BUT DU TRAVAIL - MÉTHODES EMPLOYÉES

Le point de départ de ce travail étant l'hypothèse dont nous venons de parler, notre expérimentation s’est attachée à rompre l'équilibre du couple hypothalamo-sympathique afin de rechercher les modifications structurales et fonctionnelles de l’hypophyse ainsi que leurs répercussions dans d’autres domaines.

Divers procédés s’offraient à nous pour tenter de réaliser le déséquilibre entre le tonus sympathique et le tonus hypothalamique.

1° La suppression pure et simple du tonus sympathique, au moyen de lablation chirurgicale du ganglion cervical supérieur ou de sa paralysie à l’aide d'agents pharmacodynamiques appropriés. Effet présumé: assurer la prédominance absolue au tonus hypothalamique.

2° La suppression du tonus hypothalamique, soit en sectionnant la tige hypophysaire, soit en interrompant seulement les fibres hypothalamo-pituitaires, soit en les paralysant par des agents pharmacadynamiques appropriés. Effet présumé: accorder la suprématie au tonus sympathique.

3° Enfin l'excitation électrique ou lemploi d'agents pharmacodynamiques excitants soit du système sympathique, soit du système hypothalamique, permettant théoriquement de faire prédominer l’un de ces systèmes sans toucher. à l'autre. L'excitation électrique” des fibres hypothalamiques est cependant peu praticable chez le Lapin, animal que nous avons choisi comme sujet d’expérience, du fait de leur situation.

Nous avons dû renoncer à notre projet primitif qui était de réaliser au moins la plus grosse part de cette série d’ex-

périences pour en apprécier les résultats par des méthodes histologiques. Les répercussions que nous avons trés vite soupconnées et entrevues dans le domaine du système endocrinien et de quelques organes lympho-épithéliaux et hématopoiétiques au cours de nos premières expériences de gangliectomie, nous ont poussé à élargir d’abord systematiquement le champ de nos observations, et à restreindre par la suite celui de notre expérimentation.

C'est pourquoi nous avons limité notre travail à l'étude et à l'interprétation des modifications histologiques et physiologiques qui surviennent dans tout ou partie des organes et tissus suivants: hypophyse, thyroïde, sang, rate, follicules clos, thymus, pancréas, surrénales et sonades:

1° après excitation du cordon sympathique cervical au niveau du ganglion supérieur ;

2° après ablation du ganglion cervical supérieur.

Nous avons de plus étudié les modifications du métabolisme de base et de la régulation de l’eau après cette seconde opération.

Comme animal d'expérience nous avons choïsi le Lapin, dont le système endocrinien est assez bien connu au point de vue histologique. Sa taille et sa résistance au choc opératoire en font de plus un animal commode pour le genre d’expérimentation que nous voulions réaliser et bien préférable au Chien, utilisé dans les recherches de Roussy et Mostwcrr. Chez ce dernier animal en effet, les fibres sympathiques sont intimement mêlées sur une partie de leur trajet cervical aux fibres du nneumovastrique dans un tronc commun, le vaso-sympathique. Bien que les fibres sympathiques s’en détachent ‘un peu au-dessous du ganglion cervical supérieur, il est cependant difficile d'opérer sur celui-ci sans agir en même temps sur les fibres vagales, en particulier dans le cas d’une stimulation électrique qui diffuse toujours.

Afin d’avoir des animaux aussi semblables entre eux que possible, nous n’avons utilisé que des lapins mâles entiers, adultes, pesant. de 2 à 3 kgr. Nous avons toujours systématiquement écarté de nos expériences les animaux impu-

bères et les femelles. On sait en effet l'importance du rôle des gonades dans l’activité hypophysaire: le développement incomplet de celles-ci, les différents phénomènes physiologiques qui se passent au niveau des glandes sexuelles femelles (maturation folliculaire, ovulation, lutéinisation, gestation) et des glandes mammaires (lactation), modifient fortement la structure de l’hypophyse.

Avant toute opération, l'animal a été isolé pendant quelques jours afin de lui permettre de s'adapter aux nouvelles conditions de vie et d'alimentation auxquelles il devait être soumis par la suite, jusqu'au moment du prélèvement des pièces histologiques. Ces conditions ont toujours été les mêmes et cette précaution nous permet de supposer que tous nos animaux sont, théoriquement, dans le même état avant l'expérience. C’est donc à celle-ci que l’on peut, théoriquement aussi, attribuer les modifications observées par la suite.

De plus, nous avons sacrifié un grand nombre d'animaux normaux, n'ayant subi aucune opération et ayant vécu dans les mêmes conditions que les animaux opérés. pour utiliser leurs organes comme témoins.

