CHAPITRE VI

Recherches sur le Viburnum Opulus L.

Essais sur les feuilles et jeunes rameaux de la variété stérile horticole.

Récolte du 16 juillet 1937. — Lors d’un premier essai d'extraction portant sur 800 g. de feuilles fraîches de Viburnum Opulus (variété horticole), récoltées à Versailles en juillet 1937, nous avons tenté de rechercher le viburnitol ainsi que d’autres polyols, en appliquant la technique générale d'extraction que nous avons décrite pour les feuilles et parties vertes des plantes. En fin de cet essai, nous avons obtenu par épuisement acétonique de la poudre sèche sulfatée-sodique habituelle, un principe cristallisé, mais en trop faible quantité pour pouvoir le caractériser. Il nous a semblé intéressant d’en renouveler la recherche et l’extraction sur une quantité plus importante de feuilles de la variété déjà traitée, et ensuite sur les fruits de la variété sauvage, la seule fructifère. Ce sera le but des essais suivants.

* LES

Récolte de. juin 1938. — De jeunes rameaux feuillés et en pleine floraison de la variété horticole ont été récoltés à Champagney (Haute-Saône) en juin 1938. Ils pesaient à l’état frais 3.000 g.

La technique suivie pour le traitement étant conforme aux données générales, nous n’en préciserons que quelques détails ; c’est ainsi que la défécation des 12.000 cm

PRIS De

de liqueurs ayant été soumises à la fermentation — défécation réalisée au moyen de la solution d’acétate neutre de plomb a nécessité 9 cm? de réactif pour 100 cm$.

La précipitation plombique en milieu ammoniacal a exigé, pour 13.100 cm° de filtrat résultant de l’opération précédente, 7 em de sous-acétate de plomb liquide et 2 cm® d’ammoniaque pour 100 cm de liqueur.

De même, pour décomposer le complexe formé, il a été employé 390 cm3 d’acide sulfurique au quart en volume.

L’extrait aqueux obtenu par distillation sous pression réduite a été repris en trois fois, à l’ébullition sous réfrigérant à reflux, pendant une heure chaque fois, par un. volume total de 2.550 cm d’alcool à 95°-96° ; 1.125 cm ont été employés pour chacune des deux premières reprises, après quoi l'extrait résiduel, boursouflé et desséché, a été détaché, pulvérisé au mortier, pour être repris, afin de parfaire l’épuisement, par le reste de l’alcool.

Les liqueurs alcooliques réunies et refroidies, puis filtrées, ont été concentrées. Aucune cristallisation spontanée ne s'étant produite, le protocole opératoire habituel a été poursuivi jusqu’à l’épuisement acétonique qui a duré 20 heures. Nous avons alors trouvé le ballon de l'appareil à extraction garni d’une collerette de très fins cristaux, souillés d’une assez forte proportion d’un extrait brun. Cet extrait de souillure, dont nous avons re- - marqué la solubilité beaucoup plus grande à chaud dans l'alcool à 95° que le principe cristallisé qu’il imprègne, a été éliminé, après une courte ébullition de dix minutes, par dissolution dans 35 cm de ce solvant, qui dans ces conditions ne dissout pas apparemment le corps intéressant. Il a été facile ensuite, en nous conformant à la technique habituelle, d'achever, par plusieurs reprises alcooliques, l'entrainement et la purification du principe restant.

Nous avons obtenu finalement, après essorage, des cristaux très fins et incolores qui, séchés par exposition

PP a de PRES

à l’air, ne pesaient que 0 8.027, ce qui correspond à un rendement de 0 g.,009 pour 1.000 g. de rameaux feuillés.

Essai sur les fruits de la variété sauvage.

Nous avons abordé l’étude des fruits de Viburnum Opulus, avec l'espoir d’obtenir un rendement meilleur en produit analogue à celui déjà extrait des feuilles, nous basant sur ce fait que le viburnitol existe en proportion plus grande dans les fruits que dans les feuilles de Viburnum Tinus.

