QUATRIÈME TEMPS: LECTURE ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

( Se reporter au tableau |, sans perdre de vue que chacun des tubes à reçu en outre 1 ec. de système hémolytique.)

a) Tubes de réaction proprement dite (1 à 6).

La réaction est négative si tous les tubes sont trouvés hémolysés. On fait intervenir les tubes de contrôle lorsqu'il y a absence d’hémolyse dans un ou plusieurs tubes de la série.

b) Tubes-témoins sérum X (7 à 10).

S'il n'y a pas hémolyse, par exemple dans les tubes 7 et 8, on en concluera que le sérum X a fixé directement une partie de l’alexine, car les doses d’alexine contenues dans les tubes sont égales ou supérieures à la dose minima permettant l’hémolyse totale.

c) Tubes-témoins antigène (11 à 14).

Sauf pouvoir complémentaire appréciable de l’antigène, tous ces tubes doivent être hémolysés. En cas d'absence d’hémolyse dans un ou plusieurs tubes de cette série, on négligerait un nombre égal de tubes de réaction.

d) Tubes-témoins alexine (15 à 18).

Tous doivent hémolyser.

En pratique, M étant la somme des tubes non hémolysés dans les séries de contrôle, la réaction sera dite (N étant le nombre de tubes 1 à 6):

DOUREUSC EN nue si N—M=1 Faiblement positive.... si N—M=2 DORtEVEM TA He: si N—M=3 Fortement positive .... si N—M>3

Nous avons adopté la méthode de titrage d’A. Ur- BAIN, chaque tube non hémolysé correspondant à 5 unités d'anticorps.

Antigène

Pour nos réactions de fixation du complément, nous avons utilisé comme antigène une émulsion de streptocoques gourmeux tués par l’alcool-éther ; c'était soit un stock-antigène (constitué par de nombreuses souches de streptocoques gourmeux), soit un antigène constitué par une seule souche déterminée de streptocoque.

Le stock-antigène est préparé selon la technique suivante préconisée par A. UrBan:

« Les bactéries cultivées sur milieux solides, sont émulsionnées en eau physiologique, afin de les collecter. On centrifuge, puis on délaie les culots avec un excès d'alcool; on ajoute une partie égale d’éther et on laisse agir pendant 24 heures. On décante ensuite le liquide surnageant et le sédiment est mis à dessécher, sous le vide sulfurique à 37°.

Les bactéries cultivées en milieux liquides sont réunies par centrifugation. On opère, sur les culots, comme précédemment. Les germes secs sont broyés en les agitant mécaniquement avec des billes de bronze, dans des tubes de cuivre nickelé. La poudre ainsi obtenue conserve indéfiniment sa valeur antigène, à la condition d’être mise à l’abri de l'humidité. Pour obtenir l’antigène nécessaire à une réaction de fixation, on émulsionne cette poudre dans de l’eau physiologique à 9 p. 1000, à raison de 1 centigramme de corps microbiens pour 20 centimètres cubes d’eau physiologique. Pour avoir une émulsion très homogène, il est indispensable de la faire dans un ballon muni de perles de verre de différentes grosseurs. En agitant pendant quelques minutes le poids de microbes secs nécessaires avec quelques centimètres cubes d’eau physiologique, et en complétant ensuite au taux voulu, on obtient une suspension microbienne d'aspect colloïdal. Il y a lieu de remarquer qu'il faut environ 6 à 7 grammes de germes frais pour avoir 1 gramme de microbes alcool-éther secs ; l’émulsion que l’on utilise est donc 6-7 fois plus riche en ger-

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mes que l’antigène constitué de microbes à l’état frais... »

Comme autres antigènes, nous avons utilisé des streptocoques gourmeux provenant de plusieurs chevaux (Eponge, — Provins, — Suippes, — Dinan, etc., fournis par le Laboratoire Militaire de Recherches Vétérinaires) et tués par l’alcool-éther.

La technique de préparation est analogue à la précédente. Il suffit d’ensemencer 3 à 4 tubes de bouillon-sérum avec le streptocoque à utiliser; après 48 heures d'’étuve, ces cultures sont centrifugées, lavées, puis recentrifugées. Le culot de centrifugation est traité par l'alcool, puis par une quantité égale d’éther. Après 24 heures d'évaporation à l'air libre, l’alcooléther surnageant est aspiré et les germes sont desséchés sous le vide sulfurique. L’émulsion est préparée en diluant la poudre ainsi obtenue (un centigramme pour 20 cc. d’eau physiologique).

Expériences