à l'aide desquels les résultats exposés auront été obtenus.

Parmi les Bryozoaires étudiés, quelques espèces seulement, à ectocyste cuticulaire ou légèrement calcifié, se prêtent aux observations sur le vivant ; mais celles-ci sont impraticables avec les espèces fortement calcifiées, ou avec celles dont le squelette cuticulaire est rendu opaque pai' le dépôt de corps étrangers à la surface des colonies. Je n'ai eu recours, d'ailleurs, à ce mode d'observation que pour acquérir une idée d'ensemble sur l'organisation générale et la situation respective des organes entre eux. La plupart de mes recherches ont été faites sur des matériaux conservés après fixation préalable.

Par suite de la nature du squelette chez les espèces à ectocyste imprégné de calcaire, j'ai dû avoir recours à des fixateurs acides, à des fixateurs décalcifiants. De tels réactifs ne s'imposent pas avec les espèces à ectocyste simplement cuticulaire ; mais, même dans ce cas, ils rendent encore de grands services, car il faut toujours compter avec les Diatomées et les Foraminifèrcs à test calcaire, pullulant sur les colonies de Bryozoaires, et dont on ne se débarrasse jamais complètement par de minutieux balayages au pinceau. Après de nombreux essais, j'ai pris comme type de fixateur, le sublimé acétique, préparé suivant la formule adoptée par M. le Professeur Roule :

Solution aijueuso saluréc » chaud de sublime corrosif 100 vol.

Acide acétjfiue crislaliisablc ?0 à 23 —

Ce liquide, outre qu'il comporte les colorations les plus diverses, simples ou combinées, donne des fixations g-énérales très fidèles. C'est à lui que jai eu le plus souvent recours, et je n'ai jamais eu à me plaindre dune action ratatinante sur les tissus, inconvénient signalé par quelques auteurs dans les fixations obtenues par les liqueurs à base de sublimé. Cependant, pour les espèces fortement calcifiées, l'action de l'acide acétique est tellement énergique, que la position des feuillets constituant les parois tégumentaires est quelque peu dénaturée par la formation et le dégagement de grosses bulles d'acide carbonique. Il est utile, dans ces conditions, de modérer le pouvoir décalcifiant de ce fixateur. Plusieurs séries d'expériences comparatives m'ont montré qu'il y avait avantage à fixer rapidement, et à ne décalcifier que lentement, mais progressivement. J'ai donc employé, dans les fixations par le sublimé acétique, une solution de sublimé d'abord faiblement acétifiée, à laquelle je substituais des solutions où le titre de l'acide acétique était graduellement augmenté, jusqu'à ce que les proportions du liquide de Roule fussent atteintes.

J'ai employé aussi bon nombre de fixateurs à base d'acide chromique et à base d'acide picrique ('). L'acide chromo-acétique ei l'acide chromo-nitrique (liq. de Perenyi) m'ont donné parfois quelques bons résultats, inférieurs cependant à ceux obtenus avec le liquide de Roule. Les mélanges chromo-acëto-osmiques de Flemming (mélange faible et mélange fort) ont été utilisés pour la démonstration des phénomènes nucléaires .relatifs à la sperniatogénèse, mais avec peu de succès. Je leur ai substitué l'action successive de deux solutions chromo-chlorhijdriques que je composais ainsi :

\ Acide rhi"omi(Hie, solul. aqueuse ;i 0,35 0/0 — 100 vol. ' Acide chlorhydrique, — 3 0|0 — 1 —

( Acide clironii(iue, solul. aqueuse à 0,2 0/0 — 100 vol. ( Acide chlorhyiirique, — 5 0/0—1 —

Les matériaux fixés dans ces deux solutions ont l'avantage, sur ceux traités par les mélanges chronro-acëto-osmiques, de ne pas être noircis par l'acide osmique, et les figures nucléaires y sont aussi

('} Les formules de ces différents fixateurs ont été prises dans le Truilé des Méthodes techniques de BoUes Lee et Henneguy, 2" édil., 1896,

— Infidèlement ron^ervées. Les acides picro-chlorhydrique et picronitriqiie de Mayer mont donné également de bonnes fixations.

l'ne fois la fixation obtenue, et après un lavage approprié dans l'eau courante ou l'alcool, les colonies ou parties de colonies ont été déshydratées dans la série des alcools, incluses dans la paraffine avec passage transitoire dans le toluol ou le xylol, et finalement, débitées en coupes minces à l'aide des microtomes de Dumaige ou de Minot. Celles-ci ont été collées sur lame à l'albumine glycérinée, après déplissement par l'eau distillée sur la platine chauffante toutes les fois qu'il y avait lieu.