5.650 g. (1) de fruits mûrs de Viburnum Opulus, dont la plus grande partie a été récoltée par nous en septembre 1938 à Champagney (Haute-Saône), ont été traités selon la technique habituelle. L’addition d’acide sulfurique pur aux liqueurs extractives, à la concentration de 10 g. pour 100 cm“, a provoqué, comme dans le cas du Viburnum Tinus, la formation d’un abondant précipité rouge, et, bien qu’en ajoutant un excès d’acide nous déterminions encore une nouvelle précipitation, nous nous en sommes tenus à cette concentration afin d’éviter ultérieurement, après dilution, la manipulation d’un volume exagéré de liqueurs. L’addition d’un excès d’acide sulfurique, en dehors &@e la quantité nécessaire à l’hydrolyse, a pour but de réaliser une première purification qui, si elle n’est pas complète, est poursuivie à l’occasion des traitements suivants, notamment au cours de l’hydrolyse.

Pour la défécation des liqueurs après fermentation, nous avons fixé, après essai, le taux nécessaire de solution déféquante à 16 em* pour 100 cm3. Nous avions alors à traiter 7.780 cm de liqueur.

Dans la phase opératoire suivante qui comportait la

(1) Une partie de ces fruits nous a été obligeamment procurée ar M. Hanisre, chef de laboratoire de Chimie Pathologique à

l'Hôpital Saint-Antoine (Paris), à qui nous sommes heureux d'adresser nos sincères remerciements.

Sa ter

précipitation plombique ammoniacale de 8.890 cm° de filtrat déféqué, nous avons fixé respectivement à 10 em d'extrait de Saturne et à 2 cm°,5 d’ammoniaque les volumes de ces deux réactifs nécessaires pour la précipitation de 100 cm de liqueur.

Le précipité plombique-ammoniacal a été décomposé par 365 em d’acide sulfurique au quart en volume.

Nous avons repris trois fois successivement, par 1.500 cm d'alcool à 95° chaque fois, et à l’ébullition sous réfrigérant à reflux, l'extrait obtenu par distillation sous pression réduite de la liqueur aqueuse neutralisée résultant de l’opération précédente.

Les liqueurs alcooliques, réunies et refroidies, ont été filtrées et amorcées avec quelques cristaux du principe retiré des feuilles. Après quatre jours, seule l’amorce a blanchi, aucune cristallisation ne s’est produite. Nous avons passé outre et avons poursuivi le traitement habituel jusqu’à l’épuisement acétonique terminal, lequel après une durée de 20 heures n’a donné aucun résultat positif.

Caractérisation du principe cristallisé retiré des tiges feuillées de Viburnum Opulus.

Les déterminations qui suivent ont toutes été effectuées sur le produit recristallisé dans l’alcool à 95° et séché à l'air libre jusqu’à poids constant. Le principe ainsi obtenu se présente sous forme de fines aiguilles brillantes, incolores, sans odeur, combustibles sans résidu.

Traité à 100° sous pression réduite dans un lent courant d'air sec, dans l’appareil de BouILLOT [3] il n’a pas perdu de poids après un-chauffage d’une heure, et, ne s'étant pas coloré, ne semble pas s'être altéré. Nous en concluons qu’il ne renferme pas d’eau de cristallisation.

Son point de fusion instantanée au bloc de Maquenne est P PME MNT TE CE ”

Cette constante physique étant très différente de celles

PAR

des produits jusqu'alors isolés (viburnitol, mannitol), l’aspect peu particulier du principe ne pouvant nous diriger dans sa caractérisation, nous avons décidé d’en effectuer l’analyse élémentaire.

Analyse élémentaire. — Le corps étudié ne renferme pas d’azote.

L'analyse élémentaire en a été pratiquée par microcombustion.

Prise O (par d’essai H,0 CO: H C différence) en mg. en mg. en mg. p. 100 p. 100 p. 100 I. — 3,537 2,20 21 6,89 40,21 52,90 ’où II. — 3,726 2,31 5,45 6,88 39,20 53,22

Moyenne..... 6,885 40,055 53,060

Ce qui, pour détermination de la formule centésimale conduit à :

Ca0055 H 6,885 O53,060 12 1008 16

ou Css37 Hossu Os,46 = 100 ;

en première approximation, en multipliant tous les coefficients par le multiplicateur commun 1,8, nous aurons alors :

Ca,s57 > 1,8 Hosg c 18 Osa16 1,8 = 180, soit Co6,006 H12,296 Os,969 = 180, ce qui, très sensiblement, conduit à la formule brute

CéHy204 = 180,09 (Th. : C : 39,98 — H : 6,71).

D’après ces résultats, soupçonnant que le corps étudié pouvait fort bien être un inositol, nous en avons poursuivi l’étude dans ce sens. Dans les essais qui suivent nous l’avons donc comparé à un inositol du commerce, que nous avons préalablement fait recristalliser dans lPalcoo! à 80°.

