Méthodes physiques

Les méthodes physiques comprennent:

la réfractométrie la densimétrie

A) REFRACTOMÉTRIE

La mesure de l'indice de réfraction a été utilisée en vue de l'appréciation des protéines du sérum sanguin : cet indice augmente proportionnellement à la concentration en protides. La détermination se fait en lumière monochromatique avec un réfractomètre type Féry ou Pulfrich à cuve de capacité importante (5cc,) ou avec l'appareil d’Abbe qui n’exige que 2 gouttes de sérum.

Reiss a publié des tables de calculs qu’il à établies en faisant intervenir des coefficients de correction pour les composés non protéiques et une moyenne pour les indices différents de l’albumine et de la globuline.

Ces cæfficients ont donné lieu à des critiques ; le facteur 0,00472 pour les albumines serait un peu faible et le coefficient de correction pour les composés non protéiques un peu fort. Ainsi rectifiée, la technique de Reiss donnerait des résultats exacts à 5 pour 1.000 près.

Cette méthode élégante et pratique présente cependant des causes d'erreur importantes qui reposent essentiellement sur la pré-

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sence dans le sérum de substances réfringentes à teneur très variable ; ce sont les lipides. Tant que ceux-ci se trouvent dans les ce pur É

limites normales l'erreur est négligable, mais lorsqu'ils augmentent elle devient considérable.

L'urée du sang a des incidences semblables mais plus atténuées.

Enfin le fait même de la définition d'un coefficient moyen entre albumine et globuline désigne le défaut de la méthode quand le rapport sérine-globuline se trouve sérieusement perturbé.

A titre d'exemple, voici quelques comparaisons de mesures exiraites d’un tableau que nous empruntons à MM. Traverse et de Praitère. (1)

Lipides Protides Réfractométrie 3.8 74,9 80,6 6,3 75,8 83,7 6.4 77 6 828 8,2 08,6 66,6 12 71 81 19,4 39,9 56,8 23/1 554 86 Urée Lipides Protides Réfractométrie 4,35 8,8 61,4 76,9 OT: 112 638 79.5

B) DENSIMETRIE

L'idée de déduire la teneur en protides du sérum de son poids spécifique est élémentaire et a été utilisée depuis longtemps.

La méthode a l’avantage de n'exiger que des petites quantités de sérum : 0 cc. 2 à 0 cc. 3 et d’être valable quelle que soit la valeur dn rapport sérine-globuline.

Nous ne ferons que mentionner les méthodes cinétiques qui déduisent de la vitesse de chute le taux des protides. L'évaluation de la durée de chute se fait dans un tube spécial entre deux repères situés à bonne distance l’un de l’autre (50-60 cm.). La goutte calibrée de sérum tombe dans un liquide de densité connue non miscible au sérum et l’on note au 1/5° de seconde près son passage devant chaque repère.

Le calcul se fait par référence à des solutions-étalons de sulfate de potassium rigoureusement titrées.

Cette technique présentée recemment par Polonowsky et Nordam ‘2: paraît à première vue très simple. Mais elle a J'incon-

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vénient à notre sens de nécessiter un appareillage assez compliqué et des produits chimiques difficiles à trouver à l’état de pureté requis.

Nous allons examiner en détail la méthode dite au ‘‘ sulfate de cuivre ” de Van Slyke et Philips (3:, particulièrement en honneur aux Etats-Unis depuis son emploi courant dans les laboratoires de campagne de l’Armée américaine pendant la dernière guerre en raison de sa rapidité.

C'est une méthode statique ; elle consiste à déterminer la po- Sition d'équilibre des gouttes de dimensions variables au sein d’un liquide.

Le principe consiste à faire tomber des gouttes de sérum dans des solutions de sulfate de cuivre de densités croissantes et exactement définies Une fois la densité du sérum déterminée une équation permet le calcul du taux des protéines totales par litre.

Dans la pratique, dans chacun des flacons de solutions cuivriques, on laisse tomber d’une pipette, une goutte de sérum ou de | ie Lorsque le sérum est plus lourd que la solution à essayer la goutte tombe au fond du tube aprés un arrêt trés court. S'il est plus léger, elle tombe également après un arrêt suivi d’une légére remontée. À densité égale il y a arrêt plus prolongé sans remontée.

Il faut noter que le sérum ne risque pas de se mélanger à la solution, une mince pellicule produite par le contact enrobant la goutte de sérum sans en altérer le poids spécifique pendant le temps nécessaire, 15 à 20 secondes à la lecture du phénomène, Après quelques essais, un manipulateur ayant un peu d'habitude saisit assez rapidement le phénomène d'iso-densité recherché.

Il faut reconnaitre qu'il est difficile de concevoir technique d'exécution plus simple, plus rapide et nécessitant un matériel aussi restreint.

Nous l’avons pratiquée de façon très suivie et nous avons dû constater qu'il n’est pas très aisé de saisir de manière non discutable l'arrêt franc de la goutte au sein du liquide.

À ce reproche d'ordre pratique s’ajoutent des considérations beaucoup plus sérieuses au sujet de l'équation proposé par Van Slyke.

Celle-ci s'exprime ainsi :

Protéines — 343 X (d — 1,0070)

Le facteur de correction 1,0070 étant le poids spécifique moyen de l’ultra-filtrat sanguin. La constante 343 établie par l'expérience a été ensuite corrigée par ses auteurs et remplacée par 360 en utilisant comme méthode référence la Kjeldahlisation. Signalons dès

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maintenant que l'exactitude de cette constante va dépendre de la valeur de la méthode de Kjeldhal. Si bien que ces deux éléments du calcul ont continué à subir des modifications qui les ont portées respectivement à 347,9 et 1,0071 puis à 389 et 1,0072 pour être arrêtés à 390 et 1,0074.

Discussion des Méthodes Physiques :

Une première critique d'ordre théorique paraît évidente : le déterminations ne visent de toute façon que des propriétés physiques du sérum ou de solutions aqueuses pures de protéines étroitement liées il est vrai, à leur teneur en protides. Mais, surtout dans les liquides pathologiques, et ce sont ceux-là dont l'étude est la plus intéressante interviennent des composés non protidiques qui faussent plus ou moins les résultats : les lipides dans les mesures réfractométriques, les autres éléments (urée, glucose, etc.) dan les mesures densimétriques.

De plus, et bien que certains essais aient été tentés dans ce! sens qui sont encore à l'étude, ces techniques ne peuvent servir! qu'au dosage des seuls protides totaux et non de leur fractions, albumine et globulines.

Enfin leur champ d'application est restreint ; sérum sanguin, à la rigueur liquides de ponction /ascite, plèvre/, mais ne s'éten pas aux liquides céphalorachidiens, urines. Cette espèce de polyvalence est encore une des qualités que le chimiste demande à toute méthode de dosage des protéines.

N.-B.- Signalons pour mémoire une propriété des sérums : la pression osmotique, qui se trouve également dans un rapport direct avec la concentration en protéines, mais qui ne peut servir à un véritable dosage, tout en étant intéressante en ce qui concerne le quotient albumineux.