TECHNIQUE
Nous nous sommes imposé d'obtenir le plus rapidement possible une culture pure du germe suspect pour en rechercher la virulence.
Dans quelques cas, le développement simultané de plusieurs espèces microbiennes avec le bacille diphtérique et la confluence des colonies en rendit l’isolement impossible dès la première culture. Pour y arriver, 1l eût fallu de nouveaux ensemencements et une nouvelle attente de plusieurs jours. Ces cas ont été éliminés systématiquement en raison de l’atténuaton possible du bacille pendant les diverses manipulations, et de l'incertitude où l’on est de lui rendre à coup sûr sa virulence, même par un entraînement intensif.
L’ensemencement des exsudats divers fut fait sur sérum coagulé, qui est plus propice au développement du baaille diphtérique qu’à celui d’autres germes, et en permet un isolement plus facile. Il est à ce point de vue préférable au milieu de Loœffler, qui est très
nutritil, grâce à sa composition (sérum peptonisé et macération de viande) et facilite le développement simultané de beaucoup d'espèces microbiennes.
Sur sérum coagulé le bacille diphtérique pousse moins vite et moins abondamment que sur milieu de Loœffler, et son développement peut être retardé jusqu'à 24 heures et même 48 heures. Ces retards de développement, déjà signalés avec le milieu de Lœffler (1), sont 101 plus manifestes, et une culture, négative après 24 heures, doit être remise à l’étuve pour être examinée à nouveau le lendemain.
L'aspect des colonies et leur abondance donnent des indications précieuses mais ne permettent en rien d'affirmer la nature des germes cultivés.
Leur examen après simple coloration, à la toluidine par exemple, donne des renseignements précis sur les caractères morphologiques essentiels du bacille forme longue, moyenne ou courte, ramifiée, en massue, aspect en V, en L, en palissade, en broussailles, en paquet d’épingles…
Pour un œil exercé, ils sont faciles à saisir et constituent des caractères suffisamment nets pour que sur eux se base le diagnostic. Aussi, pour se placer essen-
tiellement dans les conditions du diagnostic journalier,
où le bactériologiste est appelé par ces seuls caractères à donner des conclusions, doit-on considérer comme germe suspect « tout bacille qui pousse sur sérum
(1) Meunier (M.), Nouvelles Recherches sur les bacilles diphtériques vrais et les bacilles pseudodiphtériques (Bull. de l’ Acad. Méd. de Belgique, 31 mai 1913).
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coagulé et présente les caractères morphologiques du bacille diphtérique ».
Chaque bacille fut ensemencé en bouillon Martin et sa culture de 24 heures fut inoculée au cobaye, à la dose constante de « 1 centimètre cube », pour en vérifier la virulence.
On sait que cet animal, malgré quelques réserves (1) et en s’entourant de certaines précautions, est le véritable réactif expérimental de la diphtérie : les cobayes employés doivent toujours être neufs et avoir de préférence un poids moyen, oscillant entre 230 et 500 grammes. Les très gros cobayes doivent être laissés de côté, car ils présentent des réactions plus atténuées et par conséquent plus difficiles à saisir. Nous avons toujours pratiqué l’inoculation sous-cutanée qui donne les résultats les plus constants et les plus comparables.
Les animaux inoculés furent maintenus en observation pendant trois semaines environ, de façon à saisir les réactions, même tardives, attribuées par certains auteurs aux toxones (2). Toute mort fut suivie d’autopsie consignant les principales lésions observées.
Comme complément à la recherche de la virulence, on nota les autres caractères des bacilles inoculés et lon pratiqua la plupart des autres méthodes de différenclation pour se rendre compte de la valeur exacte
(1) T. Suir, Degrees of susceptibility to diphteria toxin among guinea-pigs (Journ. of med. Research, t. XIII, f. 3, février 1905).
(2) Mapsew, La Constitution du poison AphANONE (Ann. de l'Inst. Pasteur, XIII, 1899, p. 569 et 801).
que l’on peut attacher à chacune d'elles dans la diagnose.
Parmi elles, on a laissé volontairement de côté l’agglutination (1), la réaction de fixation (2) et l'épreuve de Pfeiffer, qui ne sont pas d’application courante en raison de leur infidélité dans la diphtérie ou de leur technique longue et délicate.
