RECHERCHES PERSONNELLES
I. — Dosage de la thyroxine et de la diiodotyrosine en solution pure et dans leur mélange en présence d’autres acides aminés.
Il convenait tout d’abord d’étudier la réaction colorée de la thyroxine et de la diiodotyrosine aux ions nitreux en vue de son adaptation au dosage de ces corps à l’état pur, comme l'ont envisagé indépendamment de nous MORTON et CHAIKOFF [138]. Nous avons recherché par la suite dans quelle mesure cette réaction est spécifique des deux acides aminés iodés en présence d’autres non halogénés. Enfin, nous avons appliqué le dosage de la thyroxine et de la diiodotyrosine pures à leur mélange après avoir réalisé le fractionnement de ce dernier.
1. ÉTUDE DE LA RÉACTION COLORÉE DE LA THYROXINE ET DE LA DIIODOTYROSINE ET DOSAGE DE CES CORPS A L'ÉTAT PUR.
Les solutions chlorhydriques de thyroxine ou de ditodotyrosine (*) additionnées de nitrite de sodium se colorent en jaune et virent ensuite à l’orangé par ébullition, puis au rouge brun par alcalinisation à l’ammoniaque. Après divers essais, nous avons éliminé la teinte brune apparaissant irrégulièrement dans le dernier temps de la réaction et sensibilisé celle-ci en opérant dans des conditions particulières. Les réactifs néces- Saires sont (5) ::
Solution I : (a) Dissoudre 2,50 Mg de diiodotyrosine dans 10 em NaOH 10 N, ajouter 25 em* H:0 puis 10 ml HCI 10,5 N et H:O q.s. p one (b) Dissoudre 5,00 Mg de thyroxine dans 20 em NaOH
Solution IT : (a) Ajouter à 10 cm3 NaOH 10 N, 10 cm3 HCI 10,5 N et H:0 q. s. p. 50 cm3. (b) Mélanger 14,3 em NaOH 10 N avec 14,3 em? HCI 10,5 N et compléter à 50 em avec H.0.
Solution IT : Solution à 1 p. 100 de nitrite de sodium fraichement préparée.
Ammoniaque concentrée (29 p. 100 NH).
Ethanol à 95°.
Le mode opératoire est le suivant : on place dans un tube à
(*) La DL-thyroxine et la L-diiodotyrosine employées pour ce travail présentaient les teneurs en iode suivantes : thyroxine, I p. 100 théorique — 65,35, trouvé — 65,05 ; diiodotyrosine, I p. 100 théorique — 58,63, trouvé — 58,30. Nous remercions la Maison Hoffmann-Laroche de nous avoir fourni ces produits.
(7) Les réactifs (a) sont particuliers à la diiodotyrosine, (b) à la thyroxine.
24h Pate
centrifuger conique une prise d'essai de solution I (5 cm° au plus) renfermant 100 à 300 ug de thyroxine (Ib) ou 50 à 200 ug de diiodotyrosine (Ia) et l’on complète en cas de besoin à 5 cm* avec de la solution IT (a ou b selon l'emploi de solution Ia ou b). On ajoute 2,5 cm* d'alcool à 95° puis, après agitation, 1 em° de solution III. Il se développe alors une coloration jaune atteignant son maximum d'intensité en 10 minutes à la température du laboratoire. Ce temps écoulé, on ajoute 1,50 cm d’ammoniaque concentrée et l’on mélange. Le milieu prend une teinte rouge, stable pendant 15 à 20 minutes. On centrifuge le fin précipité salin prenant naissance et l’on mesure l’intensité de la coloration au photomètre de PULFRICH, sous 2 cm d'épaisseur et en lumière filtrée par l'écran So.
La réaction est plus intense avec la diiodotyrosine qu'avec la thyroxine. Elle est sensibilisée par le chlorure de sodium, elle est plus ou moins forte selon l'acidité du milieu et la cencentration de-celui-ci en acide nitreux.
Les conditions que nous venons de mentionner sont les plus favorables tant en ce qui concerne la concentration des réactifs utilisés que les temps nécessaires à leur action. Elles ont été établies après de nombreux essais dans lesquels nous avons fait varier ces différents facteurs.
Il est donc indispensable d’opérer dans des conditions toujours identiques pour réaliser des mesures photométriques comparables entre elles. Le tableau TI indique l’intensité de la coloration apparaissant en présence de 50 à 200 ug de diiodotyroxine ou de 100 à 300 ug de thyroxine dans les essais réalisés selon le mode opératoire choisi.
