Dosage des globulines

Elles sont précipitées par le sulfate d'’ammonium saturé etneutre: 1 volume de réactif pour un volume de solution, pour fairela demisaturation du milieu. Après 45 minutes, lecture.

c) Méthode de Dos Reis (14).

. Elle ne diffère de la précédente que par l'emploi pour la précipitation des protides totaux seulement, d'acide sulfosalicylique Ur

Pour le calcul des résultats, ces deux auteurs se réfèrent à des courbes construites à partir de solutions étalons de sérum sanguin : l’une pour les protides totaux, l’autre pour les globulines.

d) Méthode à l'acide nitrique.

Danet et Laisné (15) dosent les protéines totales par précipitation par l'acide nitrique pur et à froid de solutions dont la teneur est comprise entre 0 gr. 40 et 0 gr. 50 pour milie, soit :

Liquide pur ou dilué à l’eau physiologique 5 cc

Acide nitrique pur 0 cc 5

Après vingt minutes, agitation et lecture au photo-colorimètre avec écran rouge.

L'étalonnage se fait au moyen de mélange de sérums normaux ou mieux de liquide d’ascite ou de pleurésie séro-fibrineuse de titres déterminés par gravimétrie.

Si cette méthode convient bien à l’urine, au LCR, aux liquides pleuraux et ascitiques pauvres en lipides, il est préférable, de l'aveu des auteurs, de ne pas l'appliquer aux sérums, en raison de leurs taux variables en cénapses lipidoprotidiques qui s'opposent à la précipitation totale à froid par l'acide nitrique. Cette technique se limite au seul dosage des protéines totales, sans pouvoir être utilisée au dosage de la sérum-albumine après séparation des globulines.

Discussion générale des méthodes néphélémétriques

Nous avons essayé de façon attentive les trois dernières méthodes et nous avons été conduits à formuler un certain nombre d'observations concernant :

— les réactifs de précipitation, ë,

— les caractéres du trouble qu'ils produisent dans le milieu

étudié.

Deux facteurs qui, bien qu'en rapport direct, appellent des considérations distinctes sur la valeur des techniques proposées et qui, pour anticiper, détermineront par la suite les meilleures conditions théoriques d’une méthode néphélémétrique valable.

1°) Les réactifs ,

L'acide trichloracétique précipite quantitativement les protéines d'une solution, de même que l'acide nitrique à froid, mais celui-ci dans des limites déjà définies.

Quand au réactif d'Ujsaghi, il laisse en solution des quantités importantes de protides : en effet après la durée de 15 minutes prévue avant la lecture du trouble et même au-dessus les liquides soigneusement filtrés continuent à précipiter par l'acide trichloracétique ou la chaleur.

L'acide sulfosalicylique est nettement meilleur à ce point de vue mais demeure insuffisant.

2) Caractères des troubles obtenus.

a) Protides totaux :

S'il faut rejeter délibérément l'acide trichloracétique pour les raisons déjà mentionnées à propos du procédé Mestresa, on doit reconnaitre que l'acide nitrique, le réactif d'Ujsaghi et l'acide sulfosalicylique fournissent des troubles plus fins, homogènes et non grumeleux qui paraissent devoir se prêter à de bonnes déterminailons opacimétriques.

Nous nous sommes livrés à une étude approfondie de ces suspensions en nous attachant spécialement à la technique à l'acide nitrique, seul agent d'une précipitation totale. Voici nos constatations: immédiatement après l'affusion du réactif dans la solution protéinique les grains du trouble formé semblent très fins et répartis de manière homogène. Mais ils grossissent rapidement en s'agglomérant et à la 20° minute, temps optimum recommandé pour la lecture, : réaction terminée), le floculat se dépose au fond du tube. - Cette apparence devient d'autre part de plus en plus marquée à

mesure que la concentration en protides du milieu augmente. Dès lors, l'agitation qui précède la mesure ne suffit pas à homogénéiser convenablement le trouble.

L'analyse du phénomène à l’électro-photométre, appuyée sur les nombreuses expériences que nous avons effectuées, se traduit par.

1°, l'aspect progressif de la précipitation, c'est-à-dire que l'opacité d’un trouble donné augmente avec le temps.

2°) l'irrégularité de la courbe des troubles correspondants à des concentrations protidiques régulièrement croissantes.

De sorte qu'il n'existe pas, rigoureusement parlant, de palier

au niveau duquel la densité optique exprimant une opacité donnée demeure constante et qu'il devient d'autre part difficile d'établir

une courbe d'étalonnage définitive et fixe.

En d’autres termes, ces suspensions se caractérisent par l'inégalité et la grande taille des agrégats constitués par les précipités, et en conséquence par une instabilité et un manque d'homogénéité qui les rendent impropres à des mesures opacimétriques d’une grande précision.

Nous devons encore ajouter que le phénomène de tassement du floculat se produit déjà à une échelle évidemment très réduite dans la cuve du photomètre et qu'il ne manque pas de se traduire au cours même de la messure par de petites variations de la densité optique perceptibles à l'œil photo-électrique.

Nous concluerons en disant que sices techniques conviennent bien à l'évaluation des protides totaux, des LCR, des liquides de ponction, urines ou une simple approximation semble suffisante aux besoins de la clinique, elles sont moins recommandables pour le dosage précis des protéines du sang et l'établissement du rapport sérine-globuline.

b, Globulines

Le phénomène est absolument parallèle dans les techniques de dosage d'Ujsaghi et de Dos Reis des globulines par le sulfate d'ammonium à demi-saturation et toutes les remarques précédentes dont l'effet est de diminuer de façon appréciable la précision de la méthode néphélémétrique s'y appliquent également.

On ne peut manquer de regretter vivement ces inconvénients, quand l’on songe que de toutes les méthodes pratiques de dosage des protides et de leurs fractions dans les liquides organiques les plus divers, la méthode néphélémétrique était celle qui offrait au chinuste la solution élégante: la plus simple et la plus rapide.

Neanmoins, l'analyse critique que nous venons d'en faire nous aura-t-elle permis de dégager les conditions que doit remplir une technique néphélémétrique pour satisfaire à l'exigence majeure de la précision.

Ces conditions sont au nombre de deux :

l°) utiliser un procédé capable de provoquer la précipitation totale des protides

2‘) obtenir des troubles stables en cherchant à réaliser :