Les renseignements présentant un réel intérêt ont été consignés, ce sont :
19 L'indication d’origine du bacille (cas clinique);
29 La rapidité de développement de la culture sur sérum coagulé;
30 Les associations microbiennes au moment de l'examen;
40 La forme du bacille;
29 La coloration à la méthode de Gram;
60 La recherche des grains de Neisser;
79 L’acidification en bouillon peptoné;
89 La fermentation des sucres;
9 Les résultats de l’inoculation au cobaye;
100 La conclusion sur l’activité du bacille inoculé;
119 La conclusion sur la variété du bacille.
On trouvera ces renseignements résumés dans les tableaux ci-après.
{1} Nrcozas, L’Agelutination du Bacille de Lœæffler par le sérum antidiphtérique est-elle constante? (Soc. de Biologie, 4 juin 1898.)
(2) LamgorrTe, Les Fensibilisatrices des bacilles diphtériques et pseudodiphtériques (Centralbl. {. Bakt., XXX, 1901).
Morse, The application of the complement-fixation reaction to the diphteria group of organisms (Journ. of inf. dis., t. XI, nov. 1912, p. 433).
{ © © RAPIDITÉ . ; iMAINS | AGIDITÉ CR di GULTURE PURE DEUE us Mi .\} = = CAS CLINIQUE vel À du GRAM de en B. GLUCOÀ ÊRS aeëeveloppe- et associations É Re | Axel ment, bacille Nreisser peptoné ne 1 Angine 18 heures Culture pure Moyen T a pseudomembraneuse 9 Angine catarrhale 18 heures Culture pure Court Faible- |Peu nets = ment + 3 [Angine pseudomem -| 48 heures Culture pure Moyen E Te braneuse avec adénopathie très marjuée.
4 Angine 18 heures Culture pure Long Très ce cu pseudomembraneuse peu abondante faible- . ment + 5 Angine 18 heures Culture pure Moyen Irrégu- 2e Le pseudomembraneuse lièrement 6 Angine pseudomen-| 18 heures Culture pure Long oz ne braneuse et croup 7 Angine 18 heures Culture pure Moyen | Irrègu- — re pseudomembraneuse lièrement »
8 ADO 18 heures Culture pure Court Faible- == Eé ment :
9 Angine pultacée 15 heures Culture pure Court — Peu nets — 10 Angine 18 heures B. Lœffler Court Faible- — Faiblepseudomembraneuse et staphylocoque ment ment 1 Angine — ? — 18 heures B. Lœæffler Moyen Faible- L Faibleet coccus Brisou ment ment 4 SE 1? ANÉMe NE 24 heures Culture pure Moyen ae + ni Colonies peu nombreuses 15 Angine catarrhale 18 heures |B. Lœffer très rare Long Irrégu- : Faible- | Faible-ll avec adénopathie et streptocoque lièrement ment raent | très marquée ce BEL. À 1% Angine pultacée 18 heures B. Lœfller, Moyen | Irrégu- lb + Et avec adénopathie streptocoque lièrement | très marquée et microcoque + FT x = 7 a ———— 1) 1 ngine pultacée 18 heures Cuiture pure Court de 2 ie 0 |
POIDS LÉVU- du ; GONCLUSION CONCLUSION RÉACTION LOCALE MORT LOSE cobaye Activité sur le bacille À inoculé + 250 gr. Œdème En 40 heures Très marquée B. diphtérique après {8 heures Congestion des organes (surrénale, rein, foie) sa 350 gr. Néant Néant Nulle B. diphtérique avirulent ss 430 gr Œdème En 40 heures Très marquée B. diphtérique * après 14 heures Congestion des organes ET 380 gr. |Fort œdème avec for- Néant Marquée B. diphtérique 4 mation d’eschare non guérie le 15° jour.
5 340 gr Fort œdème disparu Néant Marquée B. diphtérique le 8° jour as 350 gr Pas d’ædème En 16 heures, conges-| Très marquée B. diphtérique tion vasculaire très « marquée, épanchement pleural sanguinolent + 360 gr Œdème En 40 heures Très marquée B. diphtérique après {8 heures Congestion surrénale 3% 450 gr Œdème non disparu Néant Marquée B. diphtérique le 8e jour FE 500 gr Néant Néant Nulle B. Hoffmann |raible- 400 gr Néant Néant Nulle B. diphtérique avirulent — ment B. Hoffmann — 540 gr Néant Néant Nulle B. diphtérique avirulent — B. Hoffmann g 420 er Fort œdème Néant Marquée B. diphtérique non disparu | le 8° jour fraihle- 440 gr Léger œdème Néant Marquée B. diphtérique ment le 2° jour, disparu le 5° jour
52 360 gr.
àa30 gr.
Léger œdème
Léger œdème de 2° jour, disparu le 5° jour
En 36 heures, surrénales,hémorragiques épanchement pleural, séro-hématique.
Très marquée
Néant
