DEUST

en soufflant par la grosse extrémité de cette sorte de pipette ; on recommence jusqu’à ce qu'il ne reste qu'une quantité de liquide suffisante pour diluer le culot tout en lui laissant la consistance d’une goutte de sang.

Lorsque ce culot est peu abondant, il faut gratter le fond du tube pour y. puiser de quoi effectuer les préparations.

Etaiement. — HN n'est pas indifférent d'étaler les éléments du culot de façon quelconque. MM. Vidal et Ravaut préconisent le manuel opératoire suivant Prendre le liquide à examiner avec une pipette, en déposer une gouttelette sur la lame et l’étaler avec un fil de platine ou le bout d'une pipette fermée en cercles concentriques de plus en plus grands.

Ce mode d'étalement n'est utilisé par MM. Barjon et Cade que dans le cas d’une ponction peu riche en éléments cellulaires, d’un produit de centrifugation trop peu consistant ; à moins de telle circonstance, M. Barjon opère l’étalement des éléments à examiner avec le bord d'une lamelle rodée’ : la répartition des éléments cytologiques est ainsi plus régulière. Un bon étalement se réalise aussi par l'emploi d’une pince spéciale construite sur les indications de M. Barjon; cet instrument est maintenant d’un usage courant dans le laboratoire de la clinique de M. le professeur Bondet.

Dessication. — Entre l'étalement et la coloration, la dessication constitue une étape à laquelle on ne saurait trop prêter attention : insuffisante, elle permet aux solutions aqueuses et autres employées dans la suite des manipulations d'entraîner hors de la lame des éléments

figurés, d'appauvrir d'autant la préparation. Peut-être même les inconvénients sont-ils plus grands encore, la formule leucocytaire peut-elle être modifiée dans sa nature, car la rapidité d'adhésion à la lamelle des polynucléaires, des lymphocytes, des cellules endothéliales. des hématies, etc... n’est pas démontrée égale pour chaque sorte de cellules ; une catégorie de ces éléments peut donc être diminuée par les lavages en plus forte proportion que les autres, d'où modification de la formule et cause d'erreur. MM. Barjon et Cade font subir aux préparations une double dessication : la première immédiate par agitation rapide à l'air libre ou à 0"50 environ au-dessus de la flamme d'un bec Bunsen; elle est suivie d'une seconde dessication, lente, sous une cloche de verre, à l'abri des poussières atmosphériques ; les préparations sont ainsi abandonnées généralement 24 heures: mais au bout de 12 heures, de 6 heures même, la dessication peut, à la rigueur, être considérée comme suffisante.

Fixation. —Nous pouvons alors procéder à la fixation ; notre fixateur de choix est l'alcool-éther (fixateur de Nikifforoff) ; nous le préférons au chloroforme (méthode de Josué) que préconise M. Ravaut et dont M. Audibert fait l'éloge : les préparations obtenues par ce procédé de fixation nous ont toujours présenté"des éléments cellulaires plus vacuolés, plus déformés, bref plus altérés que par l'emploi du réactif de Nikifforoff.

Théoriquement la fixation n'est complète qu'au bout de deux heures ; mais si l’on est pressé de connaître les résultats de l'examen, une demi-heure, un quart-d’heure suffisent à la rigueur.

ED pes

Coloration. — Sur la préparation ainsi fixée, de quels réactifs colorants allons-nous faire usage? L'hématéine éosine nous paraît le colorant de beaucoup le plus simple en ses manipulations et le plus constant dans ses résultats.

Nous laissons d'abord baigner la préparation dans une solution alunée d'hématéine ammoniacale à 1 °/0 ; la durée de ce premier bain peut être de 4 à 5 minutes; il ne faut pas craindre une surcoloration ; l’hématéine, étant | données ses affinités pour la nucléine colore les noyaux seuls en violet foncé. Après un lavage à grande eau nous plongeons la préparation dans une solution aqueuse d’éosine à 1 °/ : le protaplasme se teint en rose; là non plus il ne faut pas redouter une surcoloration et laisser la préparation dans l’éosine moins de cinq minutes.