Technique de l'excitation du sympathique

L'animal est endormi à l’éther : on pratique une incision médiane haute, et après avoir découvert le paquet vasculonerveux formé par la carotide, le pneumogastrique, le nerf de Cyon et le sympathique, on isole ce dernier, on le charge sur un fil et on s'assure de son identité en observant la dilatation pupillaire produite par son excitation électrique. On le dissèque ensuite très délicatement aussi haut que possible, c’est-à-dire légèrement au-dessus du pôle supérieur du ganglion cervical supérieur. Ayant effectué cette opération des deux côtés on sectionne entre deux ligatures chacun des cordons sympathiques cervicaux au-dessous du ganglion et l’on charge le bout central sur un excitateur de Lapicque relié à une bobine de Dubois-Reymond, en s’arrangeant pour que les électrodes se trouvent au niveau

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ou très légèrement au-dessous du ganglion cervical supérieur. On excite avec une intensité suffisante pour produire la dilatation pupillaire, et pendant des temps variables. Lorsque l'excitation est de longue durée, on interrompt celle-ci à intervalles réguliers pendant 2 à 3 minutes et on la reprend en augmentant légèrement l'intensité si celle-ci n’est pas suffisante à produire la dilatation de la pupille.

Après la cessasion de l'excitation, on sacrifie l’animal par une forte inhalation de chloroforme et on le saigne par incision du cœur après avoir ouvert le thorax. On prélève ensuite rapidement les pièces qu’on fixe au liquide de Bouin pour l’examen histologique ultérieur.

Technique de la gangliectomie

Les premiers temps de cette opération sont les mêmes que pour l'excitation du sympathique. L'animal étant endormi à l’éther, on pratique la dissection du sympathique et du ganglion cervical supérieur. Dans les premières interventions chirurgicales, nous avons vérifié l'identité du sympathique par l'excitation électrique en prenant pour test la dilatation pupillaire du même côté, mais nous avons par la suite abondonné cette méthode de vérification qui nous semblait de nature à causer des perturbations et précisément de sens inverse à celles que nous cherchions à provoquer par l’ablation du ganglion.

On sectionne le sympathique au-dessus et au-dessous du ganglion que l’on extirpe et aue l’on fixe par la méthode ordinaire au liquide de Bouin pour la vérification histologique. On pratique cette opération d’un ou des deux côtés suivant que l’on veut obtenir une énervation sympathique uni- ou bilatérale de la glande pituitaire On referme ensuite l’incision en rapprochant les deux lèvres au moyen de quelques points de suture avec un catgut fin. L'opération, généralement assez facile, ne doit pas durer plus de 1/2 heure à 3/4 d’heure et l'animal se réveille sans manifester aucun trouble.

Il est recommandé d'opérer aseptiquement. Cependant nous n'avons que très rarement trouvé de traces d’infection lorsque les précautions d’asepsie avaient été négligées.

Nous croyons devoir signaler que sur 28 animaux surveillés au point de vue de leur poids 2 seulement ont maigri à la suite de cette opération et que 3 autres sont morts (5), mais nous ne pensons pas devoir attribuer ces fee à l'opération, car le reste du lot a fort bien survécu et semblait en parfait état de santé au cours de la période postopératoire. Leur poids qui diminue assez souvent de 100

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Graphique indiquant les variations de poids d’un lapin à la suite de la double gangliectomie cervicale supérieure.

à 200 gr. au cours des deux premiers jours après l’opération, période pendant laquelle les animaux ne mangent généralement que très peu, remonte au chiffre d'avant l'opération et reste stationnaire par la suite (10 cas) cu augmente même (12 cas). Nous donnons ci-dessus un graphique pris au hasard pour rendre compte des variations de poids post-opératoires chez des animaux adultes. Moraro (87) à en effet signalé que la double gangliecto-

(*) Sur ces trois animaux, morts de 3 à 10 jours après l’opération, deux sont morts en période de vacances de cause inconnue (l’autopsie n'ayant pu être pratiquée), peut-être simplement faute de surveillance. Le troisième,

mort après 3 jours, présentait des traces d'infection de la plaie avec des signes de péricardite.

mie cervicale supérieure pratiquée chez le Porcelet de 29 à AI jours provoque un retard du développement général de son organisme par rapport à un témoin normal. Nous avons sacrifié tous nos animaux, opérés ou témoins, de la facon déjà indiquée à propos des animaux ayant subi l'excitation électrique du sympathique: après une forte inhalation de chloroforme provoquant l'arrêt des mouvements respiratoires, on ouvre rapidement le thorax de l'animal qu’on saigne complètement par incision du cœur. On prélève ensuite le tuber, l’ensemble des glandes endocrines, la rate, et un fragment d’appendice.

Technique Mmstologique

Ces pièces sont fixées au liquide de Bouin, incluses à la paraffine et débitées en coupes minces pour l'examen histologique. Afin de contrôler nos résultats par une méthode un peu différente, nous avons fixé les hypophyses de quelques animaux au mélange Zenker-formol, liquide qui semble meilleur pour la fixation de l’hypophyse, en particulier de la pars intermedia dont les granulations intracellulaires paraissent mieux conservées.

Pour l’examen de l’hypophyse nous avons toujours utilisé plusieurs méthodes de coloration: hématoxyline de WEIGERT - érythrosine; hématoxyline de HEIDENHAIN érythrosine; triple coloration de PRENANT, modifiée par FLORENTIN; MALLORY; et quelquefois la méthode de MAanNx qui ne donne pas de résultats très nets chez le Lapin.

