TECHNIQUE
Pour étudier les substances hémolysantes proprement dites, il faut opérer dans des conditions telles qu'on soit à l'abri de toute action nocive due au défaut d'isotonie. Pour cela l'emploi des solutions de chlorure de sodium est devenu classique depuis HamBurGEr (on pourrait naturellement tout aussi bien employer une solution isotonique d’un autre sel non vénéneux pour le globule).
Le sérum sanguin de l'homme ayant un point de con-
gélation de — 0°,54 environ, on emploiera comme solution
isotonique la solution de chlorure de sodium à 9,1 pour
1 000 dont le A est égal à — 0°,55. Il y a souvent avantage pour mettre en évidence l’action d'un corps doué de propriétés hémolysantes peu énergiques à employer des solutions salées de concentration un peu moindre dans lesquelles le globule rouge légèrement gonflé est, en quelque sorte, préparé par l’hypotonicité du milieu vis-à-vis
de l’action d’un agent globulicide quelconque.
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La solution de NaCI à 7 pour 1 000 nous a donné dans ce but d'excellents résultats ; on sait d’ailleurs que pendant longtemps elle à été considérée comme la solution idéale pour la conservation des globules et qu'elle est encore employée à ce titre par beaucoup d’observateurs. La quantité de solution salée peut varier suivant les nécessités de l'expérience, nous avons presque toujours adopté la quantité de 5 centimètres cubes qui correspond à une dilution convenable pour une goutte de sang.
Le sang à employer (d'homme, de lapin, de cobaye, etc.) doit toujours être recueilli proprement pour éviter les ruptures de globules qui pourraient teinter le liquide et être une cause d’erreur. L’asepsie rigoureuse n'est pas indispensable lorsqu'on opère comme nous le faisions en peu de temps (quelques heures au maximum) car alors les actions microbiennes n'ont pas le temps de se produire. |
Pour recueillir le sang, quand il s'agissait de sang humain. nous avons presque toujours eu recours à la piqüre du doigt, après désinfection à l'alcool et évaporation rigoureuse. Pour le lapin, nous avons presque toujours recueilli le sang directement dans le cœur par ponction avec une seringue de Pravaz. Ce procédé facile permet de répéter souvent les prises de sang et un minimum de précautions suffit pour éviter l'infection de l'animal, difficile à ne pas produire par les saignées répétées dans les vaisseaux. L'innocuité de cette petite manœuvre est très réelle et sur plusieurs centaines de ponctions nous n'avons perdu que trois animaux.
Le sang à essayer devra presque toujours être lavé au
préalable dans une solution ‘chlorurée sodique, isotonique. Ce lavage qu'on fait rapidement avec un centrifugeur permet de conserver pendant plusieurs heures des globules prêts à être employés et il évite à coup sûr les coagulations dans les tubes où on a ajouté du sang ; de plus, il supprime l’action du sérum du sang qui peut être importante comme nous le verrons. Ce lavage se fait comme on sait en recueillant le sang dans de l’eau salée isotonique et en centrifugeant aussitôt ; les globules sont précipités au fond, on décante et on remplit à nouveau avec de l’eau salée : on centrifuge une deuxième fois et après décantation on remplace le plasma enlevé par les lavages avec de l’eau salée.
Pour étudier un liquide supposé hémolysant, nous avons généralement opéré de deux façons :
1° Ou bien il s’agit d'un liquide isotonique, et alors les globules peuvent être simplement mis à même dans le liquide : Se
2° Ou bien il s’agit d’un liquide non isotonique et alors plusieurs tubes à essai ordinaires contenant chacun 5 centimètres cubes de solution de chlorure de sodium à 7 pour 1 000 reçoivent un nombre déterminé de gouttes du liquide à essayer (ce nombre ne devant jamais dépasser 10 à 12 gouttes pour ne pas modifier d’une manière trop sensible l’isotonie du mélange). On laisse tomber dans chaque tube une goutte d’émulsion de globules (d'homme ou de lapin suivant la recherche), on agite pour bien mélanger les globules et on porte à l’étuve pendant un temps déterminé, ordinairement 2 heures.
Le rôle favorisant joué par la température de 37° est.
RÉPTAUR
considérable et il est on ne peut plus important de ne jamais négliger ce facteur.
Après séjour à l’étuve on centrifuge et on a alors un liquide clair. Si le liquide ajouté était globulicide, un plus ou moins grand nombre de globules a été détruit et cette destruction s’est traduite de deux façons: par la teinte du liquide variant du jaune pâle au rouge vif: par le volume du dépôt globulaire qui a été précipité au fond et qui est rassemblé sous forme d’un pan à cacheter. Au cas d'action globulicide très forte, le dépôt n'existe pas. le sang a été laqué.
Si au contraire le liquide essayé n’était pas globulicide on n’observe aucune coloration due à l’hémoglobine diffusée et le dépôt est volumineux.
Pour être bien certain qu'il s’agit de l’action globuhcide vraie d’une substance hémolysante pour le globule, il suffit de faire un tube témoin dans lequel le liquide essayé sera remplacé par une égale quantité d’eau distillée (lorsqu'on emploie la solution salée à 7 pour 1 000 on peut ajouter jusqu'à 1 centimètre cube d’eau distillée à 5 centimètres cubes de solution sans produire de destruction globulaire).
Quand'nous avons opéré avec des liquides déjà fortement colorés, comme certaines urines, nous avons toujours comparé la teinte obtenue après centrifugation avec celle d’un tube contenant simplement même quantité de lhiquide essayé sans addition de sang.
Indépendamment de toute modification liée à une affection quelconque, les globules humains nous ont tou- Jours paru beaucoup plus résistants aux différents agents
We
globulicides que les globules de lapin. Quand on opère avec des animaux sains toujours relativement jeunes, cette
résistance peut être considérée comme invariable. Il n’en
est pas de même quand on opère avec des globules hu-
mains provenant d'individus malades : la résistance glo-
bulaire pouvant varier avec les maladies comme nous
l'ont appris les recherches de Marassez, VAN-T-HOFF, Va- QUEZ sur ce sujet, un nouveau facteur très important entre en jeu dont il importe de tenir compte rigoureusement. -
Pacwrez. 2