J'ai pratiqué, à peu près toujours, les colorations sur lame, estimant qu'il était avantageux de pouvoir en surveiller les progrès et en arrêter l'action en temps voulu. Le colorant que j'ai le plus souvent employé est Vhématoxyline de Delafield en solution faible, soit seule, soit combinée à Veosine ou à la safranine. suivant les cas. .l'ai obtenu de très bonnes colorations par le carmin boracique alcoolique de Grenacher, avec les matériaux fixés au sublimé acétique ou avec le- nu-langes chromo-chlorhydriques A et B. La safranine aniline'e de Babes, comme colorant simple ou dans les colorations combinées, avec le kernschwarz ou avec le violet de gentiane et Vorange G. de Grûbler, a et'' surtout employée avec les matériaux fixés par les liqueurs de Flemming. J'ai encore fait usage dans ces derniers temps du bien polychrome de Unna ('), qui. quel cpie soit le mode de fixation, donne une remarquable différenciation des tissus, en même temps qu'il peut être ronsidt'-ré comme un des meilleurs colorants nucléaires.

Knfin, les pré|)arati()ns ont été montées au baunic de Canada.

"') C est dans le laboratoiio dliistoloiiic de la Faculté de Médecine de Montpellier, dirige par M. le Professeur Vialleton. (lue je me suis familiarisé avec l'emploi de ce colorant.

TERiMINOLOGIE

Tous les Bryozoaires possèdent la faculté de se multiplier par voie de bourgeonnement, et, sauf l'exception présentée par les différentes espèces du genre Loxosoma, les individus ainsi produits ne se séparent pas de l'organisme maternel, auquel ils restent unis pendant toute la durée de leur existence; ils forment ainsi des colonies dont la forme est soumise au mode de bourgeonnement.

Ces colonies ont reçu successivement de la plupart des auteurs anglais les noms de <i polijzoariiim » ou de « zoarium », tandis que ces mêmes auteurs ont donné les noms de « cell » ou de « zoœciiim » aux divers membres de la colonie, les appliquant, tantôt à lensemble des,partics constitutives de chacun de ses membres, tantôt seulement à la loge tégumentaire. Le tube digestif a été appelé d'abord << polijpe » et, plus récemment, a polypide ».

Cette terminologie, généralement adoptée, a été traduite dans diflerentes langues. Cependant, Reichert et Nitsche en Allemagne, ayant repris les idées émises par Allman en Angleterre et soutenues par Leuckart, sur la valeur de chacune des parties constitutives des zoécies, ont voulu marquer la double individualité qu'ils supposaient exister dans chaque zoécie. Sous les noms de « brulkapsel » (Reichert), « cysiid » (Nitsche), ils ont désigné le système tégumentaire de la zoécie, et par les noms de « bryozoïd » (Reichert), et ^^polypid» (Nitsche), le tube digestif et ses dépendances qu'ils considéraient comme formant une individualité différente de celle du « brulkapsel » ou du « cysiid », dont il dérive par bourgeonnement.

Les théories d'Aliman, Leuckart, Reichert • t Nitsche sont aujourd'hui définitivement abandonnées, et chaque membre de la colonie est regardé comme ne représentant qu'une seule et même individualité ; les différentes individualités de ces auteurs ne sont plus considérées que comme; de simples organes de l'individu zoécial.

M. Prouho (92) a montré l'imperfection d"unc semblable terminologie. Suivant la marche adoptée par M. Lacaze-Duthiers dans son Histoire naturelle du Corail, il a donné le nom d'oozoïle au premier membre de la colonie, issu de la métamorphose de la larve, tandis que tous les autres individus de la colonie, dérivés de loozoïte par blastogénèse, ont reçu le nom de blastozoïtes. Enfin, M. Prouho ne donne le nom de zoécie qu'à l'enveloppe squelettique du hryozoite (blastozoite ou oozoïte), et applique la dénomination de polypide à « lensemble des organes digestifs, nerveux et musculaires, soumis au phénomène périodique de Ihistolyse et du renouvellement, naissant tousdune même ébauche -).

J'accepte les significations plus restreintes données par cet auteur aux termes de polypide et de zoécie ; je conserve aussi les dénominations d'oozo'ite, blastozoïte et bryozo'i'te, avec la légère modification que leur a fait subir M. le Professeur Perrier dans son Traité de Zoologie générale (pp. 43, 44 et 1464j. Je désignerai donc, sous le nom d'oozoïde, le premier individu de la colonie provenant directement de la métamorphose de la larve, la « primary cell » des auteurs anglais; sous le nom de hlastozo'ides, les différents membres de la colonie issus par bourgeonnement, soit de l'oozoïde, soit de blastozoïdes préexistants, soit encore d'un stolon prolifère issu lui-même de l'oozoïde. Ces différents individus, oozoïde et blastozoïdes, recevront la dénomination plus générale de hryozoïdes, et leur association, celle de bryarium.