Nous avons remarqué que lorsque le prélèvement de l’hypophyse n’était pas opéré de façon absolument parfaite, on trouvait dans la zone traumatisée, où simplement légèrement tiraillée par une adhérence conjonctivo-vasculaire, une quantité anormale de cellules fortement cyanophiles dont le noyau ne semble pas toujours avoir souffert. Ces cellules sont souvent mélangées à des cellules chromophobes et paraissent absolument normales, mais il y a lieu d’être extrèmement prudent quand il s’agit de les interpréter. Aïnsi qu’on le verra par la suite, nous avons des rai-

sons de penser que l'excitation mécanique provoque ou accélère le virage cyanophile des cellules de la pars anterior, et ceci peut être par l'intermédiaire de filets nerveux sympathiques, ce qui expliquerait que l’on n’observe pas un virage massif de toutes les cellules mais seulement des cellules innervées par les filets touchés.

La comparaison des organes prélevés sur les animaux ayant subi la gangliectomie ou l'excitation du sympathique avec ceux prélevés sur les animaux normaux permet d’établir les modifications expérimentales de la structure histologique de ces organes.

Nous avons rencontré de grosses difficultés en ce qui concerne l'appréciation des modifications hypophysaires.

La première réside dans le fait que les hypophyses de lapins témoins présentant toujours des différences plus ou moins grandes d’un animal à l’autre, il est souvent malaisé de faire la part des modifications structurales devant être rapportées à l’expérimentation. Ces différences individuelles sont probablement attribuables à diverses causes: état physiologique de l’animal, patrimoine endocrine héréditaire, conditions de vie et de nourriture actuelles et antérieures, infection par des parasites, très fréquents chez le Lapin.

L’isolement des animaux avant l’expérimentation avait pour but de réduire ces causes d’erreur au minimum: 1° en plaçant tous les animaux dans des conditions de vie aussi analogues que possible; 2° en les soustrayant à la plupart des excitations pouvant leur parvenir de l’extérieur, et principalement aux excitations sexuelles qui ont très vraisemblablement de fortes répercussions sur le fonctionnement et la structure histologique de la glande pituitaire. Nous ne nous dissimulons cependant pas que l’état d'isolement soit loin de correspondre au repos, ou à l’état de vie ralentie ou état basal qui serait l’idéal comme point de départ de l’expérimentation. Dans l'impossibilité où nous nous trouvions de définir avec précision et exactitude la structure normale de l’hypophyse du Lapin, il nous a d’abord fallu tenter de dégager de l’ensemble des séries

d'animaux témoins une image type, une sorte de standard, ne correspondant pas toujours à la réalité d’ailleurs, auquel comparer les hypophyses des animaux opérés.

La seconde difficulté relève des techniques de coloration. Nous avons utilisé plusieurs colorations différentes pour chaque série de coupes afin d'obtenir le maximum de renseignements sur la structure et l’activité de la glande. Beaucoup de méthodes de coloration, celle de MALLORY en particulier, donnent des résultats fort différents suivant la manière dont on les utilise. Même en respectant très exactement les temps de séjour dans chaque bain colorant et en opérant dans les mêmes conditions, la fixation élective de chaque couleur n’est pas toujours constante. Nous avons pu constater que différents facteurs interviennent.

D'abord la méthode de fixation, ce qui n’était pas pour nous surprendre. Mais pour des pièces fixées au liquide de Bouin, il est probable que sa température, la durée de la fixation et son ancienneté, la durée de séjour dans les alcools et la paraffine, la température de l'inclusion, la quantité d'acide picrique retenue, l'épaisseur des coupes et leur degré d’étalement interviennent.

Il est fréquent d'observer chez le Lapin des teintes qui ne sont pas franches, et nous avons eu beaucoup de peine à ranger certaines cellules dans l’une ou l’autre des espèces si bien décrites par les auteurs. Dans la majorité des cas, nous trouvions une feinte pourpre, intermédiaire entre le rouge des éosinophiles et le bleu des cyanophiles.

Il est indispensable de faire les examens histologiques à la lumière artificielle, que nous avons choisie d’un blanc laiteux en rejetant toute lumière légèrement jaunâtre qui change les tonalités, afin de nous placer toujours dans des conditions identiques permettant la comparaison des couleurs. De plus, nous nous sommes toujours rapportés à notre type standard et aux autres images pour en apprécier les différences et les points communs.

I faut d’ailleurs se borner à un examen assez rapide et à un grossissement relativement faible pour mieux saisir

une différence d'ensemble. Les forts grossissements révelent en effet une foule de détails qui, s’ils sont parfois intéressants, sont le plus souvent gênants et égarent l’observateur sur des points sans signification et risquent de l’entrainer à en donner une interprétation hasardeuse.

Je me suis donc attachée à examiner la presque totalité des coupes en série colorées par différentes méthodes, à un grossissement moyen afin d’avoir une idée d'ensemble de l'aspect de chaque glande et de n’aperçevoir que des différences assez notables pouvant avoir une signification que je m'efforcerai de découvrir et de discuter au cours de ce travail. -