Les points de fusion de l’un et de l’autre et de leur

SARICNARE

mélange, déterminés au bloc de Maquenne, ont été tous de 224°-224°,5 C.

Réaction de SCHERER-GALLOIS. — Cette réaction, spécifique des inositols, qui est une conjugaison — déjà préconisée en 1906, par G. MEILLÈRE [8] — des réactions de SCHERER et de GALLOIS (1) est basée sur le fait que ces corps donnent par oxydation un composé quinonique, l’acide rhodizonique, dont certains sels sont colorés en rouge vif. Cette réaction a d’abord été parfaitement réglée en utilisant des doses progressivement réduites d’inositol du éommerce, afin de la transposer dans notre cas particulier et de l’effectuer sur de petites quantités de produit, étant donnée la pénurie de celui-ci. Nous avons précisé les quantités de réactifs nécessaires pour obtenir, toujours dans les mêmes conditions, avec des poids identiques de matière à essayer, des colorations d’intensités égales.

Pour des prises d’essai de 1 mg. à 1 mg.,5, nous avons adopté la technique suivante : la prise d’essai du corps à étudier est placée dans une capsule en porcelaine blanche, à fond rond, de dix centimètres de diamètre, et dis-

soute dans 0 cm#,5 d’eau distillée. On ajoute alors — au moyen d’une pipette divisée en quarantièmes de centimètre cube — 0 cm,025 de réactif de MILLON (2) et

(1) D’après ScHERER, cette réaction se pratique en arrosant un cristal de la substance essayée avec quelques gouttes d’acide azotique ; on évapore à sec sur le bain-marie, puis on ajoute une goutte d’ammoniaque et autant de chlorure de calcium : il se produit une belle coloration rouge, dûe à la formation de rhodizonate de calcium. (SCHERER. — In Lieb. Ann., 1850, 81, 375).

GaLLois caractérise l’inosite en la chauffant avec un peu d’azotate mercurique : il se produit un précipité jaune qui devient rouge par la chaleur et se décolore par refroidissement. Cette réaction est beaucoup moins sensible que la précédente. (N. GaLLois. — In « De l’Inosurie », p. 21-22, Mémoire, J. B. BAILLIÈRE et Fils, Paris, 1864).

(2) Nous tenons à préciser que le réactif de MiLLoN utilisé a été préparé selon la formule originelle de MizLoN, et non pas selon la formule — le plus souvent erronée — courammèënt indiquée dans les traités.

Formule selon MILLON

METCULE M eee ee NN ET 20 g.

ACILeRAZOTIQUE MSN 20 g. ”

après dissolution, étendre de deux volumes d’eau distillée,

SE y 0 cm#,025 d’acide azotique pur de densité 1,38 ; on mélange et étale le tout au moyen d’un petit agitateur de verre, porte au bain-marie bouillant et évapore à sec ; on laisse refroidir.

L'action oxydante de l’acide azotique est renouvelée par une nouvelle addition de 0 cm*,05 de ce réactif, qui est étalé sur tout le résidu. On évapore à nouveau et à fond au bain-marie ; à mesure de l’évaporation le résidu se boursoufîle en petites vésicules et prend une coloration rose-saumon ; on laisse refroidir.

Sur le résidu froid qui, s’il a été parfaitement traité et dans les conditions exactement précisées, ne renferme pas de mercure réduit, on ajoute 1 cm*,5 d’acide acétique pur et 0 cm°,75 de solution d’acétate de strontium à 10 g. pour 100 cm. On évapore à sec au bain-marie en répartissant le liquide sur tout le fond de la capsule. Il se développe au cours de l’évaporation une belle coloration rouge-corail.

La réaction de SCHERER-GALLOIS effectuée selon cette technique, simultanément sur des prises d’essai d’environ 1 mg.5 d’inositol du commerce et du principe extrait des feuilles de Viburnum Opulus, à été également positive dans les deux cas.

Conclusion. — Il n’a pas été possible de caractériser le Viburnitol dans les feuilles et les fruits du Viburnum Opulus L.. Nous avons seulement mis en évidence la présence dans les feuilles, et seulement en très petite quantité, d’un principe défini ayant tous les caractères d’un inositol inactif. Notre espoir, d'obtenir avec les fruits un rendement meilleur qu'avec les feuilles, ne s’est pas réalisé, et, malgré la grosse quantité de matière première mise en œuvre, nous n’avons rien pu en extraire.