CHAPITRE Il

Fixation.

La condition essentielle pour obtenir de bons résultats est d'opérer sur du matériel en parfait état ; mais il est ,important de noter que, chez les Mousses, l’aspect macroscopique de l’objet est sans rapport avec sa structure intime. Il est toujours nécessaire de s’assurer, par un examen microscopique extemporané, que le végétal est cytologiquement en bonnes conditions. Il est, en outre, indispensable d’obtenir une pénétration rapide et totale du fixateur et, par conséquent, d'assurer son contact étroit avec toutes les régions de l’objet. Il y a généralement à cela deux obstacles : d’une part, la faible densité des fragments à fixer qui les ramène constamment à la surface; d’autre part, la présence de bulles d’air nombreuses adhérentes aux aspérités du végétal. Il est facile d’obvier à ces inconvénients en plaçant les objets au fond d’un tube, au-dessous d’un tampon d’ouate hydrophile qui les empêche de surnager et en portant ensuite le tout sous la cloche pneumatique, qui réalise une élimination rapide des bulles d’air. Moyennant ces précautions, et si d'autre part le matériel traité est en bon état cytologique, le succès est la règle.

CHONDRIOME. — Le formol, dont les propriétés coagulantes avaient été indiquées dès 1892 par Triccrar (1), fut repris par SJÔBRING [1900], qui le préconisa comme un excellent fixateur des structures granuleuses ou filamenteuses de la cellule (2). Mais, lorsqu'il est employé seul, les colorations

ultérieures sont généralement mauvaises et peu contrastées. Le bichromate de potasse, qui donne des sels métalliques, et non plus comme le formol de simples composés d’addition, favorise au contraire la coloration des mitochondries. Son action n’est donc pas à proprement parler une action fixatrice, et CHampy [1911] a montré que la postchromisation plus ou moins prolongée préconisée par BENDA n’a pas pour but d'empêcher les mitochondries de se dissoudre, mais simplement d'en permettre une meilleure coloration (1). ReGaup [1908], associant dans un même mélange ces deux fixateurs, réalise une méthode (2) dans laquelle la postchromisation n'est plus absolument nécessaire (3). Il en donne en 1910 la formule définitive et désormais classique sous le nom de Procédé IV (4). C’est lui que j'ai retenu. Il est trop connu pour que je le décrive à nouveau.

SUBSTANCES GRASSES. — Le procédé de choix repose sur l’emploi de l’acide osmique (tétroxyde d’osmium). Ce corps, outre la propriété déjà indiquée de se réduire au contact des graisses et de les colorer par précipitation à leur niveau d’osmium métallique, fixe assez bien le protoplasme. Malheureusement, comme le formol, il donne seulement des composés d’addition ou d’oxydation et pas de sels métalliques. De telles combinaisons sont peu colorables ; aussi est-il nécessaire de l’associer à l’acide chromique, qui, dans ces conditions, n’exerce aucune action nuisible sur le protoplasme et augmente au contraire sa colorabilité (LANGERON [19257 (5). CHampy [1911] adopte cette méthode et la modifie par l’addition de bichromate de potasse (6), réalisant ainsi, comme dans la méthode de REGAUD, une assez bonne coloration du chondriome, encore améliorée par une postchro-

Reese

Le fixateur de CHampy est ainsi composé: bichromate de potasse à

3 p. 100, 7 parties ; acide chromique à 1 p. 100, 7 parties ; acide osmique à 2 p. 100, Æ parties (p. 59).

misation d’une semaine environ. J’ai utilisé cette technique. Elle à surtout l’avantage de mettre excellemment en évidence les corps gras ; en outre, malgré des résultats sensiblement inférieurs à ceux que fournit la méthode de REGAUD, elle réalise un contrôle appréciable de cette dernière méthode.

Noyau. — L’acide chromique donne avec les albuminoïdes des composés peu solubles. C’est cependant un mauvais fixateur pour le cytoplasme, où il produit souvent des réseaux irréguliers prêtant à des interprétations erronées. Par contre, il est parfait à l’égcard des substances chromatiques du noyau, surtout s’il est associé à un acide qui, empêchant la formation de sesquioxyde de chrome, facilite la coloration. L'acide dont le choix s’impose Pour cet usage est évidemment l'acide acétique. Il possède, en effet, la propriété de précipiter les substances nucléaires et de gonfler le cytoplasme, augmentant ainsi les contrastes entre ces deux régions cellulaires. Le mélange de FLEMMING réalise la meilleure formule de fixateur chromo-acétique. L'addition, proposée par BATAIL- LON (1), d'acide picrique, qui, par ses propriétés oxydantes, neutralise les éléments réducteurs de la cellule, facilite

encore les colorations. C’est ce fixateur que J'ai adopté. Il est ainsi COMposé :

Acide chromique à 10 PROS ne EC AE TR 10 — picrique (solution AUDEUSCESA TURC) RENE PARR Ee 80 A AU te Per 10

Il fixe les mitoses de façon parfaite et met remarquablement en évidence les formations fusoriales et les chromosomes. Il est cependant discutable en ce qui concerne les images centrosomiennes. HEIDENHAIN [18967 indique qu’à cet égard les fixateurs à base de sublimé donnent les meilleurs résultats (2). Aussi, pour mettre hors de doute la présence ou l'absence de corps centraux, ai-je employé le liquide de

(1) Cette technique, inédite, m'a été très obligeamment communiquée par son auteur, M, le professeur BATAILLON, de Montpellier. ()BPAMIOE

LA CONNAISSANCE CYTOLOGIQUE DES MUSCINÉES 323

BATAILLON, additionné de bichlorure de mercure à saturation. Les images fournies sont d’ailleurs peu différentes.

APPAREIL RÉTICULAIRE INTERNE. — L'appareil réticulaire interne, décrit pour la première fois par GoL@r [1898] dans les cellules nerveuses (1), est encore, après trente ans, l’objet de discussions nombreuses. Deux groupes de méthodes sont généralement employés pour le mettre en évidence. Les unes reposent sur une imprégnation argentique, les autres sur une imprégnation osmique de cette structure. J’ai donné la préférence aux premières, dont GUILLIERMOND [1927] a montréla spécificité plus grande (2). Toutes dérivent, d’ailleurs, du procédé indiqué par GoLcr lui-même en 1908 (3) et comportent trois temps : fixation, imprégnation par le nitrate d’argent et révélation. J’ai choisi comme étant la plus fidèle la méthode de Cayaz [1924] au formol-urane (4).

Je l’ai appliquée de la façon suivante.

Fixation pendant douze heures dans :

OO OPEL Peche dun ue 3 centimètres cubes.

Nitrate d’uranyle (solution aqueuse à 1 p. 85)..... 17 — —

Lavage à l’eau distillée pendant quelques secondes. Imprégnation à froid pendant trente-six heures dans :

NS à CRAN DS Se cle ma oo Or one 1,50 MX)

Lavage rapide à l’eau distillée.

Révélation de huit heures à vingt-quatre heures dans :

Hydroquinone (solution aqueuse à 3 p. 100)....... 10 centimètres cubes. Sulfite de soude (solution aqueuse à 4 p. 100)........ 10 — — onolssmssocsoratunedee ne Mr To Te 3 — —

Cette méthode, comme d’ailleurs toutes celles employées

en pareil cas, n’est pas absolument spécifique. Elle colore assez souvent les mitochondries. Mais une comparaison des images fournies par elle avec celles que donnent les méthodes de REGaup et de CHAmPpy permet d'éviter toute erreur.