Il semblerait, en ces recherches où les leucocytes jouent le plus grand rôle, que le triacide d’Ehrlich doit être le colorant de choix, le triacide composé par exemple de fuchsine, de vert de méthyle et de jaune orange : à côté d’autres avantages en effet, le triacide colore les granulations des éléments cellulaires et principalement des neutrophiles. La mise en évidence des granulations est quelquefois le plus sûr moyen de reconnaitre les polÿnucléaires altérés ; le réactif d'Ehrlich permet aussi de dépister facilement les leucocytes éosinophiles dont les granulations, dans la pièce montée sur baume, ne sont plus rouge vif (par action de la fuchsine acide) mais lie de vin. Telle est l'opinion de beaucoup d’autres : MM. Barjon et Cadese montrent au contraire moins enthousiastes de la méthode. Après

de nombreux essais, l'emploi minutieux des divers produits chimiques entrant dans la composition du colorant, produits successivement commandés dans les divers centres de fabrication, ii n’ont eu que des résultats inconstants. Même parmi les flacons arrivés tout fraîchement préparés de chez Gübler (Leipsig) quelquesuns renfermaient un réactif absolument inutilisable. M. Audibert (Les globules éosinophiles du sang; Presse Médicale, 29 octobre 1902) a rencontré lui aussi beaucoup de mécomptes dans la mise en pratique de la techrique tracée par l’auteur allemand. Il signale « les multiples inconvénients d'une méthode qui doit, en grande partie, son renom à la réputation de celui qui l’a lancée et à l’admiration constante et peut-être intempestive des nombreux élèves jaloux d’être agréables au maitre. » Ses griefs peuvent se résumer ainsi :

1° La méthode allemande exige des produits de première qualité ;

2° Leurs manipulations de préparation sont très laborieuses, très compliquées ; mieux vaut encore prendre le triacide tout fait chez Gübler à Leipsig; mais le réactif s'altère au bout de 5 à 6 mois;

3° La fixation qu’exige la coloration est délicate, elle exige des appareils spéciaux dont ne dispose pas le personnel de tous les laboratoires ; on peut employer le réactif de Josué, il est vrai. (Mais nous avons vu les raisons qui déterminent MM. Barjon et Cade à rejeter l'emploi du chloroforme) :

4 Le temps de la coloration est trop variable et Sabrazès (Congrès de Lille 1899), le dit des plus élastiques : quelquefois 5 minutes représentent un maxi-

Lo, =

mum, d’autres fois 10 où 15 heures suffisent à peine. De plus, les noyaux se colorent souvent difficilement : ils sont bleu pâle, leurs contours mal assurés et la distinction est souvent difficile entre des polynucléaires et des mononucléaires neutrophiles ;

5° La technique de coloration est très délicate ;

6° Il est impossible de connaître constamment le pouvoir colorant de son triacide.

Est-ce à dire que nous rejetions formellement l'emploi du triacide d'Ehrlich? Non, car en certaines circonstances, il peut rendre au cytologiste de réels services : par exemple, dans une préparation où les polynucléaires ont subi certaines altérations, le triacide colorant leurs granulations neutrophiles permettra de les différencier d'avec les cellules endothéliales, opération, qu'en ces conditions, d’autres réactifs rendent difficile et peu sûre. Mais de tels cas, si l’on se conforme à la technique du laboratoire de la clinique du professeur Bondet, deviennent exceptionnels et ce n'est qu'exceptionnellement aussi que nous employons le réactif d'Ehrlich.

Préparations sèches et préparations bunides. — Avant de clore ce chapitre de la technique cytologique, nous voulons essayer de trancher une question qui récemment encore divisait les auteurs. À Paris MM. Widal et Ravant se cantonnaient dans les préparations sèches : MM. Barjon et Cade, à Lyon, essayaient de remédier aux défauts de certaines préparations sèches, où s’altèrent toujours un peu les corps figurés, par la confection simultanée de préparations humides, en quelque sorte

vivantes : ils fixaient les éléments cellulaires conservés dans leur propre sérum par des vapeurs d'acide osmique et les coloraient de diverses facons. Ces préparations étaient montées sur des lames-cellules creuses recouvertes d’une lamelle, fermées à la paraffine. Les préparations ainsi obtenues, déclaraient-ils, sont très belles et inaltérables.

Or si ce premier qualificatif est exact, l'intégrité de la préparation — les autres lyonnais le reconnurent euxmêmes — n'est que transitoire et, à moins d’une conservation rigoureuse à l'abri de la lumière, l'imprégnation des éléments par le bleu de méthylène s’efface : la préparation se décolore.

Aussi toutes les préparations sur lesquelles sont établies les formules cytologiques jointes à plus de 200 observations — leur collection — sont des prépations sèches et inaltérables.

Le procédé de la préparation humide ne doit pourtant pas être entièrement délaissé car il possède de réels avantages : il ne déforme pas les éléments cellulaires, en permet donc une qualification plus aisée, partant il constitue dans certains cas une précieuse ressource, Aussi, toutes les fois qu'il le sera possible, on fera d’un même liquide pathologique des préparations sèches et des préparations humides.

ttes Li NPC

or" +.

“px à |" STARS,

PLOIDO Lu