TABLEAU IX
..Stabilité de la diiodotyrosine dans NaOH 5N au bain d'huile
à 115 Quantité de diiodotyrosine Temps de chauffage s Ecart p. 10 (heures et minutes) | mise en œuvre retrouvée he colorimétrie ve ug
Il convient, l’hydrolyse achevée, d'éliminer la thyroxine, car elle donne la même réaction colorée que la diiodotyrosine en
TT
présence d’ions nitreux. La solubilité dans le butanol du sel sodique de la première permet ce fractionnement (LELAND et FosTER, BLAU). Comme nous nous en sommes assurés, la thyroxine est aussi efficacement éliminée d’un mélange des deux acides aminés purs que d’un hydrolysat protéique par l’extraction butanolique d’une solution sodique. De plus, les produits de sa dégradation pouvant se former au cours de l’hydrolyse alcaline n’interviennent pas dans le dosage, car ils sont ou solubles comme elle dans le butanol ou non-chromogènes en présence d’ions nitreux.
Par contre, d’autres acides aminés sont alors susceptibles de gêner et il convient ou de les éliminer, ou de tenir compte de leur présence en introduisant un facteur de correction.
Deux observations sont à retenir dans ce domaine. Comme nous l’avons déjà signalé, le tryptophane et la tyrosine donnent naissance à des pigments jaunes dans les conditions où l’on se place pour opérer la réaction de la diiodotyrosine au nitrite de sodium. Néanmoins, la coloration due au tryptophane est si faible qu’elle ne gêne pas les mesures si la prise d’essai renferme moins de 2 Mg de celui-ci. C’est là une condition très facile à réaliser en pratique, les thyroglobulines renfermant de 2,0 à 2,3 p. 100 de cet acide aminé et les iodoprotéines artificielles étant d’une teneur en diiodotyrosine toujours assez élevée pour que l’on puisse opérer sur des quantités très faibles. Il n’en est pas de même de la réaction de la tyrosine, environ 80 fois moins intense que celle de son dérivé diiodé (filtre S;9), mais non négligeable, surtout dans les thyroglobulines, renfermant en général 3,2 p. 100 de tyrosine et environ 0,4 p. 100 du dérivé diiodé. L'expérience a montré que l’absorption des pigments provenant des deux acides aminés suit la loi de BEER-LAMBERT entre 50 et 200 ug de diiodotyrosine et 0,5 et 4,0 Mg de tyrosine. Par ailleurs, elle est égale à la somme de celles propres à chaque constituant dans le mélange des deux corps. Ceci étant, om peut doser la diiodotyrosine en présence de tyrosine en se reportant à un système de deux courbes d'étalonnage dont un exemple, ccrrespondant aux valeurs expérimentales citées (page 25) est reproduit sur la fig. 4. Il suffit pour cela de soustraire de la valeur d’e lue au photomètre PULFRICH (filtre S;,, cuve de 2 cm) lors du dosage d’un mélange, de celle d’e correspondant à la quantité de tyrosine présente dans la prise d’essai. Cette dernière valeur est déterminée par extrapolation sur une
RS
courbe d'étalonnage établie sur l’acide aminé pur, la quantité de tyrosine présente étant au préalable dosée par la méthode
y de Diiodotyrasine 50 100 150 200
0,10 Tyrosine (mg FAUNE Et 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 mg. de Tyrosine
Fig .4 — Courbes d'étalonnage de la réaction colorée de la diiodotyrosine et de la tyrosine (écran Sx, 2 cm d’épaisseur). Abscisses : ug
de diiodotyrosine et mg de tyrosine. Ordonnées : coefficient d'absorption (€).
de BERNHART [19]. Quelques exemples justifiant ce mode opératoire ont été rassemblés dans le tableau X.
