RECHERCHES PERSONNELLES

Sur la formation de la thyroxine et de ses précurseurs dans les iodoprotéines.

a. PLAN DES RECHERCHES, MATÉRIEL D'ÉTUDE ET TECHNIQUES.

Nous nous sommes proposés de préparer des iodoprotéines de teneur plus ou moins élevée en iode, afin d’y doser la tyrosine, la monoiodotyrosine, la diiodotyrosine et la thyroxine. Deux principaux facteurs paraissaient susceptibles de modifier l’évolution de la formation de ces dérivés. D'une part, la monoiodotyrosine, produit initial de l’halogénation, doit donner naissance à la diiodotyrosine au fur et à mesure que les protéines s’enrichissent en iode. D'autre part, la synthèse de la thyroxine, réaction distincte de la précédente, doit être plus ou moins intense selon les conditions expérimentales adoptées. Les recherches de REINEKE TURNER sont à cet égard significatives ; elles ont en effet établi que la présence d'oxyde salin de manganèse, Mn;:0, augmente le rendement en thyroxine des opérations poursuivies en mettant en œuvre 6 atomes d’iode par molécule de tyrosine. Ceci étant, nous avons institué deux séries d'expériences où l’ioduration a été réalisée dans des mi-

lieux de potentiels oxydants divers, à savoir : par l’iode en poudre agissant à pH — 7.8 et en présence de bicarbonate de sodium et par des solutions iodo-iodurées ajoutées à des protéines dissoutes dans de l’ammoniaque à 5 p. 100.

Les protéines sur lesquelles ont porté nos recherches sont : la caséine de vache purifiée par dissolution en milieu ammoniacal et précipitation à pH — 4.6 et la thyroglobuline de porc, isolée par précipitation à pH — 4.6 d'extraits thyroïdiens préparés, par la technique de CAVETT, RICE et Mac CLENDON [40]. La première renfermait 15,6 p. 100 N et la seconde 15,9 p. 100 N.

Une première série d’iodoprotéines a été obtenue par la méthode de REINEKE, WILLIAMSON et TURNER [174] appliquée dans sa forme originale, à ceci près que le pH du milieu a été assez rigoureusement maintenu à pH — 7,8 par addition de bicarbonate de sodium au cours des opérations. L’ioduration a été réalisée en deux temps. Les solutions à 2,85 p. 100 de protéine renfermant 5 g CO;NaH par 700 cm*, portées à 37° et soumises à une agitation mécanique continue (hélice de verre, 300 tours/minute), ont été additionnées d’iode en poudre. L’halogène a été ajouté par petites portions en quantités diverses, correspondant à des rapports précis entre le nombre de molécules-gramme de tyrosine présentes et celui d’atomes-gramme d’iode que l’on désirait mettre en œuvre. Après fixation de la totalité de l’iode sur la protéine, réalisée en 2 heures 30 minues, la température a étè portée à 70° et l’on a continué l’agitation et le chauffage pendant 20 heures, en vase clos. Après refroidissement à 15°, on a acidifié à pH — 4,8 par HCI 4N et centrifugé l’iodoprotéine précipitée. Celle-ci a été dissoute à pH — 8,5 par addition de soude et dialysée pendant 3 à 4 jours contre de l’eau distillée, jusqu’à disparition d’iode libre et d'ions l-. Elle a été ensuite précipitée à pH — 4,8, lavée à l’eau acidulée par l’acide acétique et desséchée dans le vide sur anhydride phosphorique, jusqu’à poids constant ; cette dernière opération exige plusieurs jours.

Une seconde série de produits a été préparée en faisant réagir à 0° les protéines en solution à 2 p. 100 dans l’ammoniaque diluée (5 p. 100) avec des solutions iodo-iodurées (3 g I + 6 g IK + H,0 q.s.p. 50 cm), à la température de 0° (MUTZENBE- CHER) [140]. L’halogène, ajouté en quantité connue, est absorbé par la protéine en 10 à 30 minutes. Après séjour du milieu

à 0° pendant 12 heures, l’iodoprotéine est séparée par préci-